Com objetivo de elucidar se CspD em Caulobacter crescentus possui a mesma função que em E. coli de inibir a replicação do DNA, foi avaliado o efeito da superexpressão de CspD em C. crescentus, e constatamos que, diferentemente do observado em E. coli, não houve efeito deletério ao crescimento. Quando superexpressa em E. coli, CspD de C. crescentus não demonstrou efeito no crescimento da bactéria. Além disso, através da eletroforese bidimensional do mutante deletado de cspD, foi investigado se a proteína afeta o padrão de expressão de outras proteínas. Além da protease ClpP, enzimas envolvidas no metabolismo de purinas e aminoácidos estão entre as que demonstraram expressão diferencial na ausência do gene cspD. Os dados obtidos na eletroforese bidimensional foram validados por meio de qRT-PCR. Um ensaio da ligação de CspD com ácidos nucléicos foi realizado mas, não se observou ligação entre a proteína e o DNA ou RNA. Finalmente, foi possível concluir, por meio de ensaios de western blotting, que CspD sofre regulação pós traducional pela protease Lon. / In order to elucidate if CspD in Caulobacter crescentus has the same role as in E. coli, we analyzed the effect of overexpressing CspD in bacterial growth and concluded that opposite from what its observed in Escherichia coli, it didnt affect growth. Yet, when over expressed in E. coli, CspD did not show any effect on the bacterial growth. Through two-dimensional gel electrophoresis of the cspD null mutant, it was possible to investigate if the protein is affecting the expression pattern of the cell. Along with ClpP protease, enzymes that are involved in the purine and amino acid metabolism are among those that showed differential expression in the absence of cspD. The data obtained from the two-dimensional gel electrophoresis were validated through qRT-PCR. The binding of CspD to nucleic acids was investigated. However, no binding of the protein to the nucleic acids was observed. Finally through western blotting assays, it was possible to conclude that CspD is post- translationally regulated by the Lon protease.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-22022018-110455 |
| Date | 29 August 2017 |
| Creators | Barros, Julia Albano de |
| Contributors | Marques, Marilis do Valle |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | Dissertação de Mestrado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Reter o conteúdo por motivos de patente, publicação e/ou direitos autoriais. |
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