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Previous issue date: 2008-10-31 / Os membros da fam?lia de fatores de transcri??o Ets cont?m um dom?nio de liga??o ao DNA, chamado dom?nio Ets, que reconhece uma seq??ncia rica em purinas, cujo consenso central ? formado pela seq??ncia 5 -GGAA/T-3 . O dom?nio Ets pode ser produzido como um fragmento de prote?na que se enovela independentemente, numa estrutura est?vel, sendo suficiente para que ocorra liga??o ao DNA. A prote?na Spi-C pertence ? subfam?lia Spi e se caracteriza por ser expressa durante diferentes est?gios do desenvolvimento de c?lulas B e em macr?fagos. Existem alguns trabalhos publicados que descrevem o reconhecimento por Spi-C de algumas seq??ncias de DNA, previamente estudadas para a prote?na PU.1, membro da mesma subfam?lia. A express?o de Spi-C sobrep?em-se com a de PU.1 ao longo do desenvolvimento das c?lulas B. Existem promotores de genes envolvidos no desenvolvimento de c?lulas B que cont?m s?tios para a liga??o de prote?nas Ets. Estudos quanto ? liga??o da Spi-C nos mesmos podem contribuir para acrescentar dados sobre a fun??o desse fator de transcri??o e sobre a regula??o da transcri??o desses genes. Neste trabalho, apresentamos a constru??o do gene, a express?o heter?loga do dom?nio Ets da prote?na Spi-C humana em Escherichia coli e a sua purifica??o por FPLC com rendimento de aproximadamente 0,7mg de prote?na por grama de c?lula. Com o objetivo de investigar novas seq??ncias promotoras alvo para Spi-C, foram realizados estudos de liga??o a seq??ncias de DNA localizadas nos promotores dos genes que codificam para a subunidade do receptor de IL-7 e para a prote?na transmembrana integrante do complexo receptor de c?lulas B, Igα. Estas prote?nas participam do desenvolvimento de c?lulas B e s?o essenciais para a sele??o das mesmas na medula ?ssea. Nossos resultados demonstram que o dom?nio Ets de Spi-C reconhece e se liga a essas seq??ncias de DNA (migra??o em gel) formando complexos de diferentes tamanhos. O dom?nio Ets foi capaz de se ligar a seq??ncias de DNA in vitro numa propor??o maior do que 1:1 sendo que, quanto maior a concentra??o do dom?nio maior foi o retardo do DNA no gel. Surpreendentemente, o dom?nio Ets n?o foi capaz de discriminar as seq??ncias selvagens, daquelas com muta??es no consenso central de liga??o, mantendo o mesmo perfil de retardo das bandas, sugerindo que o restante da prote?na ? importante para esse reconhecimento
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede2.pucrs.br:tede/5327 |
| Date | 31 October 2008 |
| Creators | Gianniotis, Ekaterini |
| Contributors | Bogo, Maur?cio Reis |
| Publisher | Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul, Programa de P?s-Gradua??o em Biologia Celular e Molecular, PUCRS, BR, Faculdade de Bioci?ncias |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da PUC_RS, instname:Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, instacron:PUC_RS |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 8198246930096637360, 600, 600, 36528317262667714 |
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