FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / Cowpea is an important legume of the Northeast of Brazil and its yield is affected by Colletotrichum fungi. These fungi are known to occur on and cause disease anthracnose on the broad range of plants. In addition, the rapid and transient accumulation of reactive oxygen species, termed âoxidative burstâ, is one of the earliest observable reaction of plant cells to microbial infection. As plant H2O2 is believed to have direct antimicrobial effects on pathogens it was raised the hypothesis that alteration of H2O2 concentrations by pharmacological compounds could confer differences in susceptibility of the cowpea genotype BR-3-Tracuateua to C. gloeosporioides attack. Thus, seeds were germinated on humid Germitest paper and after four days seedlings were transferred to hydroponic solution. Eight days later, the primary leaves were excised, infiltrated with glucose oxidase (GO+G), salicylic acid (AS), catalase (CAT) and diphenyleneiodonium chloride (DPI) transferred to Petri dishes and inoculated with 2.0 x 105 spores mL-1 fungal suspension on the adaxial surface. After, leaves were placed in darkness and collected at 12, 24, 48 and 72 hours. By GO+G and SA leaf treatments showed 144.96 and 186.05 nmol H2O2 g-1 fresh mass (FM), respectively, and the fungus presented a subcuticular, intramural necrotrophic strategy, forming secondary hyphae associated with a quick spread and a rapid killing of the host cells. On the leaves treated with SA, it was observed lipid peroxidation and the absence of melanized appresoria. However, CAT and DPI treatment leaves presented 55.50 nmol H2O2 g-1 FM and the fungus showed hemibiotrophic infection-type, with globular vesicles and primary and secondary hyphae formation. All results suggest that despite H2O2 influenced directly the fungal infection process-type it does not confer resistance of cowpea to C. gloeosporioides. / FeijÃo-de-corda à um importante legume presente na regiÃo Nordeste do Brasil e sua produÃÃo à afetada por fungos do gÃnero Colletotrichum. Estes fungos sÃo conhecidos por causar antracnose em uma grande variedade de plantas. AlÃm disso, o acÃmulo rÃpido e transiente de espÃcies reativas de oxigÃnio, nomeado de âoxidative burstâ, à uma das primeiras reaÃÃes observÃveis em cÃlulas de plantas diante infecÃÃo microbiana. Como H2O2 produzido por plantas à considerado por apresentar efeitos antimicrobianos diretos, foi levantada a hipÃtese que alteraÃÃes nas concentraÃÃes de H2O2 por substÃncias farmacolÃgicas poderiam conferir diferenÃas na susceptibilidade do genÃtipo de feijÃo-de-corda, BR-3-Tracuateua, ao ataque do fungo C. gloeosporioides. Deste modo, sementes foram germinadas em papÃis Germistest umedecidos e, depois de 4 dias, plÃntulas foram transferidas para soluÃÃo hidropÃnica. Passados oito dias, as folhas primÃrias foram cortadas, infiltradas com glucose oxidase (GO+G), Ãcido salicÃlico (AS), catalase (CAT) e cloreto de difenilenoiodÃnio (DPI), transferidas para placas de Petri e inoculadas com suspensÃo do fungo ajustada para concentraÃÃo de 2,0 x 105 esporos mL-1. Em seguida, as folhas foram mantidas no escuro e foram coletadas em 12, 24, 48 e 72 horas. Folhas tratadas com GO+G e AS mostraram 144,96 e 186,05 nmol H2O2 g-1 de massa fresca (MF), respectivamente, e o fungo apresentou estratÃgia subcuticular, intramural necrotrÃfica, formando hifas secundÃrias associadas com Ãgil crescimento e rÃpida morte das cÃlulas hospedeiras. Nas folhas tratadas com AS, foi observada peroxidaÃÃo de lipÃdios e ausÃncia de apressÃrios melanizados. Contudo, folhas tratadas com CAT e DPI apresentaram 55,50 nmol H2O2 g-1 MF e, o fungo, mostrou modo de infecÃÃo hemibiotrÃfico, com vesÃculas globulares e formaÃÃo de hifas primÃrias e secundÃrias. Todos os resultados sugerem que, apesar do H2O2 tenha influenciado diretamente o modo de infecÃÃo do fungo, este nÃo conferiu resistÃncia no feijÃo-de-corda ao C. gloeosporioides.