Les protéines d’échafaudage de la famille Elmo forment des complexes avec les facteurs
d’échange de nucléotides de la guanine (GEF) de la famille des protéines Dock. Globalement, le
complexe Elmo/Dock est caractérisé par une régulation conformationnelle, où au niveau basal il
se retrouve dans un état fermé, en raison de la présence de sites de contact bloquant la liaison
des interacteurs d’Elmo et la fonction GEF de Dock qui permet l’activation de Rac1. Une fois dans
un état activé, le complexe adoptera une conformation ouverte et les sites de liaison d’Elmo
seront disponibles. Par exemple, il a été démontré que la liaison des GTPases RhoG ou Arl4A au
domaine RBD d’Elmo induit le recrutement du complexe à la membrane cellulaire. Le domaine
DHR-2 étant alors accessible, celui-ci assurera l’activation spécifique de la GTPase Rac1 afin
d’induire, entre autres, le remodelage du cytosquelette d’actine. Divers processus cellulaires
seront alors d clench s, tels que la migration cellulaire, la phagocytose et la fusion des cellules
musculaires (nommées myoblastes). Dans le cadre de cette thèse, nous avons étudié par
l’entremise de deux objectifs l’importance de la régulation conformationnelle d’Elmo.
Pour le premier objectif, nous avons étudié la régulation conformationnelle d’Elmo durant la
myogenèse. La formation de fibres multi-nuclées est fondamentale pour l’établissement du
muscle squelettique. Durant ce processus, la fusion des myoblastes est une étape clé pour
permettre le développement et la régénération musculaire. Afin d’étudier les fonctions d’Elmo in
vivo dans ce contexte, nous avons généré une série de modèles de souris. Tout d’abord, via la
génération de souris double knock-out pour Elmo1 et Elmo2 (Elmo1KOElmo2cKO), nous avons
démontré la fonction essentielle d’Elmo durant la fusion des myoblastes embryonnaires. En effet,
uniquement des myofibres mononuclées sont observées suite à l’inactivation génétique d’Elmo1
et Elmo2. Par la suite, nous avons également généré des lignées de souris knock-in, où des
mutations ont été introduites dans des domaines spécifiques d’Elmo2 afin d’induire sa
conformation ouverte (Elmo2EID) ou fermée (Elmo2RBD). Nous avons ainsi démontré qu’en
présence d’Elmo2EID, la capacité de fusion est augmentée et des fibres musculaires plus larges sont développées. De plus, la régénération musculaire est plus efficace chez ces souris. À l’opposé, lorsqu’Elmo2 a perdu l’activité de son domaine RBD (Elmo1KOElmo2RBD), des fibres
musculaires plus étroites sont retrouvées chez les jeunes souris adultes ainsi qu’une régénération
du muscle moins efficace. Finalement, nous avons démontré que l’augmentation de l’activité de
la voie Elmo2-Dock1-Rac1, directement via le contrôle de la régulation conformationnelle
d’Elmo2, améliore les phénotypes dystrophiques retrouvés chez les souris DysferlinKO, un modèle
récapitulant la dystrophie musculaire des ceintures de type 2B (LGMD2B). Ainsi, pour la première
fois, nous avons établi la possibilité d’exploiter la fusion des myoblastes en tant que thérapie
régénérative pour des maladies musculaires.
Pour le deuxième objectif, nous avons étudié Elmo3 dans un cas clinique dans le cadre d’une
collaboration internationale. Plus précisément, des mutations bi-alléliques dans le gène Elmo3
ont été identifiées chez un jeune patient atteint d’une déficience intellectuelle. En effectuant des
études biochimiques et fonctionnelles, nous avons démontré que ces mutations ont un impact
sur l’activation de Rac1, sans toutefois influencer l’interaction entre les protéines du complexe
Elmo3/Dock1. Cette étude apporte les premières évidences de fonctions biologiques pour Elmo3.
