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Previous issue date: 2011-07-25 / The equine piroplasmosis caused by Theileria equi is considered one of the most
important equine diseases in both tropical and subtropical countries. Theileriosis is
endemic in Brazil and causes significant economic losses for equine breeders.
Disease-free countries restrict horse transit coming from endemic areas due to the
high prevalence of asymptomatic carrier animals. In order to prevent and control this
disease, it is therefore necessary to develop efficient diagnostic methods. Previous
Theileria equi immunological diagnostic studies have been based in outer membrane
antigens. Equi merozoite antigen (EMA) is a major outer membrane antigen of this
protozoan, recognized by antibodies of Theileria equi positive horses. In this study, we
reported the expression, purification and characterization of EMA-2 protein of Theileria
equi in the yeast Pichia pastoris. The EMA-2 gene was cloned into the expression vector
pPICZαB and the expressed protein was secreted to the medium as a soluble form.
The expression and antigenicity of rEMA-2 protein was demonstrated by Dot and
Western Blotting, using anti-histidine and equine Theileriosis clinically positive
antibodies. An indirect ELISA with the rEMA-2 was performed and it was possible to
differentiate with more than a threefold difference between negative and positive
serum from horses confirmed with Theileriosis. The data obtained in this work
suggest that the rEMA-2 protein expressed in P. pastoris is a potential candidate for
use as antigen in immunodiagnostic of T. equi. / A Piroplasmose equina causada por Theileria equi é considerada uma das mais
importantes doenças dos equinos em regiões tropicais e subtropicais. Acomete os
equinos de forma endêmica no Brasil levando a significativas perdas econômicas.
Países livres da doença não permitem a entrada de animais provindos de regiões
endêmicas devido à alta prevalência de animais assintomáticos. Para controle e
prevenção desta enfermidade se faz necessário desenvolvimento de métodos de
diagnóstico eficazes. Os estudos sobre o diagnóstico imunológico para Theileriose
concentram-se em antígenos da membrana externa. O principal antígeno da
membrana externa deste protozoário, Equi Antígeno Merozoite (EMA) é reconhecido
por anticorpos de cavalos positivos para Theileria equi. Neste estudo reportamos a
expressão, purificação e a caracterização da proteína EMA-2 de Theileria equi na
levedura Pichia pastoris. O gene EMA-2 foi clonado no vetor de expressão pPICZαB
sendo a proteína expressa, secretada de forma solúvel ao meio. A expressão e
antigenicidade da proteína rEMA-2 foi demonstrado por Dot e Western Blotting
utilizando-se anti-histidina e anticorpos de equinos clinicamente positivos para
Theileriose. Um ELISA indireto com rEMA-2 foi realizado e foi possível determinar
uma diferença de mais de três vezes entre os soros de equinos confirmados como
positivos e negativos para Theileriose. Com os dados obtidos neste trabalho
podemos sugerir que a proteína rEMA-2 é um potencial candidato para ser utilizado
como antígeno em imunodiagnóstico de T. equi.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpel.edu.br:123456789/1293 |
| Date | 25 July 2011 |
| Creators | Vianna, Ana Muñoz |
| Contributors | CPF:20732660025, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763076J5, Leite, Fabio Pereira Leivas |
| Publisher | Universidade Federal de Pelotas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFPel, BR, Biotecnologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPEL, instname:Universidade Federal de Pelotas, instacron:UFPEL |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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