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / The malate-aspartate shuttle allows the hydrogen ions of the cofactor NADH produced in the cytosol to reach the electron transport chain in the mitochondria and generate energy. The objective of this study was to determine the effects of oral L-glutamine and the stable dipeptide, l-alanyl-glutamine, on the expression of the mitochondrial key enzymes of the malate-aspartate shuttle in rat distal small intestine on 30 minutes of ischemia followed by 30 minutes of reperfusion. In order to demonstrate the possible changes in (malate desidrogenase) MDH 1, 2 and (aspartate desidrogenase) GOT 1, 2 in the rat intestine tissues, the mRNA levels for those enzymes were analyzed by real-time PCR. Results showed that although there were fluctuations in tissue MDH and GOT values of the samples assessed with glutamine versus L-alany-glutamine supplementation versus a calcium caseinate supplementation, no significant differences were observed

A desnutriÃÃo pode afetar a arquitetura intestinal, causando atrofia da mucosa e comprometendo o turnover epitelial. Embora o intestino seja capaz de responder compensatoriamente à desnutriÃÃo, os mecanismos moleculares pelos quais o intestino responde à privaÃÃo proteica nÃo estÃo completamente esclarecidos. A quinase celular intestinal (ICK) à uma proteÃna altamente conservada do tipo serina/treonina e um novo componente das vias de sinalizaÃÃo que regulam a proliferaÃÃo celular na cripta intestinal. Para avaliar o papel da resposta intestinal compensatÃria à privaÃÃo proteica, regulada pela ICK, foi medida a ativaÃÃo de vias moleculares relacionadas à proliferaÃÃo e sobrevivÃncia celulares, como a via canÃnica Wnt/β-catenina, a via da proteÃna alvo da rapamicina em mamÃferos (mTOR), vias da proteÃna-quinase ativada por mitÃgeno (MAPK) e da proteÃna quinase B (PKB/Akt), bem como a expressÃo de marcadores para cÃlulas-tronco intestinais (LgR-5 e Bmi1) por imunoblotting num modelo in vivo em camundongos fÃmeas C57BL/6J submetidas à uma dieta hipoproteica (contendo 2% de proteÃna) por cinco dias e controles nutridos recebendo dieta padrÃo. TambÃm foi realizado um estudo in vitro utilizando cÃlulas HCT-8 de adenocarcinoma ileocecal humano desafiadas com meio padrÃo com restriÃÃo de soro fetal bovino (0-1%) para avaliar a resposta da ICK na presenÃa ou nÃo de fatores trÃficos intestinais como glutamina (2mM), alanil-glutamina (10 e 50 mM) e zinco (10 e 50μM), alÃm de caseÃna e albumina sÃrica bovina (BSA) na concentraÃÃo de 0,25 e 0,5% no meio, respectivamente. A anÃlise de RNAm foi feita para avaliar o transcrito de ICK por q-PCR, apÃs privaÃÃo proteica. No intuito de avaliar o efeito dessa quinase sobre a proliferaÃÃo celular e apoptose, foi realizado o silenciamento do gene da ICK com uso de RNA de interferÃncia em cÃlulas HCT-8. A viabilidade celular foi avaliada com base na exclusÃo do azul de tripan. Posteriormente, foram realizados testes de western blot para caspase 3 e 9, PARP-clivada, alÃm de anexina V por citometria de fluxo para avaliar apoptose, assim como western blot para via Wnt/β-catenina e ciclina D1 no intuito de medir os mecanismos relacionados à proliferaÃÃo celular. Dessa forma, foi identificado um aumento significativo e transitÃrio nos nÃveis intestinais de ICK na desnutriÃÃo induzida pela raÃÃo hipoproteica, concomitante com a ativaÃÃo de vias moleculares relacionadas à proliferaÃÃo e sobrevivÃncia, bem como o aumento da expressÃo de marcadores para cÃlulas-tronco intestinais. Esse