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Leonardo Vicitini Arruda Desenvolvido de plasmídio para expressão proteíca....pdf: 2125843 bytes, checksum: cf2e5fe050fd36b4ebba0206f40d6e3a (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-06T19:57:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Leonardo Vicitini Arruda Desenvolvido de plasmídio para expressão proteíca....pdf: 2125843 bytes, checksum: cf2e5fe050fd36b4ebba0206f40d6e3a (MD5)
Previous issue date: 2013 / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil. / Protozoários do gênero Leishmania provocam uma ampla gama de doenças, e
passam por um processo de diferenciação entre o inseto vetor e a forma intracelular
no hospedeiro mamífero. Apesar das diferenças entre as formas do ciclo de vida,
não estava descrita ferramenta para expressar proteínas de modo estágio
específico. Neste trabalho apresentamos um plasmídio para Leishmania que
expressa proteína recombinante de forma estágio específica. Testamos uma
possível construção que usava as região 3’ UTR do gene amastina para controlar a
expressão de uma proteína fluorescente e a expressar exclusivamente na fase
amastigota. Também utilizamos a região 3’ UTR de uma tubulina para obter uma
fluorescência homogênea em todos os estágios do ciclo de vida do parasita. Assim
como esperado, obtivemos uma fluorescência exclusiva para a fase amastigota
quando utilizamos a região 3’ UTR da amastina, e uma fluorescência constitutiva
quando a expressão foi regulada pela região 3’ UTR da tubulina. O plasmídio
descrito neste trabalho é versátil, pois a droga de seleção ou a proteína a ser
expressa podem ser substituídas com grande facilidade. Adicionalmente, como o
plasmídio pFL expressou um gene repórter exclusivamente no estágio amastigota
ou constitutivamente, acreditamos que este plasmídio pode também ser utilizado
para expressar proteínas de forma restrita aos estágios promastigota metacíclico e
procíclico. Alguns possíveis usos desta nova ferramenta também são discutidos
nesta tese / The parasitic protozoan Leishmania causes a wide spectrum of diseases and
passes through differentiation between the sand fly and the intracellular form.
Despite distinction between life-cycle forms of the parasite, there is no described tool
to express a protein in a specific stage. Here, we present a plasmid for Leishmania
that can express recombinant proteins in a specific life-cycle stage. We tested one
possible construction that used the 3’ UTR region of the amastin gene to control the
expression of a fluorescent protein exclusively in the amastigote stage. We also
used the 3’ UTR of a tubulin to obtain a homogeneous fluorescence in all stages of
the parasite life cycle. As expected, was observed a fluorescence exclusive to the
amastigote phase with the 3’ UTR amastin construction, and a constitutive
fluorescence when the expression were regulated by the 3’ UTR of a tubulin. The
plasmid described here is versatile since the drug that will be used for selection or
the protein that will be expressed can be easily changed. Moreover, plasmid pFL
have expressed a reporter gene exclusively in the amastigote stage or constitutively,
we believe that this plasmid can also be used to express proteins in metacyclic and
procyclic promastigote stages only. Some possible uses of this new tool are also
discussed.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/7225 |
| Date | January 2013 |
| Creators | Arruda, Leonardo Vicentini |
| Contributors | Coelho, Eduardo Antônio Ferraz, Floeter-Winter, Lucile M, Veras, Patrícia Sampaio Tavares, Oliveira, Geraldo Gileno de Sá, Barral Netto, Manoel, Barral Netto, Manoel |
| Publisher | Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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