Made available in DSpace on 2018-08-01T22:56:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_9019_Larissa Marchiori Sena.PDF: 53 bytes, checksum: 1ce8238c81f58fb9f9a1ceb2d7fa646a (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / Infecções uterinas estão entre as principais causas de infertilidade em bovinos, influenciando negativamente no desempenho reprodutivo. Assim, objetivou-se diagnosticar endometrites clínicas (EC) e subclínicas (ES) por meio de avaliações macroscópicas, citológicas e histológicas de úteros bovinos, e avaliar sua influência sobre as estruturas e alterações ovarianas, número de oócitos recuperados, e qualidade oocitária. Foram coletados 171 tratos reprodutivos em matadouro frigorífico. As ES foram diagnosticadas por meio de citologia endometrial e identificação superior a 3% de neutrófilos, a partir da contagem de 200 células. Animais em fase estrogênica, com presença de folículo entre 12,5 e 15,5 mm de diâmetro foi considerado o percentual de 18% de neutrófilos . As EC foram identificadas pela presença de secreção uterina turva, catarral ou purulenta. O diagnóstico de EC e ES foi confirmado na análise histopatológica pela presença de infiltrados de células inflamatórias no endométrio. Os ovários foram avaliados macroscopicamente quanto à estrutura e alterações ovarianas, sendo estas denominadas: folículo dominante (FD) (12,5 e 15,5 mm), corpo lúteo (CL), cistos ovarianos (CF) e ooforites (OF). A avaliação da qualidade oocitária foi realizada de acordo com o número de camadas de células do cumulus e aspecto do citoplasma, sendo classificados como: grau I (GI), grau II (GII), grau III (GIII) e grau IV (GIV). Os resultados foram submetidos à estatística descritiva, ANOVA paramétrica e ao teste de Tukey. Os dados não paramétricos foram analisados pelo teste de Kruskall Wallis e teste de Dunn a 5% de significância. EC estiveram presentes em 12,2% (n=14) dos animais, enquanto ES foram diagnosticadas em 4,1% (n=7) dos casos. Animais com EC e ES apresentaram FD em 28,6% (n=6) ovários, enquanto os animais saudáveis, em 30,6% (n=46). CL estiveram presentes em 38,1% (n=8) dos animais com infecção uterina e em 42,6% (n=64) dos bovinos sadios. CF foram encontrados em 4,7% (n=1) dos animais com infecções e em 0,6% (n=1) dos animais sadios. OF foram diagnosticadas em 4,7% (n=1) dos bovinos com endometrites, e em 0,6% (n=1) dos sadios. Na análise da recuperação oocitária, animais com EC, ES e sadios apresentaram média de recuperação de 10,3±7,1, 15,0±9,6 e 10,6±8,3 oócitos/animal, respectivamente. Na avaliação da qualidade oocitária dentro de cada grupo, tanto animais sadios quanto com EC apresentaram maior incidência oócitos GIII (4,4±4,9 e 3,4±3,2), respectivamente, em relação aos demais graus de qualidade oocitária. Enquanto animais com ES apresentaram maior ocorrência de oócitos GIV (6,8±2,7). Na comparação do grau de qualidade entre animais com EC, ES e sadios, não foi observada diferença entre as taxas de oócitos GI, GII, GIII e GIV. A presença de endometrites não influenciou as estruturas e alterações ovarianas e número de oócitos recuperados por animal. As endometrites alteraram a qualidade oocitária dentro de cada grupo, entretanto, não afetou a qualidade oocitária quando avaliada entre os grupos.

Orientador: Marcelo Fabio Gouveia Nogueira / Resumo: In vivo, a maturação oocitária é gonadotrofina-dependente (FSH e LH) e, até haver o devido estímulo, o oócito é mantido em parada meiótica (prófase I) devido à manutenção dos níveis intraoocitários de cAMP. O FSH é o responsável pelo crescimento inicial do folículo antral enquanto o LH promove a maturação final oocitária (no estágio pós-desvio), sinalizando a produção de peptídeos EGF-like (fator de crescimento semelhante ao epidermal) nas células da granulosa. Estes se ligam ao seu receptor (EGFR) nas células do cumulus ativando a via da proteína cinase ativadora de mitógeno (MAPK), causando o fechamento das junções comunicantes do tipo GAP e culminando na retomada meiótica. Os peptídeos AREG (Ampirregulina)e EREG (Epirregulina) são utilizados na maturação in vitro em diferentes espécies e em substituição ou associação com o FSH. Alguns estudos demonstram que, quando maturados com esses peptídeos, os oócitos desenvolvem embriões de melhor qualidade, com maior número de células da massa celular interna e mais parecidos com aqueles maturados in vivo. No entanto, o oócito retirado do microambiente folicular retoma a meiose espontaneamente, de forma precoce e não sincronizada entre o núcleo e o citoplasma. Para melhorar os resultados da maturação in vitro, é importante retardar a retomada espontânea meiótica. A literatura descreve a eficácia do precursor do peptídeo natriurético tipo C (NPPC) em manter in vitro a concentração de cAMP oocitária similar à fisiológica. Diante disso... