Die dreidimensionale Organisation des Chromatins verändert sich während der Zelldifferenzierung als Reaktion auf die Umgebung und ist bei Krankheiten oftmals verändert. Das Zusammenspiel zwischen Chromatinzustand, Chromatinorganisation und Genexpression ist insbesondere bei Neuronen nach wie vor nur geringfügig erforscht.
In dieser Arbeit untersuchte ich die Organisation und den Zustand des Chromatins im Zusammenhang mit der Transkription in embryonalen Stammzellen (ESCs) und dopaminergen Neuronen (DNs) der Maus. Dazu habe ich die Organisation des Chromatins mittels Genome Architecture Mapping (GAM) bestimmt und zelltypspezifische Genexpressionsprofile zur Klassifizierungen von Promotoren, Enhancern und Super-Enhancern (SEs) erzeugt. Anschließend habe ich diese linearen Chromatinprofile mit den verschiedenen Stufen der Chromatinorganisation kombiniert und konnte so Unterschiede zwischen den 3D-Genomstrukturen von ESCs und DNs aufzeigen. Zudem konnte ich verstärkt Dreifach-Wechselwirkungen zwischen zelltypspezifischen SEs und/oder exprimierten Genen nachweisen, die bei DNs besonders oft neuronale Signalgene darstellen und oftmals bei neurologischen Störungen betroffen sind. Ich fand auch heraus, dass die Grenzen topologisch assoziierter Domänen (TADs) oft mit Genen zur zellulären Differenzierung zusammen fallen und zudem zelltyp-spezifische Eigenschaften aufweisen, was von Bedeutung für zukünftige funktionelle Untersuchungen solcher Grenzen sein dürfte. Schließlich konnte ich zeigen, dass Chromatinkompartimente zwischen ESCs und DNs in Abhängigkeit vom Chromatinzustands und der Chromatinexpression variieren und dass eine Gruppe transkriptionell aktiver DN Gene, die für die neuronale Aktivität wichtig sind, in B-Kompartimenten liegt.
Mit diesen neuen Erkenntnissen erweitert meine Arbeit das Verständnis der Chromatinorganisation bei der Regulierung der Genexpression in Maus ESCs und DNs. / The three-dimensional organization of chromatin changes during cell differentiation, in response to the environment, and is often altered in disease. The interplay between chromatin state, chromatin organization and gene expression remains poorly understood, particularly in neurons.
In this work, I examined the organization and state of chromatin associated with transcription in mouse embryonic stem cells (ESCs) and dopaminergic neurons (DNs). To do this, I determined the organization of chromatin using genome architecture mapping (GAM) and generated cell type-specific gene expression profiles to classify promoters, enhancers and super-enhancers (SEs). I then combined these linear chromatin profiles with the different levels of chromatin organization and was able to show differences between the 3D genome structures of ESCs and DNs. In addition, I was able to demonstrate increased triple interactions between cell type-specific SEs and/or expressed genes, which are often neuronal signalling genes in DNs and affected in neurological disorders. I also found that the boundaries of topologically associated domains (TADs) often coincide with cellular differentiation genes and also exhibit cell type-specific properties, which may be important for future functional studies of such boundaries. Finally, I was able to show that chromatin compartments between ESCs and DNs vary depending on chromatin state and chromatin expression, and that a group of transcriptionally active DN genes important for neuronal activity are located in B compartments.
With these new findings, my work expands the understanding of chromatin organization in regulating gene expression in mouse ESCs and DNs.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:HUMBOLT/oai:edoc.hu-berlin.de:18452/28901 |
| Date | 09 February 2024 |
| Creators | Harabulă, Izabela-Cezara |
| Contributors | Pombo, Ana, Gräff, Johannes, Vogel, Tanja |
| Publisher | Humboldt-Universität zu Berlin |
| Source Sets | Humboldt University of Berlin |
| Language | English |
| Detected Language | German |
| Type | doctoralThesis, doc-type:doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Rights | (CC BY 4.0) Attribution 4.0 International, https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ |
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