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3-hidróxi-quinurenina transaminase de Aedes aegypti: clonagem, expressão, avaliação funcional e síntese de prováveis inibidores seletivos

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Dissertação Larissa Gonçalves Maciel dQF UFPE.pdf: 3957238 bytes, checksum: 1d2fc6e52d8c1c39483b14245030f062 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-30T19:47:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2
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Previous issue date: 2016-04-11 / CNPQ / A busca por novos métodos de controle do vetor Aedes aegypti tem sido amplamente
realizada para diminuir a transmissão de arboviroses como Zika e Chikungunya que têm um
grande impacto em saúde pública atualmente. Macromoléculas envolvidas em vias
metabólicas essenciais para a sobrevida do mosquito tornam-se alvos moleculares importantes
para o controle desses vetores. Uma das vias de detoxificação desta espécie é a via das
quinureninas, que em uma das etapas, converte 3-hidroxiquinurenina (3-HK - espécie reativa
de oxigênio e nitrogênio) em ácido xanturênico (substância atóxica) por meio da 3hidroxiquinurenina
transaminase (HKT). A proposta deste trabalho é desenvolver larvicidas
que atuam como inibidores da atividade enzimática da HKT, causando morte do inseto. Os
inibidores sintetizados foram planejados após resultados de Docking Molecular obtidos por
nosso grupo com a HKT ortóloga de Anopheles gambiae. Esses compostos são inéditos e
foram bem caracterizados, exibindo alto grau de pureza. A síntese foi realizada em três etapas
e com rápida purificação, fatores facilitadores para a produção em larga escala. A proteína
HKT recombinante fusionada à Glutationa-S-transferase (HKT/GST) foi produzida em
Escherichia coli para avaliação da inibição dos compostos sintetizados. A HKT/GST
purificada e dialisada apresentou um padrão de migração de aproximadamente 62 kDa e
exibiu atividade em avaliação funcional através de ensaio enzimático desenvolvido para
análise em HPLC com detector UV. Os 12 compostos testados mostraram inibição parcial da
HKT/GST, sendo os compostos com o anel aromático com substituição para-anisoíla e sem
substituição os melhores inibidores, com valores de razão da área do pico de 3-HK na reação
sem inibidor e após a inibição que são 0,69 e 0,64 respectivamente. Isso significa em relação à
razão das áreas do pico do 3-HK, quanto mais próxima de zero, mais diferentes são as áreas e
consequentemente maior o acúmulo do substrato. Esses resultados corroboram com a hipótese
de que os sais sintetizados são inibidores da HKT e servirão como molde para o
desenvolvimento de inibidores mais potentes. / The search for new methods of control of Aedes aegypti has been widely performed to reduce
the transmission of arboviruses as Zika and Chikungunya that have a major impact on public
health today. Macromolecules involved in essential metabolic pathways for the mosquito
survival become important molecular targets for the control of these vectors. One of the
detoxification pathways of this species is the kynurenine pathway that in one of the steps,
converts 3-hydroxykynurenine (3-HK - reactive oxygen and nitrogen species) in xanturenic
acid (non-toxic substance) by 3-hydroxykynurenine transaminase (HKT). The purpose of this
work is to develop larvicides that act as inhibitors of the enzymatic activity of HKT, causing
insect death. The synthesized inhibitors were planned after results of Molecular Docking
obtained by our group with HKT ortholog of Anopheles gambiae. These compounds are
unpublished and were well characterized, exhibiting high purity. The synthesis was carried
out in three stages and rapid purification, facilitating factors for large-scale production.
Recombinant HKT protein fused to the Glutathione S-transferase (HKT/GST) was produced
in Escherichia coli for evaluation of inhibition of the synthesized compounds. The HKT/GST
purified and dialyzed showed a pattern of migration of approximately 62 kDa and exhibited
activity in functional assessment by enzymatic assay developed for analysis on HPLC with
UV detector. The 12 tested compounds showed partial inhibition of HKT/GST, which
compounds with the aromatic ring substitution para-anisole and without substituent the best
inhibitors with ratio values of the peak area of 3-HK in no inhibitor reaction and after
inhibition which are 0.69 and 0.64, respectively. This means in relation to the peak area ratio
of 3-HK, the nearer to zero, the different between the areas are higher and therefore there is
more accumulation of the substrate. These results corroborate the hypothesis that the salts
synthesized are HKT inhibitors and serve as a template for the development of more potent
inhibitors.

Identiferoai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/23437
Date11 April 2016
CreatorsMACIEL, Larissa Gonçalves
Contributorshttp://lattes.cnpq.br/6789933923497416, ANJOS, Janaína Versiani dos
PublisherUniversidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Quimica, UFPE, Brasil
Source SetsIBICT Brazilian ETDs
LanguageBreton
Detected LanguagePortuguese
Typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis
Sourcereponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE
RightsAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess

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