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In vivo, the oocyte maturation is gonadotropin-dependent (LH and FSH) and, until there is a due stimulation, the oocyte is maintained in meiotic arrest (prophase I) due to the maintenance of intra-oocyte levels of cAMP. The FSH is responsible for initial growth of the antral follicle while the LH promotes final oocyte maturation (post-deviation), signaling the production of EGF-like (Epidermal Growth Factor-like) peptides in the granulosa cells. They bind to their receptor (EGFR) on cumulus cells activating the mitogen-activating protein kinase (MAPK) pathway causing closure of Gap Junctions culminating in meiosis resumption. The AREG (amphiregulin) and EREG (epiregulin) peptides are used in vitro maturation in different species and in substitution or association with FSH. Same studies shown that when mature with these peptide, oocytes develop better-quality embryos, with more cells in the inner cell mass, and more similar to those in vivo. However, the oocyte removed from the follicular microenvironment, resumes meiosis spontaneously, early and not synchronized between the cytoplasm and nucleus. To improve the in vitro maturation results, it is important delay spontaneous meiotic resumption. The literature describes the efficacy of the C-type natriuretic peptide (NPPC) precursor in maintaining the physiological-like oocyte cAMP concentration in vitro. In this study, the effect of AREG on the abundance of oocyte and cumulus cell transcript was observed, as well as its effect ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Jaqueline Oliveira (jaqueoliveiram@gmail.com) on 2008-12-03T17:25:03Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_IngridOliveiraSilva.pdf: 1065354 bytes, checksum: 5c704b05ad9fbdc93257f3bf700ca39a (MD5) / Approved for entry into archive by Georgia Fernandes(georgia@bce.unb.br) on 2009-01-22T13:45:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_IngridOliveiraSilva.pdf: 1065354 bytes, checksum: 5c704b05ad9fbdc93257f3bf700ca39a (MD5) / Made available in DSpace on 2009-01-22T13:45:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_IngridOliveiraSilva.pdf: 1065354 bytes, checksum: 5c704b05ad9fbdc93257f3bf700ca39a (MD5) / O presente trabalho teve o objetivo de padronizar um protocolo de pré-maturação, onde complexos cumulus oophorus (COCs- do inglês cumulus oocyte complex) bovinos imaturos são co-cultivados com hemi-secções foliculares (HS) em meio definido (α-MEM+PVA). No experimento 1 foi avaliado, o efeito deste co-cultivo pelo período de 24 horas na manutenção do estágio imaturo dos COCs. Os grupos experimentais avaliados foram: G1=TCM- 199+SFB+COCs; G2=TCM-199+SFB+HS+COCs; G3=α-MEM+PVA+COCs; G4=α- MEM+PVA+HS+COCs. No experimento 2, foi feita a avaliação do potencial de reversibilidade do processo inibitório após a pré-maturação, cultivando os COCs previamente pré-maturados em meio de maturação padrão (TCM-199+SFB). Os meios de cultivo destes experimentos foram armazenados a –20° C para posterior dosagem dos hormônios estradiol (E2) e progesterona (P4) com a utilização de kits de radioimunoensaio. Em média 4 COCs de cada tratamento dos experimentos 1 e 2 foram processados para análise da maturação citoplasmática ao microscópio eletrônico de transmissão. Os resultados do experimento 1 mostram que, os tratamentos G2, G3 e G4 foram efetivos na inibição da progressão da meiose, com respectivamente 81,2; 74,0 e 96,3% dos COCs imaturos. O tratamento G1 (controle) apresentou ao final do tempo de cultivo 83,1% de COCs maduros; P<0,05. No experimento 2, somente os grupos G1 e G3 apresentaram mais de 80% de oócitos maduros ao final das 24 horas de cultura em meio padrão. Os grupos G2 e G4 apresentaram apenas 29,1 e 16,3% respectivamente dos COCs maduros ao final do cultivo; P<0,05. A dosagem dos hormônios esteróides mostrou no experimento 1, que o grupo G3 apresentou a maior produção de E2 (2444,24 pg/mL) e menor produção de P4 (3,47 ng/mL); P<0,0001. A produção de P4 foi máxima no grupo G2 (77,87 ng/mL). A presença das HS promoveu o aumento da produção deste hormônio nos grupos G2 e G4. No experimento 2, a concentração de E2 foi maior no grupo pré-maturado em meio definido, assim como a concentração de P4, que foi significativamente maior neste tratamento (G3), 42,82 ng/mL; P< 0,0032. A análise ultraestrutural dos COCs mostrou que a presença das HS (grupos G2 e G4) provoca a morte destes ainda no período de pré-maturação. No grupo G3, foi observado que o meio de cultivo α-MEM+PVA promoveu o início da maturação citoplasmática durante a pré-maturação. No experimento 2, este processo foi completado após o cultivo em meio de maturação padrão. Conclui-se portanto que o meio de cultura α-MEM+PVA fornece um ambiente adequado para que os COCs sofram a pré-maturação, já que a relação E2:P4 neste sistema é condizente com a fase em que os COCs se encontram, além de que este meio propicia uma alta taxa de inibição da maturação nuclear seguida de uma grande porcentagem de reversão desta inibição. Outro fato importante foi que a maturação citoplasmática foi iniciada ainda no período de prématuração, e chegou a termo durante a maturação in vitro. O co-cultivo com HS, no entanto, não gerou resultados promissores. ___________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This study aimed to standardize a physiological protocol of pre- maturation, where immature bovine cumulus oocyte complex (COCs) are co-cultured with follicular hemissections (HS) in