trabalho tambÃm documentou que a privaÃÃo proteica, induzida por baixa concentraÃÃo de soro, aumenta a expressÃo de ICK em cÃlulas HCT-8, efeito que foi revertido pela adiÃÃo de BSA no meio. O mesmo resultado, nÃo foi observado com outros compostos como glutamina, alanil-glutamina e zinco. Apesar do aumento da expressÃo da ICK apÃs privaÃÃo proteica, nÃo houve diferenÃa significativa da sua transcriÃÃo quando comparado com os controles. O silenciamento do gene de ICK reduziu significativamente a sinalizaÃÃo da via Wnt-β-catenina e ciclina D1 em cÃlulas HCT-8 com aumento da apoptose por um mecanismo dependente de caspases. Os resultados sugerem que o aumento da expressÃo de ICK em resposta à privaÃÃo proteica à um mecanismo de proteÃÃo que limita a apoptose e suporta a proliferaÃÃo celular epitelial na desnutriÃÃo. / Malnutrition can affect the intestinal architecture, causing mucosal atrophy and compromising epithelial turnover. Although the gut is able to compensatorily respond to malnutrition, the molecular mechanisms by which the gut responds to protein deprivation are not completely understood. The intestinal cell kinase (ICK) is a highly conserved serine/threonine protein and a novel component of the signaling pathways that regulate cell proliferation in the intestinal crypt. In order to evaluate the role of the intestinal compensatory response to protein deprivation mediated by ICK, the activation of molecular pathways related to cell proliferation and survival were measured in C57BL/6J mice subjected to low protein diet (containing 2% protein) for five days and received standard chow-fed controls. We analyzed the intestinal canonical Wnt/β-catenin pathway, mammalian target of rapamycin (mTOR), mitogen-activated protein kinase (MAPK) and protein kinase B (PKB/Akt) by immunoblotting. We also measured the expression of intestinal stem cells markers (LGR-5 and Bmi1). We also conducted an in vitro study using human ileocecal adenocarcinoma cells (HCT-8) starved with low serum (0-1%) to evaluate the ICK response with or without gut trophic factors, such as glutamine (2 mM), alanyl-glutamine (10 and 50mM), and zinc (10 and 50μM), casein and bovine serum albumin (BSA) at a concentration of 0.25 or 0.5% in the medium, respectively. We also assessed ICK mRNA transcript by q-PCR after protein deprivation. In order to evaluate the effect of this kinase on cell proliferation and apoptosis, the ICK gene was silenced using interference RNA in HCT-8 cells. Cell viability was measured by trypan blue exclusion. Furthermore, caspase 3 and 9, cleaved PARP, analyzed by western blot, and annexin V, measured by flow cytometry, were used to assess apoptosis. In order to measure ICK effect on cell proliferation, we analyzed Wnt/β-catenin and cyclin D1 pathways by western blot. We identified a significant and transient increase in ICK intestinal levels following low-protein induced malnutrition, concomitant with the activation of molecular pathways related to proliferation and survival, as well as increased expression of intestinal stem cell markers. This work also documented that the protein deprivation, induced by low serum concentration, increased the expression of ICK in HCT-8 cells, an effect that was reversed by BSA in the medium. This reverse effect was not seen with other compounds such as glutamine, alanyl-glutamine or zinc. Despite the increase in ICK expression after protein deprivation, no significant difference in its transcripts was found, when compared with controls. The silencing of the ICK gene significantly decreased Wnt/β-catenin and cyclin D1 signaling activation in HCT-8 cells with increased apoptosis by a caspase dependent mechanism. Our results suggest that the increased ICK expression in response to protein deprivation is a protective mechanism that limits cell apoptosis and supports epithelial cell proliferation following malnutrition. Keywords: Malnutrition. Protein deprivation. Intestinal cell kinase. β

