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Previous issue date: 2011-12-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The leaf ethanolic extract of Cissampelos sympodialis showed promising activity in
different animal models of asthma. Several alkaloids have been isolated and identified in the
extract, including warifteine and methylwarifteine (bisbenzylisoquinoline), as well as
milonine (morphinandienone). In this work we describe the development and validation of a
method for simultaneous quantification of chemical markers in ethanolic extracts applied to
the study of seasonality and isolation of two bisbenzylisoquinoline alkaloids. Already for
milonine, warifteine and methylwarifteine were isolated, purified and quantified in crude
ethanolic extracts of leaves using a methodology developed and validated. The warifteine and
methylwarifteine were isolated from total alkaloid fraction of roots (TAF-r) of C. sympodialis,
whereas that the milonine was isolated from the TAF-l. The structural identification was
performed by Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy of 1H and 13C, mass spectrometry
and infrared spectrometry. The method made use of high performance liquid chromatography
with ultraviolet detection (278 nm) using a reverse phase column C18 (250 x 4.6 mm, 5mm)
and a mobile phase mixture of water-triethylamine (0,05%) (A) : methanol (B) in order
gradient: 0-5 min. (60%), 5-15 min. (72%), 15-25 min.(80%), 25-30 min. (60%). at a rate of 1
mL / min. and running time of 30 min. The chromatographic method was validated in
accordance with the recommended resolution of 899 of Agência Nacional de Vigilância
Sanitária, and was linear in the concentration range used (2-100 mg / mL), selective (with
good separation between the three chromatographic peaks and interfering) and robust. The
calibration model used was of standard addition. In the study of seasonality of the markers
was observed that there was significant decrease in the concentration of milonine, warifteine
and methylwarifteine between February and April. These prominent decreases between the
months of February and April for the three molecules coincide with the fruiting period of the
plant being observed the appearance of warifteine and methylwarifteine alkaloids in the fruits.
This observation suggests the need of the biosynthesis of these alkaloids for the fruits.
Through chromatographic and spectrometric techniques was isolated and identified FAT roots
of C. sympodialis a mixture of the epimers 7 - desmetilroraimine and 1' - epi - 7'-
desmetilroraimine bisbenzylisoquinoline alkaloids that are inedited in the literature. / O extrato etanólico das folhas de Cissampelos sympodialis Eichl mostrou promissora
atividade em diferentes modelos animais de asma. Vários alcaloides têm sido isolados e
identificados no extrato, incluindo warifteína e metilwarifteína (bisbenzilisoquinolínicos),
assim como milonina (morfinandienônico). Nesse trabalho descrevemos o desenvolvimento e
validação de método para quantificação simultânea dos marcadores químicos em extratos
etanólico aplicado ao estudo da sazonalidade e o isolamento de dois alcalóides
bisbenzilisoquinolínicos. Os alcalóides milonina, warifteína e metilwarifteína foram isolados,
purificados e quantificados em extratos etanólico bruto das folhas através de metodologia
desenvolvida e validada. A warifteína e metilwarifteína foram isolados da fração de alcaloides
totais das raízes (FAT-r) de C. sympodialis, enquanto a milonina foi isolada da FAT-f. A
identificação estrutural dos alcaloides foi realizada por espectroscopia de Ressonância
Magnética Nuclear de 1H e 13C, espectrometria de massas e espectrometria de infravermelho.
O método fez uso de cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por ultravioleta
(278 nm), utilizando uma coluna de fase reversa C18 (250 x 4,6 mm, 5μm) e como fase móvel
uma mistura de água-trietilamina (0,05%) (A) : metanol (B) em modo gradiente: 0-5 min.
(60%), 5-15 min. (72%), 15-25 min. (80%), 25-30 min. (60%) a um fluxo de 1 mL/min. e
tempo de corrida de 30 min. O método cromatográfico desenvolvido foi validado segundo o
preconizado na Resolução 899 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária, e se mostrou
linear na faixa de concentração utilizada (2-100 μg/mL), seletivo (com boa separação entre os
três picos cromatográficos e interferentes), preciso (DPR%≤15%), exato (bias 85-115%) e
robusto. O modelo de calibração utilizada foi o de adição de padrão. No estudo da
sazonalidade dos marcadores foi possível observar que houve diminuição significativa da
concentração de milonina, warifteína e metilwarifteína entre os meses de fevereiro e abril.
Essas diminuições proeminentes para as três moléculas coincidem com o período de
frutificação da planta sendo verificado o aparecimento de warifteína e metilwarifteína nos
frutos. Essa observação sugere a necessidade da biossíntese dos alcaloides pelos frutos.
Através de técnicas espectrométricas e cromatográfica foi isolado e identificado da FAT-r de
C. sympodialis uma mistura de epímeros a 7 - desmetilroraimina e a 1 - epi - 7 -
desmetilroraimina que são alcalóides bisbenzilisoquinolínicos inéditos na literatura.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede.biblioteca.ufpb.br:tede/6719 |
| Date | 09 December 2011 |
| Creators | Marinho, Alexsandro Fernandes |
| Contributors | Barbosa Filho, José Maria |
| Publisher | Universidade Federal da Paraíba, Programa de Pós Graduação em Produtos Naturais e Sintéticos Bioativos, UFPB, BR, Farmacologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFPB, instname:Universidade Federal da Paraíba, instacron:UFPB |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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