defined medium (α-MEM + PVA). In the first experiment it was evaluated, the effect of this co-culture for the period of 24 hours in the maintenance of COCs’ immature stage. The following experimental groups evaluated were: G1=TCM-199 +FCS+COCs; G2=TCM- 199+FCS+HS+COCs; G3=α-MEM+PVA+COCs; G4=α-MEM+PVA+HS+COCs. The experiment 2 was performed to assess the reversibility potential of the inhibitory process after the pre-maturation. COCs previously pre-matured were cultured in standard medium of maturation (TCM-199 + SFB). The culture medium of these experiments were stored at -20° C for later dosage of hormones estradiol (E2) and progesterone (P4) with radioimmunoassay kits. On average 4 COCs of each treatment of experiments 1 and 2 were processed for cytoplasmic maturation analysis at the transmission electron microscope. The results of the experiment 1 show that the treatments G2, G3 and G4 were effective in maintain meiotic arrest, with 81.2, 74.0 and 96.3% respectively of immature COCs. Treatment G1 (control) showed at the end of culture 83.1% of mature COCs, P <0.05. In experiment 2, only the groups G1 and G3 showed more than 80% of mature oocytes at the end of 24 hours of culture in the medium standard. The groups G2 and G4 had only 29.1 and 16.3% respectively of the mature COCs at the end of the culture, P<0.05. The dosage of steroid hormones in Experiment 1 showed that the G3 had the highest production of E2 (2444.24 pg / mL) and lower production of P4 (3.47 ng / mL), P <0.0001. The production of P4 was the highest in group G2 (77.87 ng / mL). Due the presence of HS there was an increasing production of this hormone in groups G2 and G4. In experiment 2, the concentration of E2 was higher in group pre-matured in defined medium, as well as the concentration of P4, which was significantly higher in this treatment, 42.82 ng / mL, P<0.0032.The ultrastructural analysis of the COCs showed that the presence of HS (groups G2 and G4) causes the cellular death still in the prematuration culture. In group G3, it was observed that the medium α-MEM + PVA promoted the beginning of the cytoplasmic maturation during the pre-maturation. In experiment 2, this process has been completed after culture in standard maturation medium. It comes to the conclusion that the culture α-MEM + PVA provides a suitable environment for the COCs suffer a pre-maturation, as the relationship E2: P4 in this system is consistent with the stage in which the COCs are. In addition, this system provides a high rate of inhibition of nuclear maturation followed by a large percentage of reversal of this inhibition. Another important fact is that the cytoplasmic maturation began still in the prematuration period, and finished during in vitro maturation. The co-culture with HS, didn’t generate promising results.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-08-17Bitstream added on 2014-06-13T18:41:47Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_apc_dr_jabo.pdf: 558027 bytes, checksum: ed704b102c75b6393c69efd003167c97 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O principal objetivo das pesquisas com MIV canina tem sido o desenvolvimento e implementação adequados da fecundação in vitro (FIV) e do cultivo embrionário in vitro (CIV) para a obtenção de embriões das espécies de canídeos em extinção. Concomitantemente à publicação de dados sobre índices de MIV em cadelas, surgiram alguns relatos sobre taxas de maturação completa e indícios de retomada da meiose em oócitos provenientes de folículos pré-ovulatórios. Assim, o presente estudo objetivou investigar a incidência de maturação oocitária intraovariana de cadelas em anestro, estro natural e estro induzido. Os oócitos foram colhidos após fatiamento ovariano e imediatamente corados com bisbenzimida para avaliação dos diferentes graus de configuração cromossômica. Em conclusão podemos afirmar que há retomada e progressão da meiose em oócitos, no ambiente intrafolicular; não há diferença estatística (P<0,05) nas porcentagens das diferentes configurações cromossômicas de acordo com os estádios reprodutivos avaliados neste estudo (anestro/estro e estro induzido). / The main canine MIV research goal has been adequate in vitro fecundation develop and implementation (FIV) and the in vitro embryo cultivation (CIV) to obtain in extinction canid species embryos. Concomitantly to data publication about bitch MIV indexes appeared some relates about complete maturation rates and indications of meiosis retaken in oocytes from pre-ovulatory follicles. This way, the present study aimed investigate the anestrus bitches interovarian oocytary maturation incidence, natural estrus and estrus-induced The oocytes were collected after the ovary slicing and immediately colored with bisbenzimide to evaluate the different chromosomic configuration degrees. As a conclusion, can be affirmed there is meiosis progression and resumption in oocytes, in the intra follicular environment. There were no statistical difference (P<0.05) between the different chromosomic configurations percentages according to the reproductive stages evaluated in this study (anestrus/estrus and estrus- induced).