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5062_1.pdf: 687319 bytes, checksum: 461fc7d8cdc30199fb84e4d163c90ba8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / Na busca por métodos de análise de microcystinas de fácil execução, baixo custo e sensibilidade alta o suficiente para atender as recomendações da Organização Mundial da Saúde OMS e da legislação Brasileira para água potável, foi desenvolvida uma técnica de imunoensaio dot blot para determinação de microcistina-LR em água e extratos de cianobactérias. Com esta técnica foi possível a determinação visual direta de concentrações de microcystina-LR menores que 1 μg/L, em amostras de água purificada e água de superfície (lago) incriminadas com concentrações na faixa de 0,16 a 10,0 μg/L de microcystina-LR. Nas condições testadas não foi necessário nenhum processo de concentração ou limpeza das amostras. Foi desenvolvido um programa de computador especificamente para a leitura das membranas de nitrocelulose, permitindo uma melhor caracterização do sinal com a obtenção de curvas analíticas similares às obtidas nas análises com método de imunoensaio ELISA. Com a técnica dot blot computadorizada utilizando um scanner convencional foram obtidas curvas de calibração com microcystina-LR em concentrações de 0,16 a 1,6 μg/L, cujo coeficiente de correlação foi de 0,9551 para água purificada e 0,8402 em água de superfície. Quando analisadas pelo método ELISA, coeficientes de correlação de 0,9713 e 0,8316 foram observados, respectivamente. Quantificação em dot blot na faixa de 0,16 a 10,0 μg/L foi realizada, porém com menor correlação entre a concentração da toxina e a intensidade dos pixels. A análise computadorizada permitiu observar uma boa correlação entre concentração e a intensidade dos pixels em extrato da cepa toxigênica Microcystis aeruginosa - NPJB-1, produtora de microcistina. O programa desenvolvido permitiu ainda a aplicação na quantificação de proteína de soro bovina - BSA na faixa de 0 a 78 μg/mL (r = 0,9868). Esta reação foi corada usando solução de amidoblack. Com o objetivo de obter um novo marcador fluorescente aplicável às análises de microcystina-LR em baixas concentrações, foi sintetizado um complexo de microcystina-LR-Criptato de térbio. A formação do complexo foi acompanhada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e o complexo formado analisado quanto à atividade imune (ELISA), positividade de reação protéica e espectro de luminescência, que confirmaram a conjugação. Na busca por novos métodos para análise de microcistina foi monitorada a transição 5D0 à 7F2 de um complexo IgG -antimicrocistina-LR-KLH-criptato de európio. Como suporte foi utilizado gel superabsorvente de ácido acrílico / poliacrilamida. Os espectros de emissão da IgG livre, do criptato de európio e do complexo IgG-Criptato de európio foram monitorados. Os espectros de emissão na presença de IgG livre apresentaram uma mudança específica na transição

En este curso el alumno basándose en la curiosidad innata del ser humano, adentrará en el conocimiento profundo de la Biología y Bioquímica, a fin de obtener la base necesaria que le permita enfrentar los cursos posteriores que se desarrollarán en los siguientes años de su carrera. El objeto de esta guía es encaminar al alumno, bajo la dirección del Docente, por el mundo biológico desde lo más simple a lo complejo; la guía consta de una parte introductoria, con indicaciones generales a tomar en cuenta en todas las prácticas, y las indicaciones específicas por tema a desarrollar.

