Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1
texto completo.pdf: 410014 bytes, checksum: 670794b294aeae950000e5e2848a5f4f (MD5)
Previous issue date: 2004-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to evaluate the vitrification of immature bovine oocytes, using differents equilibrium times and differents concentrations of ethylene glicol (EG) during equilibrium period, with a vitrification solution containing EG associated with two disaccharides. It was evaluated the influence of each treatment on the oocytes maturation rates, after thawing. The experiment was conducted in the LRA-DVT-UFV. It was tested three equilibrium solutions (ES), containing 3, 20 or 40% of EG, three equilibrium times (ET), 0,5, 5 and 15 minutes, and two vitrification solutions (VS), containing 40% of EG + 1,0 mol L-1 of trehalose or 40% of EG + 1,0 mol L-1 of sucrose. The three ES, the three ET and the two VS were combined among each other, completing 18 treatments. The controlled treatment had fresh oocytes non vitrified maturated in vitro. It was used 2.103 immature oocytes, distributed in 19 treatments. The selected oocytes were kept in the ES (basemedium with 3, 20 or 40% of EG) for a determined ET (0,5, 5 or 15 minutes). After the end of the ET, the oocytes were transfered to the VS (base-medium with 40% of EG + 1,0 mol L-1 of trehalose or 40% of EG + 1,0 mol L-1 of sucrose), for one minute. During this time, the oocytes were loaded in 0,25 mL straw and dipped directly in liquid nitrogen. The oocytes were thawed by exposing the straw for five seconds to air, followed by immersion in water bath at 37 °C for 30 to 45 seconds, and were gradually rehydrated in trehalose solutions (for treatments 1 to 9) or sucrose solutions (for treatments 10 to 18). After rehydratation, the recovery rate and morfology of the oocytes were evaluated. The oocytes were cultured for 22 to 24 hours. The recovery rate was not affected by ES, ET and VS, but the morfology of the oocytes was. The ES containing 40% of EG showed the highest rate of normal oocytes (NORM) (76,94%). The ET of 15 minutes showed the highest rate of NORM (80,58%) and lowest rate of oocytes with citoplasmic retraction (CITRET) (16,02%). Vitrifications solutions containing trehalose also showed the highest rate of NORM (76,80%) and the lowest rate of CITRET (19,93%). The combinations ET for 15 minutes and ES containing 3, 20 ou 40% of EG showed the lowest rates of CITRET (17,40; 20,78 and 9,88%, respectively). The combination (treatment 14) VS with sucrose, ET for five minutes, ES with 20% of EG showed the highest rate of MII (metaphase II) (44,55%). The lowest rate of MII in the treatments that used sucrose, were found in the combinations ES with 40% of EG and ET for 15 and five minutes (0,95 and 0,00%, respectively). The highest rate of MII in the treatments that used trehalose was 5,32%. The highest rates of CC (cromatin condensation) were found in the treatments that used trehalose. It was observed that the rate of MII of treatment 14 was significally different from the controlled treatment (44,55% and 74,95%, respectively). The results point out that morfologic evaluation of immature oocytes after thawing and rehydratation, based on citoplasmic retraction, do not reflect the potencial of the oocytes fo in vitro maturation. The use of trehalose in the VS influenced negatively the oocyte maturation. The use of sucrose in the VS influenced positively the oocyte maturation. Elevated concentrations of EG (40%) associated with a long ET (five and 15 minutes) did not favor the oocyte development. The protocol using 20% of EG in the ES, with ET of five minutes and the VS containing 40% of EG + 1,0 mol L-1 of sucrose, showed good rates of in vitro maturation, for immature bovine oocyte. / O objetivo do presente trabalho foi avaliar a vitrificação de ovócitos imaturos de bovinos, utilizando diferentes tempos e concentrações de etilenoglicol (EG) no equilíbrio, com a solução de vitrificação contendo o EG associado com dois dissacarídeos. Avaliou-se a influência de cada tratamento