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2015. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2015-11-19T17:18:56Z No. of bitstreams: 1 2015_LauraVanessaMourãoGulart.pdf: 1266298 bytes, checksum: cfa73ee576ff7b692bad82afcbbcaa82 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-12-30T14:37:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_LauraVanessaMourãoGulart.pdf: 1266298 bytes, checksum: cfa73ee576ff7b692bad82afcbbcaa82 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-30T14:37:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_LauraVanessaMourãoGulart.pdf: 1266298 bytes, checksum: cfa73ee576ff7b692bad82afcbbcaa82 (MD5) / A produção de embriões in vitro é uma biotécnica importante para a reprodução e constitui-se como ferramenta valiosa para estudos de interações de gametas e/ou embriões e, com isso, torna-se cada vez mais excelente modelo não somente para averiguações sobre aspectos sanitários, como também relacionados a processos tóxicos e interações presentes no ambiente in vitro. O objetivo deste estudo foi testar e analisar o efeito dos diferentes meios de maturação oocitária in vitro (MEMB e MEMO) associados ou não FSH em concentrações de 1 e 10ng/ml, sobre a produção de blastocistos bovinos e a expressão de genes relacionados a competência e metabolismo embrionário (GLUT1, GLUT4, PDH, G6PDH, GAPDH, COX2, CDX, HSP70, BAX e BCL2). Em todos os experimentos, oócitos foram obtidos de abatedouro, coletados de vacas adultas e maturados em meio controle (TCM199) e meios testes (MEMO, MEMO+1FSH, MEMO+10FSH, MEMB, MEMB+1FSH, MEMB+10FSH). No Experimento 1, os oócitos foram fertilizados e cultivados até o estágio de blastocisto, avaliando e correlacionando a adição de FSH com 1ng/mL ou 10ng/mL nos meios MEMB e MEMO. No experimento 2, avaliou-se a expressão dos genes GLUT1, GLUT4, PDH, G6PDH, GAPDH, COX2, CDX, HSP70, BAX e BCL2 em embriões oriundos da maturação em meios diferentes suplementados ou não com FSH (1 ou 10ng/mL). No experimento 1, os resultados demonstraram que a dose de FSH 10ng/mL no meio MEMO+10FSH diminui a produção de embriões; e nos meios MEMO e MEMO+1FSH a produção de embriões é a mesma. Nos meios MEMB com 1FSH e 10FSH não houve diferença na produção de embriões. Já no meio MEMB sem FSH a produção de embriões foi igual ao do grupo controle TCM199. A expressão de GLUT4, GLUT1, PDH, COX2 e BAX em embriões maturados em meios de maturação controle e nos grupos de meios definidos não foi diferente. O gene G6PDH foi expresso em baixa abundância nos meios TCM199, MEMB+FSH e MEMO. Nos meios MEMB e MEMO+FSH ocorre um aumento do gene G6PDH, sendo estes semelhantes. A abundância de GAPDH nos meios TCM199 e MEMB+FSH é menor; e nos meios MEMB, MEMO e MEMO+FSH é maior. Nos genes HSP70 não há significância entre MEMB e MEMB+FSH, e sim entre MEMO e MEMO+FSH. Nos genes CDX apenas o MEMB esta elevado, o MEMO não é detectado, e no MEMO+FSH foi pouco expresso. Em relação ao BCL2 o TCM199 foi o mais abundantemente expresso e semelhante aos meios MEMO e MEMO+FSH. Já com os meios MEMB e MEMB+FSH são poucos expressos. Concluiu-se que a produção de embriões no meio MEMO foi menor que nos outros tratamentos; e o meio MEMB produz a mesma taxa de embriões que o grupo controle. A adição de FSH aos meios de maturação diminui a produção de embriões no MEMB, e leva, na maioria das vezes baixa expressão de marcadores de competência. / The production of in vitro embryos is an important biotechnical technique for reproduction and it constitutes a valuable tool for studies of interactions of gametes and / or embryos and, therefore, it becomes increasingly an excellent model not only for check ups concerning sanitary aspects, but also when it is related to toxic processes and actual interactions in the in vitro environment. The objective of this study was to test and analyze the effect of different oocyte maturation mediums in vitro (MEMB and MEMO) either associated or not FSH at concentrations of 1 and 10 ng / ml, on the production of bovine blastocysts and the expression of genes related to competence and embryonic metabolism (GLUT1, GLUT4, PDH, G6PDH, GAPDH, COX2, CDX, HSP70, BAX and BCL2). In all experiments, oocytes were obtained from a slaughterhouse, collected from adult cows and matured in control medium (TCM199) and medium tests (MEMO MEMO + 1FSH, MEMO + 10FSH, MEMB, MEMB + 1FSH, MEMB + 10FSH). In Experiment 1, the oocytes were fertilized and cultured up to the blastocyst stage, assessing and correlating the addition of FSH with 1 ng / ml or 10 ng / mL in MEMB and MEMO mediums. In experiment 2, the expression of GLUT1 gene, GLUT4, PDH, G6PDH, GAPDH, COX2, CDX, HSP70, BAX and BCL2 was evaluated in embryos from maturation in different medium either supplemented or not with FSH (1 or 10 ng / mL) . In experiment 1, the results demonstrated that the FSH dose of 10 ng / ml in the medium MEMO + 10FSH decreases the production of embryos; and in the mediums MEMO and MEMO + 1FSH the production of embryos is the same. In the MEMB medium with 1FSH and 10FSH there was no difference in embryo production. But in the MEMB medium without FSH, the embryo production was the same as the one in the TCM199 control group. The expression of GLUT4, GLUT1, PDH, COX2 and BAX in embryos matured in control maturation medium and defined medium groups was no different. The G6PDH gene was expressed in low abundance in TCM199 MB + FSH and MEMO mediums. In the MEMB and MEM + FSH mediums, an increase of the G6PDH gene happens, and they are similar. The abundance of GAPDH in TCM199 and MEMB + FSH mediums is lower; and in the MEMB, MEMO and MEMO + FSH mediums is higher. In the HSP70 genes there is no significance between MEMB and MEMB + FSH, but there is some difference between MEMO and MEMO + FSH. In the CDX genes, only the MEMB is high, MEMO is not detected, and the MEMO + FSH was little expressed. Concerning the BCL2, the TCM199 was the most expressed and it was similar to the MEMO and MEMO + FSH mediums. But with the MEMB and MEMB + FSH mediums, they are little expressed. It was concluded that the production of embryos in the MEM medium was lower than the other treatments; and the MEMB medium produces the same rate of embryos than that of the control group. The addition of FSH to the maturation mediums decreases the production of embryos in the MEMB and leads in most cases to low expression of competence markers.

