Les cellules cancéreuses sont sujettes à des défauts de reformation de
l'enveloppe nucléaire (EN) après la mitose. BAF est l'une des premières protéines
recrutées sur les chromosomes pour initier la reformation de l’EN. Chez l'humain,
le recrutement de BAF nécessite sa déphosphorylation par la phosphatase PP2A
et Ankle2, une protéine du réticulum endoplasmique (RE) interagissant avec
PP2A. Cependant, les fonctions d’Ankle2 dans la reformation de l’EN ne sont pas
complètement comprises. Pour les étudier, notre laboratoire utilise la drosophile
comme organisme modèle. On ne sait pas si Ankle2 de drosophile fonctionne dans
le NER. Nous avons constaté qu’Ankle2 est nécessaire au recrutement de BAF
pour le réassemblage du noyau après la mitose chez la drosophile. Pour mieux
comprendre son fonctionnement, nous avons identifié des protéines avec
lesquelles BAF interagit : PP2A, Vap33 (une protéine du RE) et certaines Kinases
Dépendantes des Cyclines (CDK). Nous avons cartographié les régions d’Ankle2
impliquées dans ces interactions protéiques grâce à une analyse mutationnelle,
des co-purifications par affinité et des pulldowns GST. Nous avons ensuite généré
des mutants d’Ankle2 spécifiquement déficients pour des interactions et testé leur
capacité à sauver la prolifération et la reformation de l’EN dans des cellules où
Ankle2 endogène est déplété. Nos résultats indiquent que l'interaction entre
Ankle2 et PP2A est essentielle pour sa fonction dans la reformation de l’EN. Une
analyse biochimique suggère qu’Ankle2 fonctionne comme une sous-unité
régulatrice de PP2A. En utilisant une approche phosphoprotéomique, nous avons
confirmé que la déphosphorylation de BAF dépend d’Ankle2 et nous avons aussi
identifié de nouveaux substrats potentiels du complexe PP2A-Ankle2. Nous
concluons que le complexe PP2A-Ankle2 est nécessaire à la déphosphorylation
de BAF et à son recrutement pour le réassemblage du noyau. Les expériences en
cours permettront de déterminer les exigences d'autres interactions d’Ankle2 pour
ses fonctions dans la reformation de l’EN. La suite de ces travaux impliquera
l’étude de la régulation de nouveaux substrats de PP2A-Ankle2 impliqués dans ce
processus. Une reformation de l’EN défectueuse peut provoquer une
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micronucléation, ce qui peut déclencher une réponse immunitaire innée. La
perturbation de la reformation de l’EN dans les cellules cancéreuses pourrait donc
être bénéfique dans le contexte de l’immunothérapie. / Cancer cells are prone to defects in Nuclear Envelope Reformation (NER) after
mitosis. BAF is one of the first proteins recruited on chromosomes to initiate NER.
In humans, BAF recruitment requires its dephosphorylation by PP2A and Ankle2,
a PP2A-interacting protein of the endoplasmic reticulum (ER). However, the
functions of Ankle2 in NER are incompletely understood. Our lab uses Drosophila
as a model system. Whether Drosophila Ankle2 functions in NER is unknown. We
found that Ankle2 is required for BAF recruitment to reassembling nuclei in
Drosophila. To better understand how it functions, we identified its interactors,
which include PP2A, Vap33 (an ER protein) and Cyclin-Dependent Kinases
(CDKs). We mapped the regions of Ankle2 involved in these protein-protein
interactions through a mutational analysis, affinity co-purifications and GST
pulldowns. We then generated mutant forms of Ankle2 defective in individual
interactions and tested their ability to rescue proliferation and NER in cells depleted
from endogenous Ankle2. Our results indicate that the interaction of Ankle2 with
PP2A is essential for its function in NER. A biochemical analysis suggests that
Ankle2 functions as a regulatory subunit of PP2A. Using a phosphoproteomic
approach, we confirmed that BAF dephosphorylation depends on Ankle2 and also
identified novel candidate substrates of the PP2A-Ankle2 complex. We conclude
that PP2A-Ankle2 complex is required for BAF dephosphorylation and recruitment
to reassembling nuclei. Ongoing experiments will determine the requirements of
other interactions of Ankle2 for its functions in NER. Future work will explore the
regulation of novel PP2A-Ankle2 substrates in this process. Defective NER can
cause micronucleation, which can elicit an innate immune response. Disrupting
NER in cancer cells could be beneficial in the context of immunotherapy.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:umontreal.ca/oai:papyrus.bib.umontreal.ca:1866/32667 |
| Date | 12 1900 |
| Creators | Wang, Xinyue |
| Contributors | Archambault, Vincent |
| Source Sets | Université de Montréal |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | thesis, thèse |
| Format | application/pdf |
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