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Previous issue date: 2017-06-13 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / This study aimed to describe embryo, pronephros and mesonephros development,
gonadal differentiation and to evaluate the thermosensitive period (TSP) in Podocnemis
expansa in the natural environment. To do so, ten nests of P. expansa were randomly
selected on an artificial beach in Balbina, Amazonas, and embryos were collected daily
throughout the incubation period. Macroscopic analyzes were carried out with the aid of
a stereoscope, light microscopy with paraffin and paraplast inclusion, and staining with
Hematoxylin and Eosin, in addition to analyses by transmission and scanning electron
microscopy, and immunohistochemistry for cytochrome P450 aromatase. The
thermosensitive period (TSP) of embryonic development for gender determination was
calculated based on the reaction norm for embryonic growth. The incubation period was
58 to 64 days, with a mean nest incubation temperature of 30.3°C. The main
characteristics used to describe and compare embryonic development were: eye
development, mandibular process, limbs, carapace and plastron. Based on the
descriptions, 26 stages were proposed for P. expansa. Throughout embryonic
development of P. expansa, the pronephros was first visualized on the 5th day of
development, composed of external glomeruli that are devoid of a capsule and protrude
into the coelomic cavity and internally composed of a network of capillaries. The
pronephros was already degenerated at 23 days of development. The first indication of
mesonephros appearance occurred around the 7th day of incubation by the onset of the
renal corpuscle formation. The mesonephros is composed by the renal corpuscles, neck
segment, proximal tubule, distal tubule, intermediate segment, collecting tubule and
collecting duct. From the 20th day, a significant increase in the width and number of
glomeruli of the mesonephros can be observed and a continuous decrease of these
parameters is observed from the 40th day onwards, indicating degeneration. The TSP
ranged between the 24th and the 42nd day of incubation in nest 4, and between the 32nd
and the 51 st day of incubation in nest 1 . Regarding gonadal development, primordial
germ cells (PGCs) were only visualized from the 5th day of incubation when they were
observed in the yolk sac, and it was possible to observe the migration of PGCs from the
vitelline sac toward the ventromedial region of the presumptive mesonephros wall
(genital crest region) between days 5 and 10 of incubation. On the 14th day, the PGCs
were established in the ventromedial region of the mesonephros, initiating formation of
the undifferentiated gonad with two distinct regions being identified; the external
cortical region characterized by the presence of PGCs, and the inner medullary region
where the primitive sexual cords were present. From day 35 of incubation, it was
possible to more clearly identify the organization of the gonad into testis through light
microscopy, while ovary differentiation was observed at 36 days of incubation. Low
aromatase immunoreactivity was observed in the gonads and mesonephros at 33 days.
The marking intensified after the beginning of the TSP and gonadal differentiation. At
45 days, the ovaries presented heavily marked epithelium lining and interstitial tissue,
whereas this positive marking in the testicles was restricted to the interstitial cells
between the seminiferous tubules. The time of appearance and disappearance of the
structures in P. expansa was generally more advanced than in other species of
chelonians during embryonic development in the natural environment. Pronephros
lasted approximately 13 days with functional characteristics, even if for a short period,
while the mesonephros was the embryonic kidney and remained functional even after
hatching. TSP started after the onset of the middle third and ended only in the last third
of development, while the onset of testicular differentiation did not vary significantly in
relation to the ovaries. / Esse trabalho teve como objetivo descrever o desenvolvimento dos caracteres
morfológicos externos do embrião, do pronefro e mesonefro e a diferenciação gonadal
em Podocnemis expansa em ambiente natural, Balbina, Amazonas. Para tal, foram
selecionados aleatoriamente dez ninhos de P. expansa em uma praia artificial em
Balbina, Amazonas, e coletados embriões diariamente durante todo o período de
incubação. Foram realizadas análises macroscópicas com auxílio de estereoscópio e por
microscopia de luz com inclusão em parafina e paraplast e coloração com Hematoxilina
e eosina. Além de análises por microscopia eletrônica de transmissão e de varredura e
imunohistoquímica para citocromo P450 aromatase. O período termosensível (TSP) do
desenvolvimento embrionário para determinação do sexo foi calculado a partir da
norma de reação para o crescimento embrionário. O período de incubação foi de 58 a 64
dias, com temperatura média de incubação do ninho de 30,3ºC. As principais
características utilizadas para descrição e comparação do desenvolvimento embrionário
foram: desenvolvimento dos olhos, processo mandibular, membros, carapaça e plastrão.