A utilização de uréia na alimentação de fêmeas bovinas pode prejudicar o desempenho reprodutivo destes animais, provavelmente decorrente do aumento do teor de nitrogênio uréico plasmático (NUP). O objetivo deste estudo foi avaliar se alimentação com uréia por curto prazo oferecida a novilhas, e conseqüente aumento de NUP, exerce influência sobre a quantidade, qualidade e competência dos complexos cumulus-oócito (CCO). O experimento teve duração de 62 dias, dividido em oito semanas e dois períodos. Foram utilizadas 40 novilhas mestiças mantidas a pasto, alocadas a dois tratamentos, utilizando-se delineamento \"cross-over\": dieta sem uréia (SU): 5 kg (matéria original) de silagem de milho e 1 kg de concentrado/animal/dia ou dieta com uréia (U): 5 kg de silagem de milho e 1 kg de concentrado contendo 75 g de uréia/animal/dia. Os animais selecionados a cada semana receberam as dietas por seis dias, uma única vez ao dia. No sexto dia de oferecimento das dietas, foram realizadas aspiração folicular (OPU) e colheita de sangue, em jejum e 3 horas após a alimentação. Imediatamente após a OPU, foi realizada contagem total de CCO recuperados e classificação dos mesmos em viáveis e inviáveis. Apenas os viáveis foram destinados à produção In vitro de embriões. Em relação ao teor de NUP, houve efeito de interação entre tratamento e tempo de colheita (P=0,04) e dentro de cada tempo foi observado aumento significativo (P<0,01) para os animais do tratamento U. Não foi observado efeito de tratamento em relação ao número total de CCO recuperados por animal (média ± EPM: SU=9,15 ± 0,82 vs. U=8,82 ± 0,95), nem sobre a porcentagem de CCO viáveis sobre total de CCO recuperados por animal (SU=73,61% ± 2,47 vs. U=70,26% ± 2,31). A taxa de clivagem obtida no dia 3 após a inseminação In vitro (IIV) e as taxas de blastocisto nos dias 6, 7 e 9 após a IIV, não foram influenciadas pelo tratamento. Porém, no 11º pós IIV, houve diminuição (P=0,04) da taxa de blastocistos eclodidos para o tratamento U (SU=82,50% ± 0,05 vs. U=64,33% ± 0,07). Apesar do aumento do teor de NUP observado nas novilhas do tratamento U, a quantidade, qualidade e competência dos CCO durante as primeiras clivagens até atingirem o estádio de blastocisto In vitro não foram influenciadas pelo oferecimento de 75 g de uréia na dieta, durante seis dias. Porém, foi observada redução da taxa de eclosão dos blastocistos das novilhas do tratamento U. / Urea feeding offered to bovine dams may damage their reproductive performance, probably due to an increase in levels of plasmatic urea nitrogen (PUN). The aim of this study was evaluate if short-term urea feeding of heifers, following high PUN levels, would have an influence on the quantity, quality and competence of cumulus-oocyte complexes (COC). Trial lasted 62 days, divided into eight weeks and two periods. Forty crossbred grazing heifers were allocated to one of two treatments, using a cross-over design: diet without urea (WU): 5 kg (as fed) of corn silage and 1 kg of concentrated/animal/day, or diet with urea (U): 5 kg of corn silage and 1 kg of concentrated with 75 g of urea/animal/day. Heifers selected in each week received these diets once a day, for six days. On the sixth day of diets? offer, ovum pick-up (OPU) and blood sampling at fasting and 3 hours after feeding were carried out. Immediately after OPU, total COC recovered was counted and classified as either viable or unviable. Only viable were destined to In vitro embryo production. In relation to PUN level, there was a significant interaction between treatment and sampling time (P=0.04) and a significant (P<0.01) increase in animals undergoing U treatment for each of the test times. No significant effect was observed relative to either the total number of recovered COC per animal (mean ± SEM: WU=9.15 ± 0.82 vs. U=8.82 ± 0.95), or the viable COC as a percentage of total recovered COC per animal (WU=73.61% ± 2.47 vs. U=70.26% ± 2.31). Cleavage ratio assessed on day 3 post In vitro insemination (IVI) and blastocyst ratio on days 6, 7 and 9 post IVI were not influenced by treatments. However, there was a significant treatment effect (P=0.04) in relation to hatched blastocysts on day 11 after IVI (WU=83% ± 0.05 vs. U=64% ± 0.07). Even though higher PUN levels were observed in animals from treatment U, quantity, quality and competence of the COC during first cleavages until reaching the blastocyst stage In vitro were not influenced by adding 75 g of urea on the diet offered to heifers, during six days. Neverthless, a decline in hatched blastocysts rate was observed in heifers of treatment U.

