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Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O presente estudo teve como principal objetivo avaliar a diversidade genética de Leishmania (Viannia) braziliensis nos níveis inter e intrapacientes, diretamente em lesões cutâneas e mucosas de indivíduos com leishmanioses mucocutânea (LMC), disseminada (LD) e mucosa (LM), incluindo indivíduos coinfectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV). Um total de 61 amostras procedentes de 38 pacientes foi analisado pelas técnicas da reação em cadeia da polimerase (PCR), da reação em cadeia da polimerase com primer único em condições de baixa estringência (LSSP-PCR) e da análise fenética, tendo como alvo molecular a região variável do minicírculo do DNA do cinetoplasto (kDNA). Neste estudo, predominaram indivíduos do sexo masculino e com acometimento mucoso nasal. A presença de DNA do parasita foi evidenciada pela banda diagnóstica de 750 pb, em todas as amostras analisadas, possibilitando o diagnóstico específico. Na investigação do perfil genotípico de subpopulações de L. (V.) braziliensis, através da LSSP-PCR, foi revelado o polimorfismo genético intrafragmento traduzido como uma assinatura do kDNA do parasito para cada amostra. Assinaturas de kDNAs similares em amostras de paciente coletadas ao mesmo tempo (mucosa oral e nasal), e a divergência nos perfis genéticos em amostras coletadas em tempos diferentes na mesma localização (mucosa nasal) sugerem a clonalidade do inóculo inicial, como consequência da estrutura populacional clonal de Leishmania
No estudo da variabilidade genética de L. (V.) braziliensis nos níveis inter e intrapacientes foram evidenciadas similaridades genotípicas entre as amostras de lesões cutânea e mucosa intrapacientes. As análises fenética e estatística possibilitaram afirmar que a diversidade genética no nível intrapacientes é menor do que a observada entre os pacientes. Nenhuma associação pode ser observada entre os perfis genéticos de L. (V.) braziliensis e as formas clínicas da doença (LM, LMC, LD), e nem em relação à localização da lesão cutânea ou mucosa (nasal ou oral). O polimorfismo genético de L. (V.) braziliensis também foi evidenciado nos pacientes coinfectados pelo HIV, cuja análise fenética reuniu os perfis genéticos em dois grupos distintos, os quais discriminaram entre as amostras obtidas de pacientes com coinfecção Leishmania/ HIV daquelas obtidas de pacientes não coinfectados. A discriminação de perfis genéticos diferenciados de L. (V.) braziliensis em pacientes coinfectados pelo HIV sugere que a imunossupressão tem impacto na estrutura populacional do parasita. Os nossos resultados corroboram a complexidade genética existente nos parasitos do gênero Leishmania, reforçando a diversidade na dinâmica populacional e na plasticidade genética de L. (V.) braziliensis / Oliveira, F S.
C
linic
al and
molecular study in mucocutaneous leishmaniasis
:
Diagno
ses
and s
creening
of subpopulation of
Leishmania (Viannia) braziliensis
in the
inter and
intrapatient levels
.
Rio de Janeiro, 2011
.
10
1
f.
Thesis
[
PhD
in Clinic research in Infectious
Diseases
]
–
Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas.
ABSTRACT
The present study has as its main objective
to
evaluate the genetic diversity of
L
eishmania
(V
iannia
) braziliensis
in the
inter and intrapatient levels, directly from cutaneous and mucosal
lesions of individuals with mucocutaneous
(MCL), disseminated (DL)
and mucosal
(ML)
leishmaniasis, including individuals with
the human immunodeficiency virus (HIV) infection
.
A total of 61 samples recovered from 38 patients was analyzed by the techniques of
pol
y
merase chain reaction (PCR), low
-
s
tringency single
-
specific
-
primer PCR (LSSP
-
PCR)
and phenetic analysis, directed to the variable region of
the kinetoplast DNA (
kDNA
)
minicirc
les. In this study,
male individuals
with nasal mucosa
involvement
predominated
. The
presence of the parasite’s DNA was revealed by the diagn
osis band of 750 bp, in all analyzed
samples, making the specific diagnosis possible. In the investigation of the genotypic
profile
of the subpopulations of
L. (V.) braziliensis
, through LSSP
-
PCR, it was revealed the
intrafragment genetic polymorphism tran
slated as a kDNA signature for each sample. Similar
kDNAs signatures in patient’s samples collected simult
aneously (oral and nasal mucosa
), and
the divergence in the genetic profiles in samples collected at different times on
the same
location (nasal mucos
a
) suggest the clonality of the initial inoculu
m
, as a consequence of the
clonal population structure of
Leishmania.
In the study of the genetic variability of
L. (V.)
braziliensis
in the
int
er
and intr
a
patient levels, genotypic similarities were observed
among
the cutaneous and mucos
al
lesions intrapatients. The statistic and phenetic analyzes made it
possible to assure that the genetic diversity
in
the intrapatient level is lower than the observed
among the patients. No association could be observed betw
een the genetic profiles of
L. (V.)
braziliensis
and the clinical forms of the disease (ML, MCL, DL) and neither in relation to the
location of the
cutaneous or
mucosal lesion (nasal or oral). The genetic polymorphism of
L.
(V.) braziliensis
was also detec
ted in the
HIV
-
infected
patients
. The phenetic analysis has
grouped the genetic profiles into two different clusters, which discriminated between samples
from patients with
Leishmania
/
HIV
co
-
infections
from that of non
-
HIV
-
i
nfected patients.
The discrimin
ation of
L. (V.) braziliensis
divergent genetic profiles
in patients co
-
infected
with HIV suggests that the immunosupression has some
impact on the parasite’s populat
ional
structure.
Our result
s
corroborate the genetic complexity in parasites of the genus
Leishmania
reinforcing the diversity in the populacional
dynamics and genetic plasticity
of
L. (V.)
braziliensis
.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/14387 |
| Date | January 2011 |
| Creators | Oliveira, Fernanda Santos de |
| Contributors | Valete-Rosalino, Cláudia Maria, Pacheco, Raquel da Silva |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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