Memoria para optar el título de Bioquímico / Los organismos regulan su número de células a través de un balance entre la
división y muerte celular. Con respecto a este último, existen diversos mecanismos de
muerte celular, como la apoptosis, autofagia y necrosis, presentando cada uno
características morfológicas y moleculares diferentes. Se ha considerado a la necrosis como
un mecanismo de muerte celular “accidental” y, por tanto, menos regulado. Sin embargo
existen evidencias de que la necrosis también puede ser considerada un tipo de muerte
celular programada. Es así que las ceramidas, precursores de los esfingolípidos eucariontes,
han sido reconocidas como importantes segundos mensajeros implicados en el
gatillamiento de procesos apoptótico/necróticos en diversos tipos celulares. Recientemente
se ha descrito que células de linfoma B humano (línea celular A20) al ser estimuladas con
ligando de Fas en presencia de ceramidas van a un destino de muerte necrótico. Además de
esto, se ha descrito una relación entre estrés oxidativo y la generación de ceramidas,
relación que se encontraría íntimamente ligada a procesos de señalización de muerte
celular.
Con estos datos se postuló que las ceramidas intervienen en la decisión apoptóticonecrótica
en células epiteliales. Utilizando métodos de citometría de flujo y ensayos
enzimáticos se encontró que las ceramidas aumentaron la muerte por necrosis en el tiempo
tanto para células HeLa como para HTC, este aumento es dosis dependiente.
Ácido flufenámico, un inhibidor inespecífico de canales catiónicos no selectivos
involucrados en regulación del volumen celular por estrés oxidativo, en conjunto con
ceramidas no cambió el porcentaje de muerte por necrosis y aumentó la población
apoptótica. Al reemplazar el Na+ extracelular por el catión monovalente NMDG+ no se
observó diferencia entre los porcentajes de las distintas poblaciones celulares. La aplicación
en conjunto de H2O2 con ceramidas aumentó la muerte celular, pero sólo a altas
concentraciones (10 mM). El efecto de ceramidas sobre la apoptosis se ensayó utilizando el
inhibidor genérico de caspasas zVAD-fmk. No hubo cambios significativos en los
porcentajes de muerte celular. Efectos similares se observaron al depletar los depósitos
intracelulares de calcio.
Estos resultados permiten concluir que las ceramidas inducen muerte celular necrótica
de manera tiempo y dosis dependiente / Organisms regulate their number of cells through fine a balance between cell
division and cell death. In respect to cell death, diverse mechanisms exist, such as
apoptosis, autophagia and necrosis, presenting each one different morphologic and
molecular characteristics. Necrosis has been considered as a mechanism of "accidental"
cell death and therefore, less regulated. Nevertheless, evidences exist of which necrosis
can be also considered as a type of programmed cell death. For example, ceramides,
precursors of sphingolipids in euchariotic cells, have been recognized as important
second messengers implicated in the development of apoptotic/necrotic processes in
diverse cell types. It has been recentely described that human lymphoma B cells (A20
cell line),upon stimulation with Fas ligand in the presence of ceramides, induce necrotic
cell death. Also, it has been described a relationship between oxidative stress and the
generation of ceramides which are intimately linked to cell death signaling processes.
Based on this information, it was postulated that ceramides take part in the
apoptotic-necrotic decision in epithelial cells. Using flow citometry and enzymatic
assays we found that ceramides increased cell death by necrosis in HeLa and HTC cells
in a dose-dependent manner.
Flufenamic acid, a non specific inhibitor of nonselective cation channels involved in
regulation of the oxidative stress-dependent cell volume, used in conjunction with
ceramides did not produce changes in the percentage of necrotic cell death and
increased the population of apoptotic cells. Upon replacement of external Na+ by the
monovalent cation NMDG+, the percentage of different cell populations was not
altered. The application of ceramides with H2O2 produced an increase in the cell death,
but only at high concentrations of H2O2 (10 mM). The effect of ceramides upon
apoptosis was assayed using the generic caspase inhibitor zVAD- fmk. No significant
changes were observed in the percentage of cell death. Similar effects were observed
when depleting the intracellular calcium stores.
These results allow us to conclude that ceramides induces necrotic cell death in a
time and dose-dependent manner
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UCHILE/oai:repositorio.uchile.cl:2250/105423 |
| Date | January 2005 |
| Creators | Pedrero Cisterna, Andrea R. |
| Contributors | Lavandero González, Sergio, Stutzin Schottlander, Andrés, Quest, Andrew F. G., Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas, Departamento de Bioquímica y Biología Molecular |
| Publisher | Universidad de Chile |
| Source Sets | Universidad de Chile |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | Tesis |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Chile, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/cl/ |
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