The most common cancer form among men i prostate cancer and measurement of circulating tumor cells (CTCs) in the blood is a useful tool to evaluating the responset o treatment and progress of disease. CTC’s are cells that have detached from the original tumor and have spread in the blood sstem. In this master thesis a panel of 16 genes at single cell levels are analyzed using Reverse Transciptase Multiplexed Ligation-dependent Probe Amplification (RT-MLPA). The method uses gene specific reverse transcription primers to generate and amplify cDNA which MLPA probes are hybridized to. Correctly hybridized probes are ligated and amplified so that relative expression profiles can be calculated. One additional MLPA probe was designed to add to the existing panel. The results show that the MLPA reaction generates products from all genes in the panel when performed on synthetic MLPA prbe targets with equal concentrations. Results from totatl RNA on cell lines show that the reverse transcription and amplification of cDNA need further optimizations. When the whole assay is working it will be possible to evaluate gene expression from CTC’s that can help us understand the progression and spread of prostate cancer in the body. / Prostatacancer är den vanligaste cancerformen hos män. Att räkna antal cirkulerade tumörceller (CTCer) i blodet är ett bra verktyg för att undersöka hur sjukdomen fortlöper och hur den svarar på behandling. CTCer är enskilda celler som brutit sig loss från originaltrumören och sprids i kroppen genom blodsystemet. I det här examensarbetet analyseras en panel bestående av 16 gener med hjälp av Reverse Transcriptase Multiplexed Ligation-dependent Probe Amplification (RT-MLPA). Metoden bygger på att genspecifika primrar används för att syntetisera cDNA från mRNA. MLPA-prober hybridisear sedan till det amplifierade cDNAt. MLPA prober som hybridiserat korrekt ligeras och amplifieras och den relativa uttrycksnivåerna kan beräknas. Ytterligare en MLPA-probe designades för att passa in i den existerande blandningen av MLPA-prober. Resultaten viar att alla MLPA-prober ger produkter då en syntetisk DNA-templat blandning med lika koncentrationer används. Resultaten från total-RNA från cellinjer visar att omvandlingen och amplifieringen av mRNA till cDNA måste optimeras. När hela protokollet fungerar är det möjligt att undersöka genuttrycken i CTCer vilket kan underlätta förståelsen för utveckling och spridning av prostatacancer i kroppen.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UPSALLA1/oai:DiVA.org:kth-173122 |
| Date | January 2015 |
| Creators | Lindberg, Magdalena |
| Publisher | KTH, Skolan för bioteknologi (BIO) |
| Source Sets | DiVA Archive at Upsalla University |
| Language | Swedish |
| Detected Language | English |
| Type | Student thesis, info:eu-repo/semantics/bachelorThesis, text |
| Format | application/pdf |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.0648 seconds