Orientador: José Buratini Júnior / Resumo: A maturação in vitro (MIV) é uma etapa fundamental da produção in vitro de embriões bovinos (PIV). A conclusão prematura da maturação nuclear durante a MIV é considerada como uma das principais causas da eficiência limitada da PIV. Em camundongos, o fator de crescimento dos fibroblastos 8 (FGF8) regula a atividade do peptÌdeo natriurético tipo C (NPPC) aumentando a expressão de seu receptor (NPR2) e contribuindo assim para o bloqueio meiótico. O principal objetivo deste trabalho foi testar os efeitos do FGF8 sobre a dinâmica da quebra da vesícula germinativa e progresso da meiose durante a MIV induzida com FSH ou ampirregulina (AREG) em bovinos. Paralelamente, os efeitos do FGF8 sobre a expansão do cumulus e metabolismo da glicose também foram testados. Na MIV induzida com AREG, mas não com FSH, o FGF8 diminuiu a porcentagem de oócitos com quebra da vesícula germinativa às 6 e 9 horas do cultivo, enquanto aumentou a expressão do RNAm do NPPC, mas não do NPR2, nas células do cumulus. Distintamente, na MIV com FSH, o FGF8 diminuiu a porcentagem de oócitos em Meiose I às 9 horas de cultivo. O FGF8 não afetou a porcentagem de oócitos em Meiose II às 22 horas da MIV, nem a expansão do cumulus, embora tenha aumentado a expressão do RNAm de genes da cascata ovulatória [prostaglandina endoperoxido sintase 2 (PTGS2) e desintegrina e metaloproteinase de domínio contendo proteÌna 10 (ADAM 10)]. Além disso, o FGF8 diminuiu o consumo de glicose e a produção de lactato na MIV com FSH, m... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

O objetivo do presente estudo foi comparar o efeito da idade de doadores de oócitos sobre os parâmetros reprodutivos, a taxa de recuperação e qualidade de oócitos após ICSI utilizando sêmen sexado. Éguas Pôneis de Polo (n = 79) e Puro-Sangue (n = 23) doadoras de oócitos (400-600kg e 3-29 anos) foram utilizados durante as estações reprodutivas de 2009/2010 e 2011 no hemisfério Sul (San Luis, Argentina) e norte (Kentucky, EUA), respectivamente. As éguas foram divididas em três categorias experimentais: Jovens (YM: 3-10 anos), Meia Idade (MA: 11-17a) e Idosas (OM&ge;18a). Um total de 326 oócitos recuperados in vivo a partir de folículos pré-ovulatórios (n=279) e folículos imaturos em crescimento (n=47). Desses, 224 oócitos foram recuperados, classificado e dirigido a um programa comercial ICSI com Pôneis de Polo (primeira estação). Durante a segunda estação, 57 oócitos foram recuperados a partir de folículos pré-ovulatórios e 47 oócitos de folículos em crescimento e congelados em nitrogênio líquido para ser usado posteriormente em outro estudo. Os pontos experimentais avaliados foram: intervalos (dias) entre a aspiração ou a ovulação (AS/OV) ao PGF, PGF ao GnRH (Dia 0=GnRH), AS/OV ao Dia 0, e AS/OV ao Dia&#43;1; edema uterino (UE); tonus cervical (CT); diâmetro máximo do folículo dominante (MdF1) em D0 e D&#43;1, e a taxa de crescimento folicular. O número total de aspirações, o número de folículos aspirados e oócitos por aspiração e/ou folículo, o grau de expansão das células do cúmulos, a presença e qualidade do corpo polar (PB), o volume ooplasma, o intervalo de GnRH a aspiração, a GnRH a ICSI, e a taxa de clivagem (CR) depois da ICSI também foram avaliados. Foram observadas diferenças significativas entre as três categorias experimentais (YM, MA e OM) para: intervalos (dias) entre PGF-GnRH, AS/OV-GnRH, AS/OV-Day 1, edema uterino no Dia 0, CT em Dia 1, MdF1 no D0 e D&#43;1 e volume de ooplasma. A taxa de recuperação in vivo (RR) não foi afetada pela idade (média de 102%, 85% e 73,4% de oócitos recuperados por ciclo, por F1 e por folículo, respectivamente, P> 0,05). O CR não diferiu entre as por ciclo, por F1 e por folículo, respectivamente, P> 0,05). O CR não diferiu entre as categorias experimentais. Em conclusão, um efeito de envelhecimento pode ser observado em vários parâmetros reprodutivos em éguas. Os ovócitos no presente estudo tiveram um menor volume de ooplasma para OM comparados com YM, mas isso não foi eficaz em predizer a viabilidade dos oócitos ou o potencial para o desenvolvimento para a avaliação da taxa de clivagem após ICSI utilizando sêmen sexado / The aim of the present study was to compare the effect of oocyte donors` age on reproductive parameters, recovery rate and quality of oocytes after ICSI using sexed semen. Polo Ponies (n=79) and Thoroughbred (n=23) oocyte donor mares (400-600kg and 3-29 years) were used during the 2009/2010 and 2011 reproductive seasons in the Southern (San Luis, Argentina) and in the Northern hemispheres (Kentucky, USA), respectively. Mares were divided into three experimental categories: Young Mares (YM: 3-10&#1059;), Middle Age Mares (MA: 11-17&#1059;) and Old Mares (OM18&#1059;). A total of 326 oocytes were recovered in vivo from pre-ovulatory follicles (n=279) and immature-growing follicles (n=47). From those, 224 oocytes were recovered, sorted and directed to a commercial ICSI program with Polo Ponies (first season). During the study`s second season, 57 oocytes