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Previous issue date: 2017-04-07 / Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Maranhão (FAPEMA) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPQ) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Platelets, the blood cells involved in maintaining hemostasis, play a key role in the
development of acute ischemic coronary, cerebrovascular events and are critically
involved in the thrombosis process. In response to vascular injury, changes in blood
flow or chemical stimuli, platelets trigger three functional mechanisms: adhesion,
activation and aggregation. After platelet capture, a rapid stabilization of adhesion is
required for thrombus formation to occur. Platelet activation results from
conformational changes dependent of the protein disulfide isomerase (PDI), so that it
has recently been proposed as a molecular target in platelet antiaggregant activity.
The use of plant species rich in phenolic compounds as a source of bioactive
substances is a promising strategy for the development of new therapeutic alternatives
for thromboembolic diseases. Previously, we have shown that Syzygium cumini (L.)
Skeels leaf contains multiple polyphenols, which support its use for antiplatelet
purposes. Therefore, this study sought to evaluate the effects of polyphenol-rich
extract (PESc) from S. cumini leaf on platelet activation and aggregation, as well as on
PDI reductase activity. Platelet-rich plasma from healthy volunteers (n=5) was
incubated with PESc (10-1000 μg/mL), for 25 min, before activation with ADP, thrombin
or PMA. To analyze PESc effect on integrin αIIbβ3 activation, flow citometry protocols
were conducted in washed platelets pre-treated with PESc (10-1000μg/mL) and
activated with thrombin before tagging with PAC–1 antibody. Finally, PESc (0.1-100
μg/mL) effects on PDI reductase activity were assessed in absence or presence of
polyphenolic standards gallic acid, myricetin and quercetin. PESc dose-dependently
inhibited platelet aggregation despite the agonist used, even though lower agonist
concentration potentiated PESc inhibitory effects to a maximal 77% inhibition at 2.5
μM ADP. Similarly, PESc dose-dependently reduced the proportion of activated αIIbβ3
molecules per platelet up to one third of control at 1000 μg/mL. These effects correlated
with the strong inhibitory action of PESc on PDI activity, an effect synergically
augmented in presence of standards. Therefore, our data show that PESc reduces
platelet aggregation and activation, probably through PDI inhibition, strengthening its
prominent antiplatelet activity. / As plaquetas, células sanguíneas envolvidas na manutenção da hemostase, exercem
uma função essencial no desenvolvimento de eventos isquêmicos agudos
coronarianos, cerebrovasculares e estão criticamente envolvidas no processo de
formação da trombose. Em resposta à lesão vascular, às alterações no fluxo
sanguíneo ou a estímulos químicos, as plaquetas desencadeiam três mecanismos
funcionais: adesão, ativação e agregação. Após a captura da plaqueta, uma rápida
estabilização da adesão é necessária para que ocorra a formação do trombo. A
ativação plaquetária resulta de alterações conformacionais dependentes da proteína
dissulfeto isomerase (PDI), de tal modo, que recentemente foi proposto o seu uso
como alvo molecular na atividade antiagregante plaquetária. O uso de espécies
vegetais ricas em compostos fenólicos como fonte de substâncias bioativas
apresenta-se como uma estratégia promissora para o desenvolvimento de novas
alternativas terapêuticas das doenças tromboembólicas. Anteriormente, temos
mostrado que as folhas de Syzygium cumini (L.) Skeels contém múltiplos polifenóis,
que apoiam a sua utilização para fins antiplaquetários. Portanto, este estudo procurou
avaliar os efeitos do extrato rico em polifenóis (ERP) da folha de S. cumini sobre a
ativação e agregação plaquetária, bem como, sobre a atividade redutase da PDI. Para
tanto, plasma rico em plaquetas de voluntários saudáveis foi incubado com ERP (10 -
1000μg/mL), durante 25 min, antes da ativação com ADP, trombina ou PMA. Para
analisar o efeito de ERP sobre a ativação da integrina αIIbβ3, os protocolos de
citometria de fluxo foram conduzidos em plaquetas lavadas pré-tratadas com ERP (10
-1000 μg/mL) e ativadas com trombina antes da marcação com anticorpo PAC-1.
Finalmente, os efeitos de ERP (0,1-100 μg/mL) na atividade redutase da PDI foram
avaliados na ausência ou presença de padrões polifenólicos de ácido gálico, miricetina
e quercetina. ERP inibiu a agregação plaquetária dependente da dose apesar do
agonista utilizado, embora uma menor concentração de agonistas potencializasse os
efeitos inibitórios de ERP até uma inibição máxima de 77% a 2,5 μM de ADP. De modo
semelhante, o ERP reduziu a dose proporcionalmente a proporção de moléculas de
αIIbβ3 ativadas por plaquetas até um terço do controle a 1000μg/mL. Estes efeitos
correlacionaram-se com a forte ação inibitória de ERP na atividade da PDI, um efeito
sinergicamente aumentado na presença de padrões. Portanto, nossos dados mostram
que o ERP reduz a agregação e ativação plaquetária, provavelmente através da
inibição da PDI, fortalecendo sua proeminente atividade antiplaquetária.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede2:tede/1457 |
| Date | 07 April 2017 |
| Creators | Silva, Samira Abdalla da |
| Contributors | Paes, Antonio Marcus de Andrade, Trostchansky, Andrés |
| Publisher | Universidade Federal do Maranhão, PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS DA SAÚDE/CCBS, UFMA, Brasil, DEPARTAMENTO DE MEDICINA I/CCBS |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFMA, instname:Universidade Federal do Maranhão, instacron:UFMA |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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