FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O objetivo do estudo foi identificar e caracterizar as proteÃnas do fluido da rete testis de carneiros Morada Nova. Os testÃculos, obtidos de seis carneiros Morada Nova abatidos, foram imediatamente dissecados. A cabeÃa do epidÃdimo foi separada para ter acesso aos ductos eferentes. O fluido oriundo dos ductos eferentes foi obtido por massagem do testÃculo. Posteriormente, o fluido foi centrifugado para remoÃÃo dos debris celulares e espermatozoides. As proteÃnas foram precipitadas com acetona a -20ÂC e quantificadas pelo mÃtodo de Bradford. Cada amostra (400 μg) foi focalizada em tiras de 13 cm (pH 4-7) e a segunda dimensÃo foi realizada em SDS-PAGE a 15%. Os gÃis obtidos foram escaneados com um ImageScanner II (GE Lifesciences, EUA) e analisados utilizando o aplicativo PDQuest versÃo 8.0.1 (Bio-Rad Laboratories, EUA). Os spots detectados apÃs a anÃlise dos mapas 2-D no PDQuest foram cortados dos gÃis e submetidos a digestÃo com tripsina. As proteÃnas foram identificadas por espectrometria de massa em tandem. A informaÃÃo sobre a proteÃna adquirida pela busca no MASCOT foi analisada atravÃs da utilizaÃÃo do programa para anotaÃÃes de proteÃnas (STRAP). Redes de interaÃÃo proteÃna-proteÃna foram obtidas a partir do banco de dados STRING versÃo 9.0. Nos gÃis foram detectados em mÃdia 227  32,1 spots, onde 51% das proteÃnas se encontraram acima de 40 kDa representando 65% da intensidade de todos os spots detectados nos gÃis. Com base na anÃlise da ontologia gÃnica, os processos biolÃgicos mais comuns associados Ãs proteÃnas do fluido rete testis foram regulaÃÃo (24,28%) e processos celulares (23,27%). LigaÃÃo (27,42%) e a atividade catalÃtica (19,30%) corresponderam Ãs funÃÃes moleculares mais frequentes. As proteÃnas mais intensamente expressas foram: albumina, clusterina, serotransferrina, imunoglobulina gama-1 e alfa-2-HS-glicoproteÃna. A maioria das proteÃnas identificadas desempenha importantes papÃis nos processos de espermatogÃnese, proteÃÃo espermÃtica, motilidade, capacitaÃÃo e reaÃÃo acrossÃmica. O fluido da rete testis possui vÃrias proteÃnas envolvidas na espermatogÃnese, o que representa um importante fator, uma vez que estas molÃculas contribuem para o desenvolvimento das cÃlulas germinativas, participando no transporte e conversÃo de substÃncias requeridas para a produÃÃo dos gametas masculinos. / The aim of the study was to identify and characterize the proteins of the rete testis fluid from Morada Nova rams. The testicles, obtained from six slaughtered Morada Nova rams, were immediately dissected. The head of the epididymis was separated to gain access to the efferent ducts. The fluid from the efferent ducts was obtained by testis massage. Thereafter, the fluid was centrifuged to remove cell debris and sperm. Proteins were precipitated with acetone at -20ÂC and quantified by the Bradford assay. Each sample (400 Âg) was focused in strips of 13 cm (pH 4-7) and the second dimension was conducted on SDS-PAGE 15%. The gels were scanned with an ImageScanner II (GE Lifesciences, USA) and analyzed using the PDQuest version 8.0.1 (Bio-Rad Laboratories, USA). Spots detected after PDQuest analysis of 2-D maps were cut from gels and submitted to trypsin digestion. Proteins were identified using tandem mass spectrometry. Protein information obtained by MASCOT was analyzed using the software tool for searching annotations of proteins (STRAP). Protein-protein interaction networks were obtained from STRING version 9.0 database. In the gels were detected 227  32.1 spots (mean  SD), where 51% of the proteins were found above 40 kDa, corresponding to 65% of the intensity of all spots detected. Based on gene ontology analysis, the most common biological processes associated with proteins from rete testis fluid were regulation (24.28%) and cellular process (23.27%). Binding (27.42%) and catalytic activity (19.30%) corresponded to the most frequent molecular functions for those proteins. The most intensely expressed proteins were: albumin, clusterin, serotransferrin, immunoglobulin gamma-1 chain and alpha-2-HS-glycoprotein. The rete testis fluid has a large quantity of proteins related to the spermatogenesis. This feature is important in view of the fact that these molecules contribute to the development of the germ cells, as a result of the transport and conversion of substances required to the production of male gametes.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:9251 |
| Date | 09 February 2015 |
| Creators | Solange Damasceno Sousa |
| Contributors | Arlindo de Alencar Araripe Moura, MaurÃcio Fraga van Tilburg, Rodrigo Vasconcelos de Oliveira, Paula Rodriguez Villamil |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Zootecnia, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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