were recovered from pre-ovulatory follicles and 47 oocytes from growing follicles and frozen in liquid nitrogen to be used in another study. The evaluated experimental end-points were: Intervals (days) between aspiration or ovulation (AS/OV) to PGF, PGF to GnRH (Day 0=GnRH), AS/OV to Day 0, and AS/OV to Day &#43; 1; uterine edema (UE); cervical tone (CT); maximum diameter of dominant follicle (MdF1) on D0 and D&#43;1, and follicular growth rate. Total number of aspirations, number of follicles aspirated and oocytes recovered per aspiration and/or follicle, the degree of cumulus cell expansion, the presence and quality of polar body (PB), the ooplasm volume, the interval from GnRH to aspiration, GnRH to ICSI, and the cleavage rate (CR) after ICSI were also evaluated. Significant differences between the three experimental categories (YM, MA and OM) were observed for: intervals (days) between PGF-GnRH, AS/OV-GnRH, AS/OV-Day &#43;1, uterine edema on Day 0, CT on Day &#43;1, MdF1 on D0 and D&#43;1 and ooplasm volume. The in vivo recovery rate (RR) was not affected by age (average of 102%, 85% and 73.4% of oocyte recovered per cycle, per F1 and per follicle, respectively; P>0.05). The CR did not differ among experimental categories. In conclusion, an effect of aging could be observed in several reproductive parameters in mares. The oocytes in the present study had a smaller ooplasm volume for OM compared to YM, but this was not effective in predicting oocyte viability or the potential to development through evaluation of the cleavage rate after ICSI using sexed semen

A utilização de uréia na alimentação de fêmeas bovinas pode prejudicar o desempenho reprodutivo destes animais, provavelmente decorrente do aumento do teor de nitrogênio uréico plasmático (NUP). O objetivo deste estudo foi avaliar se alimentação com uréia por curto prazo oferecida a novilhas, e conseqüente aumento de NUP, exerce influência sobre a quantidade, qualidade e competência dos complexos cumulus-oócito (CCO). O experimento teve duração de 62 dias, dividido em oito semanas e dois períodos. Foram utilizadas 40 novilhas mestiças mantidas a pasto, alocadas a dois tratamentos, utilizando-se delineamento \"cross-over\": dieta sem uréia (SU): 5 kg (matéria original) de silagem de milho e 1 kg de concentrado/animal/dia ou dieta com uréia (U): 5 kg de silagem de milho e 1 kg de concentrado contendo 75 g de uréia/animal/dia. Os animais selecionados a cada semana receberam as dietas por seis dias, uma única vez ao dia. No sexto dia de oferecimento das dietas, foram realizadas aspiração folicular (OPU) e colheita de sangue, em jejum e 3 horas após a alimentação. Imediatamente após a OPU, foi realizada contagem total de CCO recuperados e classificação dos mesmos em viáveis e inviáveis. Apenas os viáveis foram destinados à produção In vitro de embriões. Em relação ao teor de NUP, houve efeito de interação entre tratamento e tempo de colheita (P=0,04) e dentro de cada tempo foi observado aumento significativo (P<0,01) para os animais do tratamento U. Não foi observado efeito de tratamento em relação ao número total de CCO recuperados por animal (média ± EPM: SU=9,15 ± 0,82 vs. U=8,82 ± 0,95), nem sobre a porcentagem de CCO viáveis sobre total de CCO recuperados por animal (SU=73,61% ± 2,47 vs. U=70,26% ± 2,31). A taxa de clivagem obtida no dia 3 após a inseminação In vitro (IIV) e as taxas de blastocisto nos dias 6, 7 e 9 após a IIV, não foram influenciadas pelo tratamento. Porém, no 11º pós IIV, houve diminuição (P=0,04) da taxa de blastocistos eclodidos para o tratamento U (SU=82,50% ± 0,05 vs. U=64,33% ± 0,07). Apesar do aumento do teor de NUP observado nas novilhas do tratamento U, a quantidade, qualidade e competência dos CCO durante as primeiras clivagens até atingirem o estádio de blastocisto In vitro não foram influenciadas pelo oferecimento de 75 g de uréia na dieta, durante seis dias. Porém, foi observada redução da taxa de eclosão dos blastocistos das novilhas do tratamento U. / Urea feeding offered to bovine dams may damage their reproductive performance, probably due to an increase in levels of plasmatic urea nitrogen (PUN). The aim of this study was evaluate if short-term urea feeding of heifers, following high PUN levels, would have an influence on the quantity, quality and competence of cumulus-oocyte complexes (COC). Trial lasted 62 days, divided into eight weeks and two periods. Forty crossbred grazing heifers were allocated to one of two treatments, using a cross-over design: diet without urea (WU): 5 kg (as fed) of corn silage and 1 kg of concentrated/animal/day, or diet with urea (U): 5 kg of corn silage and 1 kg of concentrated with 75 g of urea/animal/day. Heifers selected in each week received these diets once a day, for six days. On the sixth day of diets? offer, ovum pick-up (OPU) and blood sampling at fasting and 3 hours after feeding were carried out. Immediately after OPU, total COC recovered was counted and classified as either viable or unviable. Only viable were destined to In vitro embryo