[pt] A descoberta da importância do óxido nítrico na fisiologia
humana expandiu
a investigação dos mecanismos de interação das espécies
reativas derivadas de
óxidos de nitrogênio com biomoléculas. S-nitrosotióis são
uma fonte conveniente
de óxido nítrico para utilização in vivo. Um dos métodos
largamente utilizados
para S-nitrosilação de compostos contendo o grupo -SH,
incluindo proteínas
contendo o aminoácido cisteína, é a reação com nitrito em
meio ácido. Nesse
trabalho investigaram-se as espécies derivadas da reação
de albumina sérica,
humana e bovina, e de insulina com nitrito, através de
espectrofotometria de
absorção e de fluorescência. Além da modificação dos
resíduos de cisteína,
demonstrou-se que resíduos do aminoácido triptofano também
sofrem
modificação, podendo participar dos processos in vivo. A
partir da comparação
entre os espectros de absorção dos cromóforos formados em
albumina humana e
bovina, bem como em insulina, demonstrou-se que a banda de
absorção no
ultravioleta, descrita na literatura como característica
de S-nitrosilação de cisteína,
é dominada pelos resíduos de triptofano N-nitrosados.
Experimentos de
fluorescência confirmaram a modificação dos resíduos de
triptofano, já que os
espectros apresentaram redução do rendimento quântico e
também deslocamento
do pico característico desses resíduos. Acompanhou-se a
cinética de formação de
novos cromóforos, comparando as albuminas nativas e
bloqueadas no resíduo de
cisteína. Investigou-se a cinética de modificação dos
resíduos de triptofano em pH
fisiológico através de fluorescência. / [en] The discovery of the importance of nitric oxide to the
human physiology
expanded the investigation of mechanisms involved in the
interactions of nitrogen
oxide reactive species with biomolecules. S-nitrosothiols
are a convenient source
of nitric oxide for in vivo applications. Acid treatment
with nitrite of compounds
containing the SH group, including proteins containing
cysteine residues, is a
widely used method to synthesize S-nitrosothiols. In this
work, several species
derived from the nitrite acid treatment of human and serum
albumins as well as
insulin were investigated using optical absorption and
fluorescence. It was
demonstrated that, besides cysteine, tryptophan residues
are modified and can
participate in processes in vivo. Comparing the absorption
spectra from human
and bovine serum albumin with that from insulin, it was
demonstrated that the
ultraviolet absorption band, described in the literature
as coming from Snitrosylation,
was mainly due to N-nitrosation of tryptophan residues.
Fluorescence experiments confirmed the modification of
tryptophan residues,
since the characteristic fluorescence peak exhibited a
reduction and a blue shift.
The kinetics of the new chromophores was followed by
comparison of native and
cysteine-blocked albumins. The kinetics of tryptophan
modifications was
investigated at the physiological pH using fluorescence.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:puc-rio.br/oai:MAXWELL.puc-rio.br:8015 |
| Date | 29 March 2006 |
| Creators | LUIZ DA SILVA GOES FILHO |
| Contributors | SONIA RENAUX WANDERLEY LOURO |
| Publisher | MAXWELL |
| Source Sets | PUC Rio |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | TEXTO |
Page generated in 0.1118 seconds