Trifluralina (a, a, a,trifluoro-2,6-dinitro-N, N-dipropil-p-toluidina) (TFL) é um herbicida pré-emergente, incorporado ao solo que tem sido usado na agricultura desde a década de sessenta; ele é moderadamente persistente em vários tipos de solos do Brasil. O objetivo deste estudo foi isolar - de um solo agrícola contaminado por quatro décadas - e caracterizar bactérias resistentes a TFL, determinar suas habilidades em degradar a TFL, investigar a presença de gens degardadores que possam estar envolvidos na degradação da TFL e propor um método de ensino teórico prático sobre a biodegradação, para cursos de graduação. Oito bactérias foram isoladas, pela técnica de subculturas repetidas em meio contendo TFL como única fonte de carbono, e identificadas, pelo método bioquímico e seqüenciamento do rDNA 16S como Klebsiella oxytoca, Herbaspirillum seropedicae, 3 strains of Bacillus simplex, 2 de Pseudomonas montelli e uma outra Pseudomonas sp. Uma terceira bactéria (iaolado #9), não identificada, que crescia ao redor de cristais de TFL em meio sólido, foi isolada; esta é uma técnica nova que poderá ser útil no isolamento de bactérias que são resistentes a outros compostos pouco solúveis em água. Todas as bactérias isoladas foram submetidas ao teste de biodegradação, em um meio contendo sais minerais, 0,1% succinato, 0,1 % de extrato de leveduras e 50 mg. L-1 de TFL Cinco bactérias reduziram a concentração de TFL no meio, após trinta dias de incubação: Klebsiella oxytoca (24,6 %), Herbaspirillum seropedicae (16,4 %), Bacillus simplex 2 (25.0 %), Bacillus simplex 3 (16.0 %) e isolado 9 (21.0 %). Uma bactéria conhecida como degradadora da TFL, Brevundimonas diminuta (NCIMB 10329) degradou a TFL, neste meio, de maneira semelhantes ao das bactérias isoladas. Os DNAs extraídos das quatro bactérias identificadas degradadoras da TFL, foram sondados para os gens catbólicos ndoB, todC, xylX, catA e xylE, os quais codificam as enzimas naftaleno 1,2-dioxigenase, toluene dioxigenase, toluate 1,2-dioxigenase, catecol 1,2-dioxigenase e catecol 2,3-dioxigenase, respectivamente. Técnicas de PCR e hibridização demonstraram que os DNAs de todas estas quatro bactérias foram fortemente hibridizadas para o gen ndoB, contudo, usando a técnica de ¨zonas claras¨, observou-se que nenhuma delas degradou naftaleno. Estes resultados indicam a presença de gens dioxigenases, nestas bactérias degradadoras da TFL, que poderiam estar transformando a TFL como substrato principal, ou como cometabolismo. O conhecimento sobre processos de biodegradação é necessário para os graduados dos cursos de agronomia, química, biologia, tecnologia de alimentos, etc. Neste trabalho, também, propomos o estudo teórico e prático da compostagem o qual estimula o interesse dos estudantes em aprender sobre o metabolismo envolvido neste, e em outros, processos biotecnológicos.

Algumas características como a falta de cristais de oxalato de cálcio, de estruturas secretoras e de tricomas, e a riqueza de fibras constituíndo estratos localizados imediatamente abaixo da epiderme e limitando o parênquima cortical, e formando bainhas vasculares, subsidia a autenticidade dos rizomas de Arundo donax. Além disto, os rizomas contem amido, cumarinas, alcalóides, flavonóides e saponinas não hemolíticas. Uma lectina (ADL) especifica para GlcNAc e seus derivados oligossacarídeos foi isolada e purificada dos rizomas de Arundo donax L. (Poaceae) por cromatografia de afinidade em matriz de estroma de coelhopoliacrilamida, resultando em uma purificação de 12,15 vezes, rendimento de 6,58% e recuperação de 80 % da atividade hemaglutinante. A lectina purificada é heterotrimérica com massa molecular aproximada de 32.900 estimada por gel de filtração e de 33.000 obtida por SDS-PAGE, em condições não desnaturantes e não redutoras. A lectina purificada possui elevado conteúdo de Glu/Gln, Asp/Asn, Gly e Cys, mas não é glicosilada. ADL é relativamente estável ao calor e ao pH, e resistente à digestão por enzimas proteolíticas. Ela aglutina eritrócitos nativos de coelho, porco e em menor intensidade de rato e humanos A, B, AB e sua atividade hemaglutinante independe de cátions