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Previous issue date: 2011-03-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Thousands of people die annually due to infections caused by some kind of virus, despite the large
investment on development of technologies that improve the diagnostics and prognostics of virus
diseases. However, there is a lack of methods for diagnosis that are more accurate, low cost and that
handle problems such as the immunologic window, the bounds of different infection phases, as well
as the low amount of virions. The Hsps 70 are molecular chaperones that are expressed in various
situations of stress or heat, forming a highly preserved immunologic system. They are highly
expressed in different kind of tumors and in some in almost all viral infections. In the same way, its
co-chaperona, the heat chock protein 70 linked to protein 1 (HspBP1) is involved in tumors
processes, such as the lung cancer and the neuroblastoma. Recently, it was identified as a marker
for the prognostic of breast cancer. Despite having studies related to the expression of HspBP1 on
cancers and on its prognostics, the studies of its expression in viral infections are rare. Due to the
fact that this protein can be used as an indicator of cellular metabolic alteration and that the viral
infection will induce the cellular stress, the modification of its expression during the viral cycle can
predict a higher or lower replicative index. This property can be used as a tool in the viral
diagnostic. The mainly objective of this study was to determine the pattern of expression of protein
HspBP1 in cells that hosts HSV-1 (vero cells) in vitro using the Western-blotting and determine
increasing or reduction on its expression. In addition, the levels of HspBP1 and antibodies agains
HspBP1 in the serum of HIV infected people were analized by ELISA. The results in vitro showed
that after the viral infection there was no different in the pattern of expression of the total protein,
when analyzed by SDS-PAGE. However, using the Western-Blotting the expression of HspBP1
increased in the 48 hours after the infection, comparing with non-infected Vero cells. Seventy-two
hours after infection the expression decreased. The results of HspBP1 protein by ELISA showed a
significant increasing of this protein in the HIV infected group that also presented a high viral load
and low number of T CD4+ lymphocytes, when compared with the groups with an undetected load
of HIV infected and uninfected. Regarding the research of anti-HspBP1 the results showed an
increase in serum protein from HIV infected people. In conclusion these results suggest that the
expression of HspBP1 is increased in HIV infected people and it is followed by an increasing in
antibody production against HspBP1 and decreasing in T CD4+ lymphocytes for high viral load. / Milhares de pessoas morrem anualmente por infecções causadas por algum tipo de vírus, mesmo
que, nos últimos anos, se invista muito no desenvolvimento de tecnologias para aprimorar o
diagnóstico e prognóstico de viroses. Entretanto, ainda existe uma carência de métodos diagnósticos
mais sensíveis, de baixo custo, que contornem problemas como a janela imunológica, os limites de
detecção em determinadas fases da infecção, assim como a baixa quantidade de vírions. As Hsps 70
são chaperonas moleculares que se expressam em várias situações de estresse e ou calor,
constituindo um sistema genético altamente conservado, sendo altamente expressas em diversos
tipos de tumores e em certos tipos de viroses. Do mesmo modo, a sua co-chaperona, a proteína de
choque térmico 70 ligada à proteína 1 (HspBP1), está envolvida em processos tumorais, como no
câncer de pulmão e no neuroblastoma, e recentemente, foi identificada como um marcador de
prognóstico no câncer de mama. Embora existam estudos relacionando à expressão da HspBP1 no
câncer e o prognóstico deste, os estudos de sua expressão em infecções virais são raros. Em razão
dessa proteína poder ser utilizada como um indicador de alteração metabólica celular, e a infecção
viral induzir estresse celular, a alteração de sua expressão durante o ciclo viral pode predizer um
maior ou menor índice replicativo. Assim, essa propriedade pode ser utilizada como ferramenta no
diagnóstico viral. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo determinar o padrão de expressão
da proteína HspBP1 em células hospedeiras do vírus HSV-1 (células Vero) in vitro através da
técnica de Western-blotting, avaliando um provável aumento ou diminuição da sua expressão. Além
disso, quantificar a proteína HspBP1 e os anticorpos IgG anti-HspBP1 no soro de indivíduos HIV
positivos através da técnica de ELISA. Os resultados demonstraram que após a infecção viral não
houve diferença no padrão de expressão de proteína total, quando analisados por SDS-PAGE. No
entanto, pela técnica de Western-Blotting, a expressão de HspBP1 apresentou aumento nas 48
horas após a infecção em comparação com células Vero não infectadas. Setenta e duas horas após a
infecção, a expressão diminuiu. Os resultados da pesquisa da proteína HspBP1 pelo teste ELISA
mostraram que houve um aumento significativo dessa proteína no grupo dos indivíduos infectados
pelo HIV apresentando carga viral alta e contagem de linfócitos T CD4+ baixos quando comparado
com os grupos dos infectados pelo HIV com carga viral indetectável e com os não infectados. Em
relação a pesquisa de anticorpos IgG anti-HspBP1 os resultados mostraram que houve um aumento
da proteína em indivíduos infectados pelo HIV. Assim, esses resultados sugerem que a expressão
HspBP1 está aumentada em indivíduos infectados pelo HIV, seguidos por um aumento na produção
de anticorpos contra a HspBP1 e redução dos linfóctios T CD4+ para uma carga viral elevada.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede.universidadefranciscana.edu.br:UFN-BDTD/298 |
| Date | 29 March 2011 |
| Creators | Ceccim, Adrianne Del Fabro |
| Contributors | Rodrigues Junior, Luiz Carlos |
| Publisher | Universidade Franciscana, Mestrado Acadêmico em Nanociências, UFN, BR, Biociências e Nanomateriais |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional Universidade Franciscana, instname:Universidade Franciscana, instacron:UFN |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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