As leishmanioses são um conjunto de doenças cuja maioria tem caráter zoonótico e
são causadas por protozoários parasitos do gênero Leishmania, além de ameaçarem cerca de
350 milhões de indivíduos em 98 países. O tratamento é feito à base de antimoniais
pentavalentes desde a década de 40, anfotericina B e pentamidina, porém a toxicidade destes,
a persistência dos efeitos colaterais e a duração do tratamento são as principais dificuldades
na terapia dos pacientes que apresentam tal doença. Neste contexto, a busca de novos
fármacos menos tóxicos e mais eficazes é de extrema importância. Como há relatos na
literatura de que a associação compostos de prata e ligantes diimínicos apresenta atividade
leishmanicida, o presente estudo avaliou a atividade anti-Leishmania in vitro e in vivo de
compostos orgânicos contendo este metal em sua estrutura (JB3, JB4, JB5, JB5SF e
JB6), além dos ligantes 2-tionaimidazolina e fenantrolina e os prováveis mecanismos de ação.
Para tanto, foram feitas análises das atividades leishmanicidas em promastigotas e
amastigotas, no contexto in vitro, para a determinação do IC50, além da citotoxicidade em
macrófagos peritoneais murinos para determinação do CC50. Para avaliar os possíveis
mecanismos de ação destes compostos, foram feitos ensaios de inibição enzimática, utilizando
isoforma r-CPB2.8; eletroforese para avaliar degradação do DNA; microscopia de força
atômica e dosagem de óxido nítrico. Para análise in vivo foi utilizado PCR em tempo
real para quantificar a carga parasitária de hamsters infectados com L. (L.) infantum
chagasi após tratamento experimental. O composto que apresentou melhores resultados sobre
atividade anti-promastigota e anti-amastigota de L. (L.) amazonensis (8,06 μg/mL, 1,30
μg/mL, respectivamente) e L. (L.) infantum chagasi (1,46 μg/mL, 8,21 μg/mL,
respectivamente) foi o JB5, e o que apresentou menor toxicidade foi o 2-tionaimidazolina.
Como alguns compostos apresentaram uma toxicidade considerável, avaliou-se este
parâmetro no ligante fenantrolina e obteve-se CC50 = 30,80 μg/mL, concluindo que este
contribui consideravelmente para a toxicidade dos compostos. Com isso, avaliou-se a
atividade leishmanicida contra as formas do parasito do JB5SF (sem o grupamento
fenantrolina) e obteve-se IC50 de 1,80 e 8,91 μg/mL. Apesar do 2-tionaimidazolina ter sido o
de menor toxicidade não foi tão eficiente para reduzir a carga parasitária das amastigotas
teciduais quanto o Glucantime. Contudo, o composto JB5SF que apresentou o maior índice de
seletividade (40,34) foi capaz de reduzir a carga parasitária das amastigotas teciduais,
apresentando estatística semelhante, no fígado comparado com o fármaco de referência. Os
compostos não apresentaram atividade inibitória significativa frente à cisteíno proteases
(rCPB2.8) e nem degradação do DNA do parasito. Especificamente o JB5SF na concentração
de 5,0 μg/mL não produziu modificações na membrana do protozoário e não alterou
significativamente a área da superfície do macrófago infectado. Todavia, o JB5SF na
concentração de 10,0 μg/mL e associado ao LPS levou o macrófago infectado a uma maior
produção de NO quando comparado ao não tratado. Embora não tenha sido definido o
mecanismo de ação do composto sobre o parasito pode-se inferir que o mesmo pode
contribuir com a resposta imune estimulando as células macrofágicas no processo de
fagocitose. / Leishmaniasis is a group of diseases most of which are zoonotic and are promoted by
protozoan parasites of Leishmania genus, threatening around 350 million individuals in 98
countries. Since 1940s, treatment is based on pentavalent antimonials, amphotericin B and
pentamidines, however the toxicity of these, the persistence of side effects and the duration of
treatment are the main difficulties in the therapy of patients with such disease. In this context,
the research for new, less toxic and more effective drugs is of utmost importance. As reported
on literature, the association of silver compounds and diimine binders has leishmanicidal
activity, the present study evaluated the anti-Leishmania activity in vitro and in vivo of
organic compounds containing this metal in its structure (JB3, JB4, JB5, JB5SF And JB6), in
addition to the 2-thionaimidazoline and phenanthroline binders and these probable activity
mechanisms. With this aim, analyzes of leishmanicidal activities in promastigotes and
amastigotes, in vitro context, were performed for IC50 determination, in addition to
cytotoxicity in murine peritoneal macrophages using MTT methodology to CC50
determination. Evaluating possible mechanisms of these compounds action, enzymatic
inhibition assays were performed using r-CPB2.8 isoform; electrophoresis to evaluate DNA
degradation; atomic force microscopy and nitric oxide dosage to evaluate the interaction of
these with the parasite and/or macrophage. For in vivo analysis, real-time PCR was performed
to quantify the parasite bulk of hamsters infected with L. (L.) infantum chagasi after
experimental treatment. The compound that presented the best results on L. (L.) amazonensis
(8.06 μg/mL, 1.30 μg/mL, respectively) and L. (L.) infantum chagasi (1.46 μg/mL, 8.21
μg/mL, respectively) activity was JB5, and that showed the lowest toxicity was 2-
thionamidazoline. As some compounds presented considerable toxicity, this trait was
evaluated on the phenanthroline binder and CC50 was equal 30.80 μg/mL, concluding that this
contributes considerably to compounds toxicity. Therefore, the leishmanicidal activity against
JB5SF parasite forms (without the phenanthroline group) was evaluated and IC50 ranging
from 1.80 and 8.91 μg/mL. Although 2-thionaimidazoline showed the lowest toxicity, it was
not as efficient to reduce the amastigotes tissue parasitic bulk as Glucantime. However, the
compound JB5SF that had the highest selectivity index (40,34) was able to reduce the
parasitic load of the tissue amastigotes, presenting similar statistics, in the liver compared to
the reference drug. The evaluated compounds showed no significant inhibitory activity
against cysteine proteases (rCPB2.8) and no degradation of parasite DNA. Specifically, 5.0
μg/mL of JB5SF did not produce protozoal membrane modifications and did not alter the
significantly surface area of the infected macrophage. However, 10.0 μg/mL JB5SF
concentration associated with LPS increased NO production in infected macrophage when
compared to untreated. Although the compound action mechanism on the parasite has not
been defined, it is possible inferred that the same could contribute to immune response by
stimulating macrophages in phagocytosis process
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:10.254.254.39:tede/1014 |
| Date | 25 July 2017 |
| Creators | ESPURI, Patrícia Ferreira |
| Contributors | MARQUES, Marcos José, http://lattes.cnpq.br/7146451110689829, ALMEIDA, Letícia de, CALDAS, Ivo Santana |
| Publisher | Universidade Federal de Alfenas, Instituto de Ciências da Natureza, Brasil, UNIFAL-MG, Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UNIFAL, instname:Universidade Federal de Alfenas, instacron:UNIFAL |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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