divalentes, mas é diminuída por agentes desnaturantes e redutores. A lectina de Arundo donax L. tem efeito citotóxico para células transformadas da linhagem HT-29, efeito inseticida para Dysdercus peruvianus e nematicida para Meloidogyne incognita. A ADL causou decréscimo na germinabilidade e retardo na germinabilidade dos diásporos de Lactuca sativa L. e também apresentou significativo efeito mitogênico e quimiotáxico. A ADL produziu sinais de toxicidade por via intraperitoneal em camundongos na dose de 300 mg/Kg e com a dose de 800 mg/Kg, 100 % dos camundongos foram a óbito, após 30 horas de sua administração. Sete isoformas da ADL foram separadas por PAGE preparativa. Das seis estudadas todas são heterotriméricas com massas moleculares relativas de suas cadeias polipeptídicas de aproximadamente 8,5, 18,9 e 13,1 kDa, totalizando 40,6 kDa. As isoformas demostraram ser estáveis face a vários fatores químicos e físico-químicos como a ADL, mas apresentaram desiguais intensidades na aglutinação de eritrócitos e inibição por carboidratos. A isoforma ADL-III é rica em resíduos de Glu/Gln, Gly, Asp/Asn e ainda Cys e as cadeias a e b possuem resíduos de triptofano na porção N-terminal. A ADL-III apresentou atividade mitogênica significativa. A ADL foi capaz de ligar-se in vitro a células transformadas das linhagens T-47D, HT-29 e T-24. Por técnicas imunohistoquímicas, a ADL foi detectada na parede celular das fibras e em algumas poucas células do parênquima cortical do rizoma. / Some characteristics like absence of calcium oxalate crystals, secretory structures and trychomes and the richness of fibers that form strata localized immediately under the epiderms and limiting the cortical parenchyma or forming bundle sheaths, subsidize the authenticity of these rhizomes. Besides the rhizomes contain amide, coumarins, alkaloids, flavonoids and nonhemolytic saponins. A lectin (ADL) specific to GlcNac and its oligosaccharides was isolated and purified from Arundo donax L. (Poaceae) rhizomes by affinity chromatography on rabbit stroma-polyacrilamide column. The lectin was purified 12.15 times, the yield of proteins was 6.58 % and the recovery of the hemagglutinating activity was 80 %. The purified lectin is heterotrimeric and has a molecular mass of 32,900 approximately estimated by gel filtration and of 33,000 by SDS-PAGE in non denaturating and non reducing conditions. The purified lectin is rich in Glu/Gln, Asp/Asn, Gly and Cys, but it is not glycosilated. ADL is relatively heat- and pHstable and it is resistent to disgestion by proteolytic enzymes. It agglutinates native rabbit, pig erythrocytes and with lower intensity rat and human A, B and AB erythrocytes, and its hemagglutinating activity is independent of divalent cations, but it is decreased by denaturating and reducing agents. Arundo donax L. lectin displays cytotoxic effect on Dysdercus peruvianus and nematicide activity againt Meloidogyne incognita. ADL decreases the germinability and delays the mean time for germinability of Lactuca sativa L. diasphores and also shows significant mitogenic and chemotactic effect. The lectin induce toxicity signals in mice by intraperitoneal injection with the dose of 300 mg/kg and 800 mg/kg caused 100 % death of the animals, 30 h after its administration. Seven isoforms of ADL were separated by preparative PAGE. The six isoforms studied are heterotrimeric, with polypeptide chains of molecular mass of 8.5, 13.1 and 18.9 kDa determined by mass spectroscophy and with 40.6 kDa of lectin molecular mass. The isoforms showed stability when subjected to the action of distinct chemical and physico-chemical factors as ADL showed. However, they exibited unequal intensity of erythrocyte agglutination and carbohydrate inhibition. ADL-III is rich in Glu/Gln, Gly and Asp/Asn and Cys residues, and its Nterminal a and b chains contain tryptophan residues. ADL-III showed significant mitogenic activity. ADL was able to bind to transformed cells from T-47D, HT-29 and T-24 lines in vitro. Immunohistochemical techniques allowed to localize ADL in the fiber cell walls and in some few cortical parenchyma cells of the rhizome.

