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Previous issue date: 2005 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Lectinas são proteínas que se ligam especificamente aos carboidratos sobre a
superfície celular. Eugenia uniflora L. é uma planta Myrtaceae nativa do sul da América,
Sudeste da Ásia e África. Triticum vulgaris é uma aglutinina (36 kDa) constituída por duas
subunidades. Proteínas antimicrobianas têm sido isoladas de uma variedade de espécies de
plantas. O objetivo deste estudo foi purificar uma lectina de sementes de Eugenia uniflora e
avaliar o comportamento interfacial da lectina EuniLS através de medidas da pressão de
superfície P e potencial de superfície DV em diferentes valores de pH do volume, detectar
atividade e caracterizar a lectina de sementes de E. uniflora, EuniLS, bem como avaliar o
efeito da lectina sobre as bactérias Gram-negativas e Gram-positivas. EuniLS foi purificada
de um extrato de sementes (E) em tampão fosfato de sódio (pH 7,0) em cromatografia de
DEAE-Sephadex. EuniLS (67 kDa) permaneceu estável na faixa de pH 2 a 9 e mostrou
especificidade para açúcares complexos, assim como oligossacarídeos. Além do mais,
EuniLS tem uma atividade hemaglutinante específica de 85,3. As isotermas de pressão de
superfície (P) × área molecular (A) evidenciaram que o comportamento interfacial foi
fortemente dependente do pH do volume. EuniLS apresentou uma alta atividade superficial
(Pc=40 mN/m e DV=440 mV) que a lectina WGA (Pc=34 mN/m e DV =340 mV) no pH
2. O momento dipolar de EuniLS (μ^) aumentou em 1,3 vezes com o incremento de pH de
2 a 9, enquanto que WGA o (μ^) aumentou 3,8 vezes para a mesma variação de pH. Ambas
as lectinas apresentaram uma contribuição negativa da dupla camada elétrica Y0=-68 mV a
-64 mV para EuniLS e Y0=-117 mV -144 mV para WGA. Uma relação linear para Y0 e
pH (faixa de 2 6) foi observada para EuniLS. Um ponto de quebra foi detectado em pH
6,0 e um platô foi observado até o pH 7,0, que corresponde ao ponto isoelétrico da EuniLS.
Um comportamento similar foi observado para valores de z −7,5 a −30 mV. As variações
ocorridas em DV ocorreram devido a contribuição da orientação da molécula de lectina na
superfície (μ^), e a dupla camada elétrica (Y0). A eluição da proteína adsorvida foi
realizada com TFS (pH 2,0) e sua atividade foi avaliada através de eritrócitos (coelho e
humano), carboidratos e estabilidade em diferentes valores de pH (3,5-9,0). Uma
eletroforese de EuniLS foi realizada através de gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) para
definir o peso molecular. A atividade antimicrobiana do extrato e EuniLS foram
investigados utilizando o teste de disco. O meio de cultura (100mL, 43º C) e 0,5 mL de
inoculo foram adicionados e a solução foi distribuída em placas de Petri estéril em porções
de 10 mL. Discos de 6 mm de diâmetro foram impregnados com 15 μL de solução de
lectina estéril e E em TFS (pH 7,0). A atividade de EuniLS foi parcialmente inibida pelas
glicoproteínas (caseína e soro de coelho) e aglutinada por eritrócitos de coelho e humano
(tipos A, B, AB e O). Eletroforeses das preparações de E. uniflora mostraram uma lectina
de peso molecular de 67 kDa. A atividade de EuniLS foi aumentada no pH 6,5. EuniLS
inibiu a maioria dos microrganismos testados: Klebsiella sp. (halo de 19,6 mm ± 2,5),
Pseudomonas aeruginosa (halo de 18,6 mm ± 0,6), Staphylococcus aureus (20,0 mm ± 0,5)
e Corinebacterium sp. (8,0 mm ± 0,1), com mínima concentração inibitória (MIC) de 1,5 e
mínima concentração bactericida (MBC) de 16,5 μg/mL. Extrato de sementes não mostrou
atividade antibacteriana contra os microrganismos testados. Estes resultados indicam uma
purificação de uma nova lectina e sua atividade antibacteriana; EuniLS pode ser utilizada
como um adjuvante em terapia antibacteriana
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/1971 |
| Date | January 2005 |
| Creators | Danielly Lima de Oliveira, Maria |
| Contributors | Tereza dos Santos Correia, Maria |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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