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Previous issue date: 2015-11-15 / A busca por novos metabólitos secundários de interesse biotecnológicos tem aumentoado nos últimos anos. O objetivo foi isolar micro-organismos endofíticos e da rizosfera, avaliar o potencial biotecnológico dos micro-organismos endofíticos e da rizosfera de Ipomoea pes-caprae. Os endófitos isolados foram inoculados em meio específico para bactérias, actinobactérias (ALA, Meio Completo, ISP2) e fungos (BDA e Agar Sabouraud) à temperatura de 30°C. Para o isolamento das actinobactérias da rizosfera foi utilizado 10 g da amostra do solo rizosférico e este foi misturado a 90 mL de NaCl a 0,9%(m/v) a pH (5,6). Estes micro-organismos foram cultivados em meios de cultura ISP2 e Czapeck Dox a 30 ºC por 7 dias. Foi realizada atividade antimicrobiana de todos os micro-oranismos isolados tanto endofítico como rizosféricos. Para a enzima L- asparaginase foi realizada análise qualitativa e cinética através de Fermentação Semi-Sólida com farinha de soja como substrato. Além da análise qualitativa da L-asparaginase foi verificada a presença de hidrolase (amilase, protease, celulase e lipase. A análise química do extrato metanólico do endófito Streptomyces sp, fungos e actinobactéria rizosférica Nocardia sp foi realizada utilizando a cromatografia de camada delgada (CCD). Das bactérias endofíticas foi avaliada sua capacidade de produção de Ácido Indol Acético. As frequências de endófitos isolados foram: fungos-folha 44.71% (55/123), fungos raízes 13% (16/123), bactérias-folhas 41.46% (51/123), bactérias raízes 1.62% (2/123), actinobactéria 0,81% (1/123). Da rizosfera foram isolados 81 actinobactérias. Na atividade antimicrobiana a maioria dos micro-organismos da rizosfera e endofíticos apresentou atividade antimicrobiana para bactérias Gram-positivas. No extrato dos micro-organismos endofíticos e rizosférico como no extrato da planta foram verificadas a presença de composto mono-sesquiterpenos. A produção de L-aspraginase foi verificada nos micro-organismos endofíticos e nas actinobactérias rizosférica. Na cinética de produção de L-asparaginase pelo endófito Streptomyces sp, verificou-se que o melhor dia de produção foi de 10° dia (0,0702 U/mL de L-asparaginase). Com relação as hidrolase foi verifacdo a presença de amilase e protease na maioria dos endofíticos. Das 53 bactérias endofíticas isoladas, 8 linhagens são produtoras de ácido indol acético. Por tanto, a prospecção dos micro-organismos rizosféricos e endofíticos isolados da planta I. pes-caprae (L.) R. Br. é uma promissora fonte de substâncias de interesse biotecnológico. / The search for new secondary metabolites of biotechnological interest has stepped up in recent years. The aim of present study was to isolate endophytic and rhizosphere micro-organisms to evaluate the secondary metabolites produced by micro-organisms associated with the leaves, roots and rhizosphere of Ipomoea pes-caprae. The endophytes isolated were inoculated in media specific to actinobacteria, bacteria (ALA, full medium, ISP2) and fungi (BDA and Agar Sabouraud) at a temperature of 30°C. The isolation of actinobacteria from the rhizosphere used 10 g of the rhizosphere soil sample mixed with 90 mL of NaCl at 0.9% (m/v) and pH 5.6. These micro-organisms were cultivated in ISP2 and Czapeck Dox culture media at 30 ºC for 7 days. Antimicrobial activity was analyzed. Qualitative analysis, 23 experimental planning and kinetic analysis of the enzymatic activity of L-asparaginase was carried out using semi-solid fermentation with soya flour as a substrate. Chemical analysis of the methanolic extract of the endophyte Streptomyces sp, fungi and the rhizosphere actinobacteria Nocardia sp was conducted using thin layer chromatography (TLC). The capacity of the endophytic bacteria to produce indole acetic acid was measured. The frequencies for isolated endophytes were: fungi-leaves 44.71% (55/123), fungi-roots 13% (16/123), bacteria-leaves 41.46% (51/123), bacteria-roots 1.62% (2/123), and actinobacteria 0.81% (1/123). Eighty-one actinobacteria were isolated from the rhizosphere. Most of the rhizosphere and endophytic micro-organisms exhibited antimicrobial properties against Gram-positive bacteria. Mono-sesquiterpene compounds were found in the endophytic and rhizospheric micro-organisms and in the plant extract. Production of L-asparaginase was found in endophytic micro-organisms and in actinobacteria from the rhizosphere. 23 experimental planning of the production of the L-asparaginase enzyme by the Streptomyces sp endophyte suggests that the lower the quantity of micro-organism inoculate, the concentration of L- asparagine and temperature, the better the production of the L-asparaginase enzyme. The kinetics of L-asparaginase production by the Streptomyces sp endophyte showed that the best day for production was the 10th (0.0702 U/mL of L-asparaginase). Of the 53 endophytic bacteria isolated, eight strains produced indole acetic acid. The prospection of rhizosphere and endophytic micro-organisms isolated from I. pes-caprae (L.) R. Br. is thus a promising source of substances of biotechnological interest.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/17819 |
| Date | 15 November 2015 |
| Creators | CUNHA, Ivana Gláucia Barroso da |
| Contributors | http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/busca.do, AMORIM, Elba Lucia Cavalcanti de |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Ciencias Farmaceuticas, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Breton |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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