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Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil / Células-tronco (CT) são células autorrenováveis e não especializadas, com o
potencial de diferenciação multidirecional. Células-tronco de tecido adiposo (CT-TA)
são um tipo de células-tronco adultas multipotentes, de fácil isolamento e cultura.
Nos últimos anos, CT-TA têm mostrado grande potencial para engenharia de tecidos
e terapias baseadas em células. Apesar do interesse em aplicações clínicas deste
tipo de célula, os mecanismos moleculares fundamentais a sua autorrenovação e
diferenciação ainda não foram completamente elucidados. miRNAs são pequenos
RNAs não-codificadores, com 21-25 nucleotídeos de comprimento, que tem se
mostrado como importantes reguladores da expressão gênica em nível póstranscricional.
miRNAs podem atuar por meio de clivagem direta de mRNAs alvo ou
através da repressão da tradução, dependendo da complementaridade entre o
mRNA e a sequência do miRNA. Perfis de miRNAs de CT adultas sugerem que
estes pequenos reguladores podem contribuir para as propriedades intrínsecas das
CT. Para entender melhor os mecanismos de ação dos miRNAs em CT-TA, miRNAs
associados ao polissomos de CT-TA foram isolados durante a diferenciação celular.
Procurando miRNAs reguladores das etapas iniciais de diferenciação ou envolvidos
na autorrenovação de CT, as culturas de células foram induzidas a diferenciação
adipogênica durante 72 h. O lisado celular foi submetido à ultracentrifugação em
gradiente de sacarose para separar monosomos, polissomos e fração livre de
ribossomos. O RNA total associado aos ribossomos foi extraído, os fragmentos de
RNA (<200 nt) foram enriquecidos e a seleção de tamanho de fragmentos de RNA
apropriados ocorreu durante a preparação das amostras para o sequenciamento em
larga escala. As amostras foram sequenciadas utilizando a plataforma SOLiD ™, e
as frações polissomais de culturas Não Induzida e 72h de indução foram
comparadas e dezesseis miRNAs foram identificados. miRNAs encontrados em um
trabalho prévio do grupo foram adicionados a esses dados, e sete miRNAs (hsamiR-29b-1-5p,
hsa- miR-29c-5, hsa-miR-30c-5p, hsa-miR-143-5p, hsa-miR-210-3p,
hsa-miR-210- 5p e hsa-miR-6775- 5p) foram testados por RT-qPCR para confirmar a
expressão diferencial, sendo que um deles (hsa-miR-210-5p) mostrou diferença
estatisticamente significativa. / Stem cells (SC) are self-renewing and non-specialized cells with the potential of
multi-directional differentiation. Adipose Stem Cell (ADSC) is a type of multipotent
adult stem cell, easy to isolate and culture. In the past few years, hADSCs have
shown great potential for tissue engineering and cell-based therapies. Despite the
interest in clinical applications of this kind of cell, the molecular mechanisms
underlying their self-renewal and differentiation have yet to be fully elucidated.
miRNAs are small noncoding RNAs, 21-25 nucleotides in length, that have been
shown to be important regulators of posttranscriptional gene expression. miRNAs can
act through direct cleavage of target mRNAs or through translational repression,
depending of complementary pairing between the mRNA and miRNA
sequence.miRNA profile of adult SCs suggests that these small regulators can
contribute to the intrinsic properties of SCs. To better understand the mechanisms of
action of miRNAs in hADSCs, we isolate miRNAs associated to polysomes of hADSC
during cellular differentiation. Looking for miRNAs regulators of early steps of
differentiation or involved in ADSC self-renewing, cell cultures were induced to
adipogenic differentiation for 72 h. The cell lysate was submitted to ultracentrifugation
on a sucrose gradient to separate monosomes, polysomes and the fraction free of
ribosomes. The total RNA associated to ribosomes was extracted and the RNA
fragments (<200 nt) were enriched and the size selection of appropriate RNA
fragments occurred during the preparation of samples for deep sequencing. The
samples were sequenced using SOLiD™ platform, and polysomal fraction of cell
cultures non induced and 72h of induction were compared and sixteen miRNAs were
identified. miRNAs found in a previous work of our group were added to these data
and seven miRNAs (hsa-miR-29b-1-5p, hsa-miR-29c-5, hsa-miR-30c-5p, hsa-miR-
143-5p, hsa-miR-210-3p, hsa-miR-210-5p e hsa-miR-6775-5p) were tested by RTqPCR
to confirm differential expression, and one of them (hsa-miR-210-5p) showed
statistical significant difference.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/8977 |
| Date | January 2014 |
| Creators | Origa Alves, Ana Carolina |
| Contributors | Marchini, Fabrício, Morello, Luiz Gustavo, Rebelatto, Carmem, Dallagiovanna, Bruno, Naya, Hugo |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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