Pour conclure, nos études ont permis de souligner l’importance d’un control approprié de la
régulation conformationnelle d’Elmo. En effet, en manipulant cette régulation dans un modèle
de muscle squelettique, via l’introduction d’une mutation maintenant la protéine dans une
conformation ouverte, cela a permis un effet positif sur la fusion des myoblastes et sur la
régénération musculaire, menant à l’amélioration des phénotypes de dystrophie musculaire.
l’opposé, la présence chez l’humain de mutations dans Elmo peut également affecter l’activation
de Rac1 par Dock1, contribuant ainsi à une déficience intellectuelle chez le porteur. / The scaffold proteins Elmo forms a complex with guanine nucleotide exchange factors (GEFs) of
the Dock family. The Elmo/Dock complex is characterized with a conformational regulation and
at the basal level, the complex is found in a closed state, owing to the presence of contact sites
blocking the binding of Elmo interactors and the GEF activity of Dock for the activation of Rac1.
In their activated state, the complex adopts an open conformation and Elmo binding sites will be
available. For example, binding of the GTPases RhoG or Arl4A to the RBD domain of Elmo has
been shown to induce the recruitment of the complex at the cell membrane. Likewise, the DHR-
2 domain of Dock being available, the GTPase Rac1 will then be specifically activated by Dock and
thus induce the remodeling of the actin cytoskeleton. Various cellular processes will then be
triggered, such as cell migration, phagocytosis and muscle cell (named myoblast) fusion. In this
thesis, we have emphasized the importance of the conformational regulation of Elmo by
achieving two objectives.
For the first objective, we studied the conformational regulation of Elmo during myogenesis, i.e.
during the establishment of skeletal muscle. The formation of multinucleated myofibers is
fundamental for skeletal muscle. During this process, myoblast fusion is a key step to allow the
development as well as the regeneration of the muscle. In order to study Elmo in this in vivo
context, we generated a series of mouse models. First, through the generation of double knockout
mice for Elmo1 and Elmo2 (Elmo1KOElmo2cKO), we demonstrated the essential function of
Elmo during embryonic myoblast fusion. Indeed, only mononucleated myofibers are observed
following the genetic inactivation of Elmo1 and Elmo2. Subsequently, we also generated knockin
mouse lines, where mutations were introduced in specific domains of Elmo to induce its
opened (Elmo2EID) or closed (Elmo2RBD) conformation. Thus, we have demonstrated that when
Elmo2EID is expressed, the fusion capability is increased and the myofibres are larger. Moreover,
muscle regeneration is more efficient in these mice. At the opposite, when Elmo2 has lost its RBD
activity (Elmo1KOElmo2RBD), smaller myofibers are observed as well as a less efficient muscle
regeneration. Finally, we demonstrated that increasing the Elmo-Dock1-Rac1 pathway activity, directly through the control of the conformational regulation of Elmo, leads to the improvement
of the dystrophic phenotypes found in DysferlinKO mice, a mouse model of the limb-girdle
muscular dystrophy type 2B (LGMD2B). Thus, for the first time, we have established the possibility
of exploiting myoblast fusion as a regenerative therapy for muscle diseases.
For the second objective, we studied Elmo3 in a clinical case, as part of an international
collaboration. More specifically, biallelic mutations in Elmo3 gene have been identified in a young
patient with intellectual disability. Through biochemical and functional studies, we have shown
that the mutations have an impact on the activation of Rac1, without however affecting the
interaction between the proteins of the Elmo3/Dock1 complex. This study provides the first
evidence of biological functions for Elmo3.
In conclusion, our study has emphasis the relevance of the proper control of the conformational
regulation of Elmo. In fact, by manipulating this regulation in a skeletal muscle model, through
the introduction of a specific mutation promoting the open conformation of Elmo, it promotes
myoblast fusion and induce a more efficient muscle regeneration, thus improving the dystrophic
phenotypes. In contrast, the presence of human mutations in Elmo can also affect the activation
of Rac1 by Dock1, hence contributing to intellectual disability in the carrier.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:umontreal.ca/oai:papyrus.bib.umontreal.ca:1866/26315 |
| Date | 12 1900 |
| Creators | Tran, Viviane |
| Contributors | Côté, Jean-François |
| Source Sets | Université de Montréal |
| Language | fra |
| Detected Language | French |
| Type | thesis, thèse |
| Format | application/pdf |
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