A partir das descrições foram propostos 26 estádios para P. expansa. Ao longo do
desenvolvimento embrionário de P. expansa, o pronefro foi visualizado pela primeira
vez no 5º dia do desenvolvimento, sendo composto por glomérulos externos
desprovidos de uma cápsula, protusos para a cavidade celomática e internamente
composta por uma rede de capilares. E aos 23 dias do desenvolvimento o pronefro já
estava degenerado. O primeiro indício do aparecimento do mesonefro ocorre por volta
do 7º dia de incubação pelo início da formação dos corpúsculos renais. O mesonefro foi
composto pelos corpúsculos renais, segmento curto, túbulo proximal, túbulo distal,
segmento intermediário, túbulo coletor e ducto coletor. A partir do 20º dia ocorre um
aumento significativo da largura e do número de glomérulos do mesonefro, e a partir do
40º dia é observada diminuição contínua desses parâmetros, o que indica degeneração.
O TSP variou entre 24° e 42° dia de incubação no ninho 4, a 32º e 51º dia de incubação
no ninho 1. No desenvolvimento gonadal as células germinativas primordiais (CGPs) só
foram visualizadas a partir do 5º dia de incubação, no momento em que elas se
encontravam no saco vitelino e entre os dias 5 e 10 de incubação foi possível observar a
migração das CGPs a partir do saco vitelínico em direção a região ventromedial da
parede do mesonefro presuntivo (região da crista genital). No 14º dia CGPs se
estabeleceram na região ventromedial do mesonefro dando início a formação da gônada
indiferenciada, sendo identificada duas regiões distintas, a região cortical externa
caracterizada pela presença de CGPs, e a região medular interna onde os cordões
sexuais primitivos foram presentes. A partir do dia 35 de incubação foi possível
identificar mais claramente, através da microscopia de luz, a organização da gônada em
testículo, enquanto a diferenciação em ovário foi observada com 36 dias de incubação.
Até os 33º dia foi observada baixa imunoreatividade a aromatase nas gônadas e
mesonefro. A marcação se intensificou, após a metade do início do período
termosensível e após a diferenciação gonadal. Aos 45 dias, o ovário apresentou epitélio
de revestimento e tecido intersticial fortemente marcado, enquanto nos testículos essa
marcação positiva foi restrita as células intersticiais entre os túbulos seminíferos. Ao
longo desenvolvimento embrionário em ambiente natural o tempo de aparecimento e
desaparecimento das estruturas em P. expansa foi geralmente mais avançado do que em
outras espécies de quelônios. O pronefro durou aproximadamente 13 dias e apresentou
características funcionais, mesmo que por um curto período. Enquanto que o mesonefro
foi o rim embrionário e permaneceu funcional mesmo após a eclosão. O TSP começou
após o início no terço médio e só terminou no último terço do desenvolvimento, e o
início da diferenciação do testículo não variou significativamente em relação ao ovário.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:localhost:tede/2324 |
| Date | 13 June 2017 |
| Creators | Magalhães, Marcela dos Santos |
| Contributors | Vogt, Richard C., Moura , Carlos Eduardo B. de, Sebben, Antônio |
| Publisher | Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia, Biologia de Água Doce e Pesca Interior, INPA, Brasil, Coordenação de Pós Graduação (COPG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações do INPA, instname:Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia, instacron:INPA |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 6221427379504236215, 600, 600, 600, 3806999977129213183, -2555911436985713659 |
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