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Previous issue date: 2014-10-02 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - FAPESP / Introduction: Antifolate chemotherapies such as methotrexate (MTX) and 5-fluorouracil (5-FU) act inhibiting enzymes involved in folate pathway. These enzymes are important to DNA synthesis and cell growth. Chemotherapy dose may alter these levels of expression of these genes encoding enzymes involved in folate pathway and to influence in the response to treatment. Objectives: To evaluate relationship between mRNA and protein expression levels expression of MTHFR, DHFR, TYMS and SLC19A1 folate metabolic genes in laryngeal and oral cancer cell lines treated with MTX and 5-FU antifolate chemotherapies, separately. Materials and methods: HEP-2 (laryngeal cancer) and HN13 (oral cancer) cell lines were treated with 0.25, 25.0, and 75 μM of MTX and 10 ng/ml, 50 ng/ml, and 100 ng/ml of 5-FU, separately, for 24 hours/37°C. Flow Cytometry, Real-time PCR and Western blotting techniques were performed to analyzing the level of apoptosis, quantification of mRNA and quantification of proteins of genes, respectively. ANOVA and Bonferroni's post hoc tests were utilized for statistical analysis. P<0.05 was considered significant. Results: The higher concentration of MTX chemotherapeutic was associated with increased expression of MTHFR, DHFR, TYMS and SLC19A1 genes in laryngeal cancer cell line (p <0.05) and increased expression of DHFR and SLC19A1 genes in oral cancer cell line (p <0.05). The lower dose was associated with decreased expression of SLC19A1 gene laryngeal cancer (p <0.05). The higher concentration of 5-FU chemotherapy was associated with increased expression of DHFR gene in laryngeal cancer cell line (p <0.05) and increased expression of DHFR and TYMS genes in oral cancer cell line (p <0.05). The lower dose of 5-FU was associated with decreased expression of SLC19A1 gene. Conclusion: Exposure to low and high-dose of chemotherapeutics in oral cancer cell line can modulate the level of expression of genes involved in folate metabolism in laryngeal and oral cancer cell line. / Introdução: Quimioterápicos antifolato, tais como Methotrexato (MTX) e 5-Fluorouracil (5-FU) agem inibindo enzimas envolvidas na via do folato. Essas enzimas são essenciais para a síntese de DNA e divisão celular. A dose destes quimioterápicos podem alterar níveis de expressão de genes que codificam essas enzimas envolvidas na via do folato e influenciar na resposta ao tratamento. Objetivos: Avaliar a relação entre a expressão do RNAm e de proteínas dos genes MTHFR, DHFR, TYMS and SLC19A1 envolvidos no metabolismo do folato em linhagens celulares de câncer oral e câncer de laringe administradas com os quimioterápicos antifolato MTX e 5-FU em diferentes concentrações e em monoterapia. Materiais e métodos: Duas linhagens celulares HEP-2 (câncer da laringe) e HN13 (câncer de cavidade oral) foram tratadas com 0,25, 25,0 e 75 mM de MTX e 10 ng / ml, 50 ng / ml e 100 ng / ml de 5 -FU, separadamente, durante 24 horas a 37 °C. Técnicas de Citometria de Fluxo, PCR em tempo real e Western blotting foram realizadas para análise do nível de apoptose, quantificação do RNAm e quantificação das proteínas dos genes, respectivamente. Para análise estatística foi utilizado o teste ANOVA com correção de Bonferroni. P <0,05 foi considerado significante. Resultados: O aumento da concentração do quimioterápico MTX foi associado com expressão aumentada dos genes MTHFR, DHFR, TYMS e SLC19A1 na linhagem de câncer de laringe (p<0,05) e expressão aumentada dos genes DHFR e SLC19A1 na linhagem de câncer oral (p<0,05). A dose mais baixa de MTX foi associada com expressão diminuída do gene SLC19A1 em câncer de laringe (p<0,05). O aumento da concentração do quimioterápico 5-FU foi associado com expressão aumentada do gene DHFR na linhagem de câncer de laringe (p<0,05) e expressão aumentada dos genes TYMS e DHFR na linhagem de câncer oral (p<0,05). A dose mais baixa de 5-FU foi associada com expressão diminuída do gene SLC19A1. Conclusão: Exposição à alta ou baixa dose dos quimioterápicos MTX e 5-FU, em monoterapia, pode modular o nível de expressão de genes envolvidos no metabolismo do folato.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:localhost:tede/302 |
| Date | 02 October 2014 |
| Creators | Galbiatti-Dias, Ana Lívia Silva |
| Contributors | Goloni-Bertollo, Eny Maria, Pavarino, Érika Cristina, Silva, Eloiza Helena Tajara da, Cintra, Mariangela Torreglosa Ruiz, Carvalho, André Lopes, Silva Junior, Wilson Araújo da |
| Publisher | Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, FAMERP, Brasil, Faculdade 1::Departamento 1 |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da FAMERP, instname:Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto, instacron:FAMERP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 1102159680310750095, 500, 500, 600, 600, 306626487509624506, 8765449414823306929, -6491868300948288337 |
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