A própolis vermelha brasileira tem atraído interesses científicos e econômicos devido às suas variadas atividades biológicas. Este produto natural possui composição química diferente de acordo com a região na qual é encontrado, sendo necessária uma completa caracterização química para cada tipo de própolis, a fim de se elucidar os compostos presentes e possivelmente responsáveis por estas atividades. Dentre as atividades biológicas mais investigadas, destacam-se as atividades antioxidante e antitumoral. Neste
trabalho, buscou-se caracterizar quimicamente o extrato hidroalcoólico da própolis vermelha brasileira, avaliar as atividades antioxidantes e antitumorais, além de investigar o padrão proteico de células tumorais de laringe tratadas e não tratadas com extratos da própolis vermelha através da análise proteômica comparativa. A caracterização química realizada através de espectrometria de massas com ionização por electrospray mostrou que a própolis apresenta moléculas complexas, principalmente isoflavonoides, compostos com importantes atividades biológicas. Os extratos hidroalcoólicos obtidos a partir da própolis vermelha revelaram um significante conteúdo de polifenóis associados a uma habilidade de sequestrar radicais livres DPPH·. Os extratos também apresentaram atividades superóxido-dismutase-/ike e catalase-/ike, indicando que podem exercer um papel fundamental na manutenção fisiológica do equilíbrio redox quando em um organismo. A atividade citotóxica dos extratos da própolis foi avaliada nas linhagens tumorais Hep-2, HeLa e não tumoral Hek-293, sendo que os valores de IC50 foram menores para a linhagens tumorais em relação a não tumoral. Desta forma, sugere-se uma seletividade da própolis vermelha quanto às linhagens tumorais. A análise proteômica, usando eletroforese bidimensional associada à cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrômetro de massa, permitiu a comparação dos mapas proteicos da linhagem Hep-2, na ausência ou presença de extratos da própolis vermelha, nas concentrações 6 f.1g/mL (não citotóxica) e 120 f.lg/mL (IC50). A excisão manual de 325 spots foi efetuada nos géis 2D- SDS-PAGE, em que 177 proteínas foram identificadas. Estas proteínas foram relacionadas com diversos processos metabólicos e estruturais como produção e conversão de energia, transporte e metabolismo de carboidratos, modificação pós-traducional, reciclagem de proteínas e chaperonas, proteínas do citoesqueleto, proteínas de reparo, entre outros. Das proteínas identificadas com expressão diferencial, cinco apresentaram expressão reduzida na presença do extrato da própolis, este em sua maior concentração (120 f.lg/mL). Apenas duas proteínas identificadas neste estudo mostraram expressão aumentada na concentração não citotóxica (6 f.lg/mL) do extrato da própolis vermelha. Os resultados da proteômica comparativa mostram que a própolis interfere em um conjunto de eventos intracelulares e, assim, passa a ser uma candidata promissora para inibir o crescimento celular e contribuir para os diferentes passos relacionados com o processo de carcinogênese. Embora os mecanismos moleculares pelos quais a própolis vermelha interaja com o metabolismo das células permaneçam ainda desconhecidos, estudos adicionais servirão para melhor elucidar as atividades antioxidantes e antitumorais aqui observadas. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Brazilian red propolis has attracted scientific and economic interests because of its varied biological activities. This natural product has different chemical compositions according to the region in which it is found, requiring a robust chemical characterization to elucidate the compounds responsible for the activities in each type of propolis investigated. So far antioxidant and antitumor properties are amongst the most studied biological activities. This study aimed to characterize chemically the hydroalcoholic extract of Brazilian propolis from the state of Sergipe, evaluate the antitumor and antioxidant activities, and to investigate the pattern o f proteins in tumor cells o f the larynx treated o r not with extracts of propolis through comparative proteomic analysis. The chemical characterization by mass spectrometry with electrospray ionization showed that propolis presents complex molecules, especially isoflavones, which has important biological and antioxidant capacity. The hydroalcoholic extracts obtained from propolis revealed a significant content of polyphenols associated with the ability to scavenge DPPH. radicais. The extracts also showed significant activities for superoxide dismutase-like and catalase-like, indicating an important role in maintaining physiological redox equilibrium, decreasing oxidative stress.
Cytotoxic activity was assessed for tumor cell !ines Hep-2, HeLa and non-tumor cell line Hek-293, showing IC50 values greater for Hek-293 compared to Hep-2 and HeLa cells, which suggests a selectivity of propolis for the tumor !ines. The proteomic analysis using two-dimensional electrophoresis associated with high performance liquid chromatography coupled with mass spectrometer allowed the comparison of the protein maps of Hep-2 cell line in the absence or presence of propolis extracts in concentrations of 6 f.lg/mL (not cytotoxic) and 120 f.lg/mL (IC50). 325 spots were manually excised from the gels 2D SDS-PAGE and 177 proteins were identified. These proteins have been linked to various structural and metabolic processes, such as production and energy conversion, transport and carbohydrate metabolism, post-translational modification, protein tumover and chaperones, cytoskeletal proteins, repair proteins, among others. From the identified proteins that showed differential expression five were downregulated in the presence of propolis extract in the highest concentration (120 J.lg/mL). Only . two proteins identified in this study showed increased expression in the no cytotoxic concentration (6 J.tg/mL) ofthe red propolis extract. The results of comparative proteomic showed that the propolis interacts with a series of intracellular events and hence becomes a promising candidate to inhibit cellular growth and contribute to the different steps related to the process of carcinogenesis. Although the molecular mechanisms by which propolis interacts with the metabolism of the cells remain unknown, additional studies will better elucidate the antitumor and antioxidant activities here observed.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ucs.br:11338/658 |
| Date | 07 December 2012 |
| Creators | Frozza, Caroline Olivieri da Silva |
| Contributors | Ely, Mariana Roesch, Henriques, João Antonio Pêgas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UCS, instname:Universidade de Caxias do Sul, instacron:UCS |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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