Suite au projet de séquençage du génome d’Arabidopsis thaliana, plus de 400
récepteurs de types serine/thréonine kinases (Protein Receptor Kinase ou PRK) ont été
prédits. Par contre, seulement sept paires de récepteurs/ligands ont été caractérisées jusqu’à
présent par des techniques de biochimie et d’analyse, de mutants. Parmi ceux-ci figurent les
PRK : BRI1, CLV1, SRK, SR160, Haesa-IDA et PEPR1 qui jouent un rôle important dans
le développement, l’auto-incompatibilité sporophytique et les mécanismes de défense. Le
but de mon projet de maîtrise était de développer un bioessai à haut débit qui permettra la
découverte de ligands peptidiques. Le bioessai utilisera des PRK chimériques composés du
domaine extracellulaire (l’ectodomaine) de la PRK à l’étude fusionnée au domaine
intracellulaire d’une PRK qui agira comme rapporteur. Deux stratégies sont présentement
développées dans notre laboratoire : la première consiste à fusionner la PRK à l’étude avec
le domaine intracellulaire (l’endodomaine) du récepteur tyrosine kinase animal EGFR
(Epidermal Growth Factor Receptor). Suite à l’interaction avec une fraction protéique
contenant un ligand correspondant à la PRK étudiée, une transphosphorylation de
l’endodomaine (le domaine kinase) serait détectable. La seconde stratégie utilise
l’endodomaine du récepteur BRI1, un récepteur répondant aux brassinostéroïdes. Suite à
l’interaction avec une fraction protéique contenant un ligand correspondant à la PRK
étudiée, cette fois-ci nous devrions être en mesure de mesurer l’activation d’un gène
rapporteur répondant normalement à une activation par les brassinostéroïdes. / The complete sequence of the genome of Arabidopsis thaliana was achieved in year
2000 and has resulted in the prediction of more than 400 receptor serine/threonine kinase or
Plant Receptor Kinase (PRK). Despite this tremendous work, only seven pairs of
ligand/receptor have been characterized through conventional techniques such as mutant
analysis and biochemical characterization. These receptors have been found to play an
important role in plant defense (SP160), development (BRI1, CLV1) and sporophytic autoincompatibility
(SRK). The aim of the project was to develop a high throughput bioassay in
order to find new ligands for known receptors. In order to do so, the bioassay will use
chimeric protein technology, by fusing the ectodomain of a receptor to a known
endodomaine. The latter will play the role of a reporter. Two strategies were developed in
our laboratory and are being tested. The first strategy is to fuse the ectodomain of an
unknown PRK to the phylogeneticaly unrelated kinase domain of the animal Epidermal
Grown Factor Receptor (EGFR). When tested with a crude protein extract containing the
specific ligand of the unknown PRK, a transphosphorylation should occur and be detected.
The second strategy will use the endodomain of BRI1 as a reporter, a receptor responding
to the brassinosteroid phytohormone, which will relay the message to a second construct
used as a reporter gene once the ligand has bound the PRK ectodomain fused to the BRI1
endodomain.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:umontreal.ca/oai:papyrus.bib.umontreal.ca:1866/4278 |
| Date | 05 1900 |
| Creators | Alameh, Mohamad |
| Contributors | Matton, Daniel Philippe |
| Source Sets | Université de Montréal |
| Language | French |
| Detected Language | French |
| Type | Thèse ou Mémoire numérique / Electronic Thesis or Dissertation |
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