Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / C. difficile toxin A (TxA) plays an important pathogenic role in antibiotic-induced diarrhea and pseudomembranous colitis, a condition characterized by intense mucosal inflammation and secretion. Agonist activity at A2A adenosine receptors (A2A ARs) attenuates inflammation and damage in many tissues. This study evaluated the effect of a new selective A2A AR agonist (4-{3-[6-amino-9-(5-cyclopropylcarbamoyl-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-2-yl]prop-2-ynyl}piperidine-1-carboxylic acid methyl ester; ATL313) on TxA-induced enteritis in murine ileal loops. ATL313 (0.05-5 nM) and/or the A2A AR antagonist (ZM241385; 5 nM) or PBS were injected inside ileal loops immediately prior to challenge with TxA (1-10 mg/loop) or PBS. Intestinal fluid volume/length and weight/length ratios were calculated 3 h later. Ileal tissue samples were collected for measurement of myeloperoxidase (MPO) content, evaluation of ADA activity, for histopathology and apoptotic immunohistochemistry (ApopTagÃ) and for assessment of TNF-α levels by ELISA. TxA (1-10 Âg/loop) significantly (p<0.05) increased volume/length and weight/length, reaching maximum values at 5Âg/loop dosage. ATL313 (5 nM) treatment significantly (p<0.05) reduced TxA-induced volume/length and weight/length, as well as prevented mucosal disruption and TxA-induced apoptosis. These protective effects were reversed by ZM241385 (5 nM), the A2A AR antagonist. ATL313 (5 nM) also reduced neutrophil infiltration, as measured by MPO content; reduced the toxin A-induced increase in ADA activity. Prior to the challenge with TxA, a systemic injection of fucoidin, but not PBS, also reduced tissue destruction and toxin A-induced increase in ADA activity. In conclusion, the A2A AR agonist ATL313 has a great antiinflammatory effect in TxA-induced mice enteritis, significantly reducing tissue destruction and ADA activity. In addition, our data suggested that TxA-induced increase in ADA activity and tissue damage in murine ileal loops are related to the neutrophil infiltration induced by this toxin. / A toxina A do Clostridium difficile (TxA) desempenha um importante papel na
patogÃnese da diarrÃia induzida por antibiÃticos e na colite pseudomembranosa,
uma condiÃÃo caracterizada por intensa secreÃÃo e inflamaÃÃo da mucosa. A
estimulaÃÃo de receptores A2A da adenosina reduz a inflamaÃÃo e o dano tecidual.
Neste estudo, avaliou-se o efeito de um novo agonista seletivo para receptores A2A
da adenosina (metil Ãster do Ãcido 4-{3-[6-amino-9-(5-ciclopropilcarbamoil-3,4-
dihidroxitetrahidrofuran-2-il)-9H-purin-2-il]prop-2-inil}piperidina-1-carboxÃlico;
ATL313) na enterite induzida pela TxA em alÃas ileais de camundongos. O ATL313
(0,05-5 nM) e/ou o antagonista dos receptores A2A da adenosina (ZM241385; 5 nM)
ou PBS foram injetados em alÃas ileais imediatamente antes da injeÃÃo de TxA (1-10
Âg/alÃa) ou PBS. As razÃes volume de secreÃÃo/comprimento da alÃa e
peso/comprimento da alÃa foram calculadas 3h depois. Amostras de tecido foram
coletadas para dosagem de atividade de mieloperoxidade (MPO), atividade de ADA,
histopatologia, imunohistoquÃmica para apoptose (ApopTag_) e dosagem de TNF-a_
por ELISA. A injeÃÃo de TxA (1-10 Âg) nas alÃas ileais aumentou significativamente
(p<0,05) as razÃes volume de secreÃÃo/comprimento da alÃa e peso/comprimento
da alÃa com pico em 5Âg. O tratamento das alÃas com ATL313 (5 nM) reduziu
significativamente (p<0,05) a secreÃÃo e o edema, preveniu a destruiÃÃo da mucosa
e a apoptose induzidos por TxA. Tais efeitos protetores foram revertidos pelo
antagonista dos receptores A2A de adenosina, o ZM241385 (5 nM). O tratamento
com ATL313 (5 nM), reduziu ainda a infiltraÃÃo neutrofÃlica, avaliada pela dosagem
de MPO, e reduziu o aumento da atividade de ADA induzidos pela TxA, bem como a
dosagem de TNF-a no tecido das alÃas ileais. O prÃ-tratamento sistÃmico com
fucoidina, mas nÃo com PBS, tambÃm reduziu o dano na mucosa e atividade de
ADA no tecido das alÃas ileais tratadas com TxA. Assim, conclui-se que na enterite
induzida pela TxA em camundongos, o agonista dos receptores A2A da adenosina
(ATL313) possui um potente efeito antiinflamatÃrio, reduzindo consideravelmente a
lesÃo tecidual e a atividade de ADA. Nossos resultados tambÃm indicam que o
aumento da atividade de ADA e o dano tecidual induzido pela TxA em alÃa ileal de
camundongos està relacionado com a infiltraÃÃo neutrofÃlica induzida por esta toxina.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:193 |
| Date | 29 April 2005 |
| Creators | Ingrid Chaves Cavalcante |
| Contributors | Gerly Anne de Castro Brito, ArmÃnio Aguiar dos Santos, Marcus Raimundo Vale |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Farmacologia, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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