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Previous issue date: 1999-03-01 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientifico e Tecnologico / Foram desenvolvidos três sistemas de genotipagem multilocos (sistemas Multiplex) semi-automatizados, baseados na amplificação e análise simultânea de locos microssatélites via florescência, para análise genética de espécies do gênero Eucalyptus. Tabelas de frequências alélicas e estimativas do conteúdo de informação genética foram geradas para seis espécies comercialmente importantes do gênero Eucalyptus (subgênero Symphyomyrtus). Inicialmente, microssatélites desenvolvidos a partir de genótipos de E. grandis e E. urophylla foram avaliados quanto à especificidade de amplificação. Dentre os locos que apresentaram boa qualidade de amplificação, 11 foram selecionados para o desenvolvimento de sistemas Multiplex. Três sistemas Multiplex, comportando cada um a análise simultânea de três locos, foram selecionados. Foi estudado o tamanho mínimo de amostra necessário para se obterem estimativas acuradas da heterozigosidade de cada loco. Para isso, foram genotipados 192 indivíduos de E. grandis provenientes de uma população de melhoramento. Com essa informação, avaliou-se o comportamento de estimadores para heterozigosidade esperada com vários tamanhos de amostra, analisando-se a sua variância por meio da sua fórmula exata e por reamostragem numérica. Concluiu-se que uma amostra de 64 indivíduos dessa população seria satisfatória para estimar a heterozigosidade esperada com boa precisão. Os três sistemas Multiplex foram utilizados para genotipar indivíduos provenientes de cinco procedências de E. grandis. Com os dados genotípicos, foram construídas tabelas de frequências alélicas para cada loco e procedência, além de serem registrados 0 número de alelos/loco e a amplitude alélica e estimados os parâmetros heterozigosidade esperada, conteúdo de informação de polimorfismo, probabilidade de identidade e poder de exclusão, os quais indicaram que os locos utilizados possuía alto conteúdo de informação genética. Foram ainda estimadas as distâncias genéticas de Nei entre as procedências; uma AMOVA realizada entre as procedências indicou variação significativa entre elas, embora a maior porção da variabilidade fosse encontrada dentro de procedências. Em seguida, os sistemas Multiplex foram otimizados e caracterizados para outras cinco espécies do gênero Eucalyptus: E. camaldulensis, E. dunnii, E. globulus, E. saligna e E. urophylla. As estimativas dos parâmetros de informação genética da maioria dos locos indicaram que eles são apropriados para genotipagem de indivíduos dessas espécies. Finalmente, os sistemas Multiplex foram utilizados na avaliação de uma população de melhoramento de E. urophylla e de uma coleção de clones-elite, em que foi possível a detecção de erros de identificação do material genético, além de uma avaliação da diversidade genética e da similaridade entre clones. / Three semi-automated multilocus genotyping systems, based on microsatellites, were developed for the analysis of Eucalyptus species. Allele frequency tables and estimates of the genetic information content of these loci were generated for six economically important species of Eucalyptus (subgenus Symphyomyrtus). A set of microsatellites, developed from E. grandis and E. urophylla genotypes. was evaluated based on their PCR amplilication quality and transferability across species. Eleven microsatellites and tifteen combinations of three Ioci were tested. Among these, three triplex systems were chosen. The minimum number of individuals necessary to obtain accurate estimates of He was evaluated. A population of 192 individuals of E. Grandis was typed with six microsatellites and the behavior of the estimate of He with increased sample sizes was analyzed using the gene diversity variance formula and numeric resampling. Congruent results using both approaches showed that a sample size of 64 individuals would be appropriate to estimate He with good accuracy. The multiplex systems were used to type individuals from live Eucalyptus provenances. Allele frequency tables were generated for every locus, and estimates of parameters of genetic information content were obtained (He, PIC, I and Q). AII loci showed to be highly informative with average values of He (0,85), PIC (0,84), combined Q (99,99%) and combined I (10-14). Nei's genetic distances estimated among provenances. An AMOVA showed that there is significant genetic variation among provenances. Although the majority of the variation was found within provenances. The multiplex systems were then optimized and evaluated for other tive species of Eucalyptus: E. camaldulensis, E. dunnii, E. globulus, E. saligna and E. urophylla. The estimates of genetic information content parameters showed once more that these Ioci are highly appropriate for genotyping Eucalyptus species. As a final step to evaluate the usefulness of these genotyping systems, a breeding population of E. urophylla and a collection of elite clones were analyzed. Several clonal identification errors were detected within this population. Based on the multilocus genotypes, an evaluation of the genetic variability and similarity among clones was also performed.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:localhost:123456789/12087 |
| Date | 01 March 1999 |
| Creators | Kirst, Matias |
| Contributors | Alfenas, Acelino Couto |
| Publisher | Universidade Federal de Viçosa |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFV, instname:Universidade Federal de Viçosa, instacron:UFV |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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