Trifluralina (a, a, a,trifluoro-2,6-dinitro-N, N-dipropil-p-toluidina) (TFL) é um herbicida pré-emergente, incorporado ao solo que tem sido usado na agricultura desde a década de sessenta; ele é moderadamente persistente em vários tipos de solos do Brasil. O objetivo deste estudo foi isolar - de um solo agrícola contaminado por quatro décadas - e caracterizar bactérias resistentes a TFL, determinar suas habilidades em degradar a TFL, investigar a presença de gens degardadores que possam estar envolvidos na degradação da TFL e propor um método de ensino teórico prático sobre a biodegradação, para cursos de graduação. Oito bactérias foram isoladas, pela técnica de subculturas repetidas em meio contendo TFL como única fonte de carbono, e identificadas, pelo método bioquímico e seqüenciamento do rDNA 16S como Klebsiella oxytoca, Herbaspirillum seropedicae, 3 strains of Bacillus simplex, 2 de Pseudomonas montelli e uma outra Pseudomonas sp. Uma terceira bactéria (iaolado #9), não identificada, que crescia ao redor de cristais de TFL em meio sólido, foi isolada; esta é uma técnica nova que poderá ser útil no isolamento de bactérias que são resistentes a outros compostos pouco solúveis em água. Todas as bactérias isoladas foram submetidas ao teste de biodegradação, em um meio contendo sais minerais, 0,1% succinato, 0,1 % de extrato de leveduras e 50 mg. L-1 de TFL Cinco bactérias reduziram a concentração de TFL no meio, após trinta dias de incubação: Klebsiella oxytoca (24,6 %), Herbaspirillum seropedicae (16,4 %), Bacillus simplex 2 (25.0 %), Bacillus simplex 3 (16.0 %) e isolado 9 (21.0 %). Uma bactéria conhecida como degradadora da TFL, Brevundimonas diminuta (NCIMB 10329) degradou a TFL, neste meio, de maneira semelhantes ao das bactérias isoladas. Os DNAs extraídos das quatro bactérias identificadas degradadoras da TFL, foram sondados para os gens catbólicos ndoB, todC, xylX, catA e xylE, os quais codificam as enzimas naftaleno 1,2-dioxigenase, toluene dioxigenase, toluate 1,2-dioxigenase, catecol 1,2-dioxigenase e catecol 2,3-dioxigenase, respectivamente. Técnicas de PCR e hibridização demonstraram que os DNAs de todas estas quatro bactérias foram fortemente hibridizadas para o gen ndoB, contudo, usando a técnica de ¨zonas claras¨, observou-se que nenhuma delas degradou naftaleno. Estes resultados indicam a presença de gens dioxigenases, nestas bactérias degradadoras da TFL, que poderiam estar transformando a TFL como substrato principal, ou como cometabolismo. O conhecimento sobre processos de biodegradação é necessário para os graduados dos cursos de agronomia, química, biologia, tecnologia de alimentos, etc. Neste trabalho, também, propomos o estudo teórico e prático da compostagem o qual estimula o interesse dos estudantes em aprender sobre o metabolismo envolvido neste, e em outros, processos biotecnológicos.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2009. / Made available in DSpace on 2012-10-24T07:42:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 269345.pdf: 1016686 bytes, checksum: e00c851b0a2d66deefb21faa76a5870f (MD5) / O malation e um pesticida organofosforado (OF) e sua toxicidade depende da sua bioativacao a malaoxon. O envenenamento por malation tem sido tratado com um antagonista do receptor colinergico (atropina) e com oximas (principalmente pralidoxima) em uma tentativa de reativar a acetilcolinesterase (AChE) inibida pelo OF. Contudo, o tratamento com pralidoxima nao tem sido eficiente para reativar a AChE inibida pelo malaoxon e o seu uso rotineiro tem sido questionado. Um dos objetivos deste estudo foi avaliar a potencia in vitro de oximas padrao e