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Previous issue date: 2010-02-26 / Aiming to evaluate the effect of adding different cryoprotectants (glycerol, ethylene glycol or acetamide) and antioxidants (resveratrol and quercetin) on in vitro viability of ram thawed semen samples, four adult males, Santa Ines crossbred, were used. After collect semen using an artificial vagina, aliquots of semen were evaluated macroscopic and microscopically and the pool of semen was divided and diluted in Tris-yolk medium, according to experiments and experimental groups. For the Experiment I, which evaluated the cryoprotectants addition, the experimental groups were classified as: G1 = Tris-yolk egg + 5% glycerol, G2 = Tris-yolk egg + 3% ethylene glycol, G3 = Tris-yolk egg + 5% ethylene glycol; G4 = Tris-yolk egg + 2% acetamide, G5 = Tris-yolk egg + 7% acetamide. However, the Experiment II, which were used the antioxidant treatments, was divided in three sub experiments: Exp 1 [resveratrol (0, 5, 10, 15 and 20 μg/mL, respectively, R0, R5, R10, R15 and R20)]; Exp 2 [quercetin (0, 5, 10, 15 and 20 μg/mL, respectively, Q0, Q5, Q10, Q15 and Q20)], and Exp 3 [without antioxidant (RQ0), 10 μg/mL of resveratrol (R10), 5 μg/mL of quercetin (Q5), and 10 μg/mL of resveratrol + 5 μg/mL of quercetin (R10Q5)]. After dilution, aliquots of semen were packed in straws (0.25 mL), frozen (-196 °C) and evaluated after thawing (37 oC/30 seconds) for progressive motility (PM), vigor, plasma membrane integrity (PMi), mitochondrial membrane potential (MMP) and acrosome integrity (ACi). It was found that in Experiment I, G1 showed higher PM (P<0.05) than G3, G4 and G5; vigor was higher (P<0.05) than G4 and G5; and PMi higher (P<0.05) than G2, G3, G4 and G5. However, there was no significant difference (P>0.05) among groups on the MMP and ACi parameters. In Experiment II, there was no difference among groups on the PM, vigor, PMi and ACi. MMP had significant difference (P<0.05) among experimental groups of their three sub experiments. So, in Exp 1, R0 group (36.67±8.01%) was higher than R20 (22.33±6.16%); in Exp 2, Q0 group (36.25±8.12%) was higher (P<0.05) than Q10 (9.33±6.54%), Q15 (6.25±5.98%) and Q20 (5.17±5.08%), and the Q5 (20.58±12.05%) was higher (P<0.05) than Q15 (6.25±5.98%) and Q20(5.17±5.08%) groups; and in Exp 3, RQ0 group (39.00±16.79%) was higher (P<0.05) than Q5 (18.00±13.76%) and R10Q5 (14.42±7.47%) groups. It can be concluded that glycerol (5%) is more effective in protecting ram spermatozoa submitted to deleterious effects of freezing than ethylene glycol (3 and 5%) and acetamide (2 and 7%); the addition of resveratrol and quercetin phenolic antioxidants, alone or in combination, reduces mitochondrial membrane potential of sperm frozen ram; and other studies should be performed to evaluate different concentrations and the effect of the addition on the fertility rate of ewes inseminated artificially. / Objetivando-se avaliar o efeito da adição de diferentes crioprotetores (glicerol, etileno glicol ou acetamida) e antioxidantes (resveratrol – R e quercetina – Q) na viabilidade in vitro de amostras congeladas de sêmen ovino, foram utilizados quatro reprodutores adultos, mestiços da raça Santa Inês. Após colheita com vagina artificial, alíquotas de sêmen foram avaliadas macroscópica e microscopicamente e o pool de sêmen foi subdividido e diluído em Tris-gema, de acordo com os experimentos e grupos experimentais. No Experimento I, no qual foram avaliados os crioprotetores, os grupos experimentais foram classificados como: G1 = Tris-gema + 5% de glicerol; G2 = Tris-gema + 3% de etileno glicol; G3 = Tris-gema + 5% etileno glicol; G4 = Tris-gema + 2% de acetamida; e G5 = Tris-gema + 7% de acetamida. Em contrapartida, o Experimento II, no qual foram utilizados os tratamentos com antioxidantes, foi dividido em três subexperimentos: Exp. 1 [resveratrol (0, 5, 10, 15 e 20 μg/mL, respectivamente, R0, R5, R10, R15 e R20)]; Exp. 2 [quercetina (0, 5, 10, 15 e 20 μg/mL, respectivamente, Q0, Q5, Q10, Q15 e Q20)]; e Exp. 3 [sem antioxidante (RQ0), 10 μg/mL de resveratrol (R10), 5 μg de quercetina/mL (Q5), e 10 μg/mL de resveratrol + 5 μg/mL de quercetina (R10Q5)]. As alíquotas de sêmen, devidamente diluidas, foram então envasadas em palhetas (0,25 mL) e congeladas (-196 oC), sendo avaliadas após descongelação (37 oC/30 segundos) quanto a motilidade progressiva (MP), vigor, integridade de membrana plasmática (iMP), potencial de membrana mitocondrial (PMM) e integridade do acrossoma (iAC). Constatou-se que no Experimento I, o G1 apresentou MP superior (P<0,05) a G3, G4 e G5; vigor superior (P<0,05) a G4 e G5 e iMP superior (P<0,05) a G2, G3, G4 e G5, sem evidenciar diferença significativa (P>0,05) para PMM e iAC. No Experimento II, não se verificou diferença significativa (P>0,05) entre os grupos para os parâmetros MP, vigor, iMP e iAC. O PMM apresentou diferença significativa (P<0,05) entre os grupos experimentais de seus três subexperimentos, de modo que no Exp. 1, o grupo R0 (36,67±8,01%) foi superior ao R20 (22,33±6,16%); no Exp. 2, o grupo Q0 (36,25±8,12%) foi superior (P<0,05) ao Q10 (9,33±6,54%), Q15 (6,25±5,98%) e Q20(5,17±5,08%), assim como o Q5 (20,58±12,05%) foi superior (P<0,05) ao Q15 (6,25±5,98%) e Q20 (5,17±5,08%); e no Exp. 3, o grupo RQ0 (39,00±16,79%) foi superior (P<0,05) ao Q5 (18,00±13,76%) e R10Q5 (14,42±7,47%). Conclui-se que o glicerol (5%) é mais eficaz na proteção dos espermatozoides ovinos submetidos aos efeitos deletérios da congelação do que o etileno glicol (3 e 5%) e a acetamida (2 e 7%), e que a adição dos antioxidantes fenólicos resveratrol e quercetina, isolados ou em associação, reduz o potencial de membrana mitocondrial de espermatozoides ovinos submetidos à congelação, devendo outros estudos serem realizados visando avaliar diferentes concentrações, bem como o efeito da adição na taxa de fertilidade de ovelhas inseminadas artificialmente.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede2:tede2/5599 |
| Date | 26 February 2010 |
| Creators | SILVA, Ellen Cordeiro Bento da |
| Contributors | GUERRA, Maria Madalena Pessoa, PEÑA ALFARO, Carlos Enrique, CARNEIRO, Gustavo Férrer, COLETO, Zoraide Fernandes |
| Publisher | Universidade Federal Rural de Pernambuco, Programa de Pós-Graduação em Ciência Veterinária, UFRPE, Brasil, Departamento de Medicina Veterinária |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRPE, instname:Universidade Federal Rural de Pernambuco, instacron:UFRPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | -3061482854177903105, 600, 600, 600, -3020210563763616780, 453670264235017319 |
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