O gene AGT1 do locus mal1g, do sistema de transporte de maltose de S. cerevisiae, codifica uma proteína de 67 kDa, que tem 75% de similaridade e 58% de identidade com o transportador de maltose do locus MAL1. Sua expressão é ativada por genes reguladores constitutivos do sistema MAL, e é reprimida pela glicose. A cepa AP68-7A carrega o gene AGT1, e possivelmente o gene transportador MAL31, e transporta trealose ao final da primeira fase de crescimento anaeróbico. SDS-PAGE comparando proteínas de membranas de células reprimidas pela glicose (taxa de transporte <0,5 U/mg), com aquelas de células induzidas por α-metilglicosídeo (taxa de transporte de ~35 U/mg), verificou-se 2 bandas (PMs 57 e 66 kDa) exclusivas em membranas de células induzidas. As 2 bandas foram isoladas por três métodos diferentes (cromatografia de troca iônica, lavagens da membrana com tampão de alta força iônica e cromatografia de afinidade) e testadas para ligação de 14C-trealose. A ligação foi enriquecida ~3 X após a cromatografia de troca iônica. O transporte de trealose na cepa AP77-4C (que não tem nenhum dos genes transportadores dos loci MAL) foi recuperado após sua transformação com plasmídeo YEp366-AGT1. De membranas plasmáticas destas células (transporte de trealose ~25 U/mg) foram isoladas por cromatografia de afinidade, 2 bandas cujos PMs em SDS-PAGE são idênticos aos das proteínas isoladas das membranas da cepa AP68-7A. Estes resultados permitem concluir que o transportador de trealose de leveduras é codificado pelo gene AGT1. / The AGT1 gene presente in the mal1g locus from S. cerevisiae maltose transport system encodes a 67 kDa protein which shares 75% similarity and 58% identity with the maltose transporter protein encoded in MAL6 locus. The expression of this gene is regulatory genes from MAL system and is repressed by glucose. The strain AP68-7A which harbors the AGT1 gene and probably the MAL31 transporter gene, expresses trehalose transport activity at the end of first anaerobic growth. The comparison from the SDS-PAGE of membrane proteins from glucose repressed cells (trehalose transport activity of <0.5 U/mg), and α-methylglucoside induced cells (trehalose transport activity of ~35 U/mg), revealed 2 bands (Mr 57 and 66 kDa) present only in the induced cells membranes. Those bands were isolated by 3 different methods (ionic exchange chromatography, high strength ionic washes and affinity chromatography, and tested for 14C-trehalose binding. Both bands bind trehalose and this activity was enriched about 3 times after the ionic exchange chromatography. The trehalose transport activity was recovered by strain AP77-4C, (which does not harbor any MAL transporter gene) after its transformation with a plasmid containing the AGT1 gene. From the membranes of these cells (trehalose transport activity of ~25 U/mg) 2 bands were isolated by affinity chromatography with similar Mrs to those isolated from AP68-7A strain. The results permit to conclude that the AGT1 gene encodes the yeast trehalose transporter.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-02102014-124552 |
| Date | 12 April 1999 |
| Creators | Silva, Cleonice da |
| Contributors | De Araujo, Pedro Soares |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | Dissertação de Mestrado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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