CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / MolÃculas bioativas extraÃdas a partir de algas marinhas, tais como os polissacarÃdeos sulfatados,vÃm se destacando como possuidores de diversas atividades biolÃgicas. Este estudo teve como objetivo avaliar as atividades antiviral e anti-inflamatÃria de uma fraÃÃo polissacarÃdica sulfatada da alga marinha Gracilaria birdiae. Os polissacarÃdeos sulfatados totais (PST) foram extraÃdos por digestÃo enzimÃtica e em seguida, fracionados em coluna de DEAE-celulose, originando duas
fraÃÃes (FI- 0,5 M e FII- 0,75 M). A fraÃÃo FI, de maior rendimento, foi objeto de estudo, sendo identificada como uma agarana por espectroscopia de infravermelho (FT-IR) e de elevada massa molecular (>100 KDa) por cromatografia de permeaÃÃo em gel. A viabilidade celular da fraÃÃo FI foi determinada por alteraÃÃo da morfologia celular com posterior quantificaÃÃo a 492 nm. As cÃlulas foram tratadas com diluiÃÃes seriadas de FI (1000 a 7,8 μg/mL) e em seguida, incorporado o corante vermelho neutro, com posterior leitura de absorbÃncia. O grau de atividade antiviral foi expresso como percentagem de inibiÃÃo viral. Os resultados mostraram que FI na concentraÃÃo de 250 μg/mL nÃo apresentou toxicidade em cÃlulas C6/36, Vero e HEp-2 e apresentou um efeito antiviral significativo com inibiÃÃo de 95,8% contra o HSV-1, de 94,4 % contra o HSV-2 em cÃlulas Vero e de 89,2 % contra DENV-1 em cÃlulas C6/36, quando comparado ao grupo controle. Em adiÃÃo, FI (10 mg/kg) apresentou efeito anti-inflamatÃrio quando administrada por via subcutÃnea (s.c.) em ratos Wistar no modelo de peritonite utilizando carragenina como agente flogÃstico ou no edema de pata induzido por carragenina ou dextrana. FI (10 mg/kg) provocou um efeito anti-inflamatÃrio por uma diminuiÃÃo no nÃmero de leucÃcitos na cavidade peritoneal, alÃm de tambÃm reduzir o edema de pata induzido por carragenina na terceira hora, comprovado pela quantificaÃÃo da mieloperoxidase e tambÃm o edema por dextrana nos primeiros trinta minutos. Para analisar o envolvimento da via heme oxigenase na atividade
anti-inflamatÃria de FI, os animais foram prÃ-tratados por via s.c. com um inibidor especÃfico do grupo heme (zinco rotoporfirina IX). Depois de inibida por ZnPP IX, o efeito anti-inflamatÃrio de FI no edema de pata induzido por carragenina nÃo foi observado. Para avaliar os efeitos
sistÃmicos, FI (10 mg/kg) foi administrada por via intraperitoneal em camundongos em dose Ãnica. As alteraÃÃes sistÃmicas foram avaliadas durante 48 h ou por dose repetida, uma vez ao dia durante 14 dias, sendo que FI (10 mg/kg) nÃo causou mortalidade ou alteraÃÃes significativas nos parÃmetros bioquÃmicos, hematolÃgicos e histolÃgicos, sendo considerada segura na dose testada. / Bioactive molecules extracted from seaweed, such as sulfated polysaccharides, have been
highlighted as having diverse biological activities. This study aimed to evaluate the antiviral
activity and anti-inflammatory effect of a sulfated polysaccharide from seaweed Gracilaria
birdiae. Total sulfated polysaccharides (TSP) were extracted by enzimatic digestion and
following fractioned on DEAE-cellulose column, obtaining two fractions (FI - 0.5 M and FII -
0.75 M). The FI fraction, which had the highest yield, was object of this study, has been
identified as an agar by IR spectroscopy (FT-IR) and with a high molecular weight (>100KDa)
by gel permation cromatography. The cell viability of FI fraction was determined by the change
of the cell morphology with further quantification at 492 nm. Cells were treated with serial
dilutions of FI (1000 to 7.8 μg/mL) and then, neutral red dye was incorporated, with subsequent
measurement of absorbance. The degree of antiviral activity was expressed as percent inhibition
of the virus. The results showed that FI at a concentration of 250 μg/mL showed no toxicity on
C6/36, Vero and HEp-2 cells and had a significant antiviral effect with inhibition of 95.8%
against HSV-1, 94.4% against HSV-2 on Vero cells and 89.2% against DENV-1 on C6/36 cells,
when compared to the control group. In addition, FI (10 mg /kg) presented anti-inflammatory
effect when administered by subcutaneous route (s.c.) in Wistar rats in a model of peritonitis
using carrageenan with a flogistic agent or in the paw edema using carrageenan or dextran. FI (10
mg/kg) induced an anti-inflammatory effect by a decrease in the leukocytes into the peritoneal
cavity. FI also reduced the paw edema induced by carrageenan in the third hour comproved by
the mieloperoxidase quantification and also inhibited the paw edema induced by dextran on the
first thirty minutes. To analyze the involvement of the heme oxygenase pathway on antiinflammatory
activity of FI, animals were pretreated by s.c. route with an specific inhibitor of
heme group (zinc protoporphyrin IX). After inhibition by ZnPP IX, the anti-inflammatory effect
of FI on carrageenan-induced paw edema has not been observed. To evaluate the systemic
effects, FI (10 mg/kg) was administered by intraperitoneal route in mice in a single dose. The
systemic changes were evaluated during 48 h or by repeated dose, once a day for 14 days. The
results showed that, FI (10 mg/kg) did not cause mortality or significant changes in the
biochemical, hematological and histopathological parameters, considered safe in the tested dose.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:5833 |
| Date | 18 September 2012 |
| Creators | Edfranck de Sousa Oliveira Vanderlei |
| Contributors | Norma Maria Barros Benevides, HellÃada Vasconcelos Chaves, JanaÃna Serra Azul Monteiro Evangelista, Vitor Hugo Pomin, Maria Teresa Villela Romanos |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em BioquÃmica, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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