production. In relation to PUN level, there was a significant interaction between treatment and sampling time (P=0.04) and a significant (P<0.01) increase in animals undergoing U treatment for each of the test times. No significant effect was observed relative to either the total number of recovered COC per animal (mean ± SEM: WU=9.15 ± 0.82 vs. U=8.82 ± 0.95), or the viable COC as a percentage of total recovered COC per animal (WU=73.61% ± 2.47 vs. U=70.26% ± 2.31). Cleavage ratio assessed on day 3 post In vitro insemination (IVI) and blastocyst ratio on days 6, 7 and 9 post IVI were not influenced by treatments. However, there was a significant treatment effect (P=0.04) in relation to hatched blastocysts on day 11 after IVI (WU=83% ± 0.05 vs. U=64% ± 0.07). Even though higher PUN levels were observed in animals from treatment U, quantity, quality and competence of the COC during first cleavages until reaching the blastocyst stage In vitro were not influenced by adding 75 g of urea on the diet offered to heifers, during six days. Neverthless, a decline in hatched blastocysts rate was observed in heifers of treatment U.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-15Bitstream added on 2014-06-13T18:44:25Z : No. of bitstreams: 1 magajevski_fs_dr_jabo.pdf: 1942398 bytes, checksum: b212ff62ed36cb609ef85e31f2538b3b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leptospirose e a brucelose são duas das mais importantes enfermidades da esfera reprodutiva em bovinos, podendo ser transmitidas durante a utilização de técnicas de reprodução assistida. Este trabalho visa pesquisar a presença e a ação da Leptospira spp. e da Brucella spp. em fetos e oócitos bovinos. Foram colhidas amostras do sangue de 512 vacas encaminhadas para o abate em um frigorífico do Estado de São Paulo; dessas, 212 foram utilizadas para a pesquisa de Leptospira spp. e Brucella spp. nos fetos, e 300 foram utilizadas para pesquisa desses agentes no líquido folicular e nos oócitos. Amostras de órgãos fetais (rim, fígado, baço e pulmão), conteúdo estomacal fetal, placenta materna e líquido folicular (LF) foram submetidas às técnicas de cultivo em meio próprio para crescimento de Leptospira spp (Fletcher) e Brucella spp. (Brucella-ágar) e à técnica de reação em cadeia da polimerase multiplex (PCRm) para ambos os agentes. Os oócitos provenientes de vacas sorologicamente negativas para leptospirose e brucelose foram maturados em meio contaminado com Leptospira interrogans sorovar Pomona, sendo uma parte em meio sem antibiótico e outra com antibiótico. Os oOOtos provenientes de fêmeas sorologicamente positivas para leptospirose foram maturados em meio de maturação esterilizado, sendo uma parte sem antibiótico e outra com antibiótico, e oOOtos provenientes de vacas sororreagentes para brucelose foram maturados em meio estéril sem antibiótico. Após a maturação, parte dos oócitos foi encaminhada para PCRm, e outra parte fixada em lâmina e corada pelas técnicas de Levaditi e- imunoistoquímica para a pesquisa de Leptospira spp.. Entre as 512 vacas avaliadas, 234 (45,70%) foram reagentes na soroaglutinação microscópica (SAM) e 50 (9,76%) sororreagentes na prova do antígeno acidificado tamponado (AA T), sendo 34 (6,64%)... / Leptospirosis and brucellosis are two of the most important diseases of the reproductive sphere in bovines, being able to be transmitted during the use of assisted reproduction techniques. This work aims to research the presence and the action of Leptospira spp. and Brucella spp. in bovine fetus and oocytes. Blood samples of 512 slaughtered cows, were collected in a slaughterhouse in the State of São Paulo. Of these, 212 were used for the research of Leptospira spp. and Brucella spp. in the fetus, and 300 were used for research of these agents in the follicular liquid and the oocytes. Samples of fetal organs (kidney, liver, spleen and lung), fetal stomach content, maternal placenta and follicular liquid (FL) were submitted to the techniques of cultivation for the growth of Leptospira spp. (Fletcher) and Brucella spp. (Brucella-agar) and the technique of PCRmultiplex for both agents. The oocytes from serological negative cows for leptospirosis and brucellosis were matured in a contaminated media with Leptospira interrogans serovar Pomona, being a part without antibiotic and another one with antibiotic. The oocytes from serologically positive females for leptospirosis were matured in a sterilized environment, being a part without antibiotic and another with antibiotic and oocytes from cows seroreacting, from brucellosis were matured in sterile environmenta without antibiotic. Afier the maturation, part of the oocytes were directed to PCRm and another part settled in the blade and dyed by the Levaditi technique and immunohistochemical for the research of Leptospira spp.. Among the 512 evaluated cows, 234 (45,70%) reacted to the microscopic seroagglutination (MAT) and 50 (9,76%) reacted to the Rose Bengal Plate Test (RBPT), being 34 (6,64%)...(Complete abstract, access undermentioned eletronic address)