sobre a taxa de maturação dos ovócitos, após o descongelamento. O experimento foi realizado no LRA-DVT-UFV. Foram testados três soluções de equilíbrio (SE), contendo 3, 20 ou 40% de EG, três tempos de equilíbrio (TE), 0,5, 5 e 15 minutos, e duas soluções de vitrificação (SV), contendo 40% de EG + 1,0 mol L-1 de trealose ou 40% de EG + 1,0 mol L-1 de sacarose. As três SE, os três TE e as duas SV foram combinadas entre si, perfazendo um total de 18 tratamentos. O tratamento controle continha ovócitos frescos não congelados, maturados in vitro. Foram utilizados 2.103 ovócitos imaturos, distribuídos em 19 tratamentos. Os ovócitos selecionados foram mantidos imersos na SE (meiobase com 3, 20 ou 40% de EG) por um determinado TE (0,5, 5 ou 15 minutos). Após o término do TE os ovócitos foram tranferidos para a SV (meio-base com 40% de EG e 1,0 mol L-1 de trealose ou 40% de EG e 1,0 mol L-1 de sacarose), por um minuto. Durante este tempo, os ovócitos foram envasados em palheta de 0,25 mL e colocados diretamente no nitrogênio líquido. Os ovócitos foram descongelados por meio da exposição das palhetas por cinco segundos ao ar, seguida da imersão em Banho Maria a 37 °C por 30 a 45 segundos, e reidratados gradativamente em soluções de trealose (para os tratamentos 1 a 9) ou sacarose (para os tratamentos 10 a 18). Após a reidratação, foi avaliado a taxa de recuperação e a morfologia dos ovócitos.Os ovócitos foram cultivados durante 22 a 24 horas. Observou-se que a SE, TE e a SV não influenciaram a taxa de recuperação, mas influenciaram a morfologia dos ovócitos. A SE que continha 40% EG proporcionou maior taxa de ovócitos normais (OVNORM) (76,94%). O TE de 15 minutos proporcionou maior taxa de OVNORM (80,58%) e menor taxa de ovócitos com retração citoplasmática (OVRET) (16,02%). As soluções de vitrficação contendo a trealose também proporcionaram maior OVNORM (76,80%) e menor OVRET (19,93%). As combinações TE por 15 minutos e SE com 3, 20 ou 40% de EG proporcionaram as menores OVRET (17,40; 20,78 e 9,88%, respectivamente). A combinação (tratamento 14) SV com sacarose, TE por cinco minutos, SE com 20% de EG proporcionou a maior taxa de MII (metáfase II) (44,55%). As piores taxas de MII para os ovócitos dos tratamentos que envolveram a sacarose, foram encontradas nas combinações de SE com 40% de EG e TE por 15 e 5 minutos (0,95 e 0,00%, respectivamente). A maior taxa de MII para os ovócitos dos tratamentos que envolveram a trealose foi de 5,32%. As maiores taxas de CC (condensação da cromatina) foram observadas nos tratamentos que envolveram a trealose. Observou-se que a taxa de MII do tratamento 14 foi significativamente diferente do tratamento controle (44,55% e 74,95%, respectivamente). Conclui-se que a avaliação morfológica de ovócitos imaturos após o descongelamento e reidratação, com base na retração citoplasmática, não reflete o verdadeiro potencial de maturação in vitro dos ovócitos. O uso da trealose na SV influenciou negativamente a maturação ovocitária. O uso da sacarose na SV influenciou positivamente a maturação ovocitária. Concentrações elevadas de EG (40%) associado a um longo TE (cinco e 15 minutos) não favoreceram o desenvolvimento ovocitário. O protocolo utilizando 20% de EG na SE, com TE de cinco minutos e com a SV contendo 40% de EG + 1,0 mol L-1 de sacarose, proporcionou índices razoáveis de maturação in vitro, para ovócitos imaturos de bovinos.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:localhost:123456789/5036 |
| Date | 31 August 2004 |
| Creators | Martins, Rodrigo Duarte |
| Contributors | Costa, Eduardo Paulino da, Torres, Ciro Alexandre Alves, Guimarães, José Domingos, Paula, Tarcízio Antônio Rego de, Mâncio, Antonio Bento |
| Publisher | Universidade Federal de Viçosa, Mestrado em Medicina Veterinária, UFV, BR, Biotecnologia, diagnóstico e controle de doenças; Epidemiologia e controle de qualidade de prod. de |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFV, instname:Universidade Federal de Viçosa, instacron:UFV |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.0026 seconds