de oximas recentemente sintetizadas em reativar a AChE derivada do sobrenadante de cerebro de camundongos, apos inibicao por malaoxon. O malaoxon exibiu um efeito inibitorio dependente da concentracao contra a AChE cerebral de camundongo (IC50 = 3.18 ÊM). A pralidoxima demonstrou um significativo, porem modesto efeito de reativacao da AChE inibida pelo malaoxon (30% de reativacao na concentracao de 600 ÊM). Embora as oximas HI-6 e metoxima exibiram efeitos de reativacao similares quando comparadas com a pralidoxima, as oximas obidoxima e trimedoxima mostraram maior eficacia de reativacao (em torno de 70% de reativacao na concentracao de 600 ÊM). As oximas recentemente desenvolvidas K074 e K075 demonstraram maior efeito de reativacao (em torno de 55% de reativacao na concentracao de 600 ÊM) quando comparadas com a pralidoxima. Os resultados deste estudo mostram que as oximas padrao obidoxima e trimedoxima e as oximas ineditas K074 e K075 apresentam efeitos de reativacao superior da enzima AChE de cerebro de camundongos inibida pelo malaoxon sob condicoes in vitro quando comparadas com a pralidoxima. O segundo objetivo do trabalho foi avaliar o potencial efeito benefico das oximas K074, K075 e trimedoxima na reversao de efeitos deleterios induzidos pela exposicao ao malation na atividade da enzima AChE e em alguns parametros de estresse oxidativo em cortex pre-frontal e hipocampo de camundongos adultos. A administracao de malation (na dose de 1,25 g/kg, s.c.) inibiu significativamente (em torno de 50 %) a atividade da enzima AChE no cortex pre-frontal dos animais 24 h apos a administracao. A oxima padrao pralidoxima (. da DL50 e em combinacao com a atropina) diminuiu significativamente este efeito. A oxima inedita K074 (. da DL50 e em combinacao com a atropina) apresentou baixo efeito de reativacao da AChE, enquanto as outras oximas estudadas (trimedoxima e K075; . da DL50 e em combinacao com a atropina) nao tiveram efeitos reativadores. A atividade da AChE ix hipocampal nao foi inibida apos exposicao aguda ao malation. A exposicao ao malation causou uma diminuicao significativa na atividade glutationa peroxidase e glutationa redutase no cortex pre-frontal doa animais, mas os niveis de glutationa nao foram afetados nesta mesma estrutura. Estes resultados demonstraram que a oxima padrao pralidoxima foi o melhor reativador da AChE inibida pelo malation, enquanto que as oximas ineditas K074 e K075 e a oxima padrao trimedoxima apresentaram somente modesto ou nenhum efeito de reativacao. Esta aparente contradicao entre dados in vitro e in vivo esta provavelmente relacionada com as baixas doses das oximas K074, K075 e trimedoxima usadas no experimento in vivo.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T06:05:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 289217.pdf: 3465355 bytes, checksum: b98a68822c4c226608b389493784c205 (MD5) / A aterosclerose é uma doença inflamatória crônica caracterizada pelo acúmulo de lipídios e elementos celulares nas artérias de calibre médio e grande porte, sendo que a modificação oxidativa da lipoproteína de baixa densidade (LDL) desempenha um papel importante na patogênese dessa condição. Os compostos orgânicos de selênio estão recebendo grande atenção da comunidade científica devido as suas propriedades benéficas destes compostos em patologias associadas ao estresse oxidativo. Neste contexto, nosso objetivo foi avaliar as propriedades toxicológicas e antiaterogênicas de compostos orgânicos de selênio em modelos experimentais in vivo e in vitro. Inicialmente, avaliamos os efeitos da administração aguda do disseleneto de difenila (PhSe)2 sobre parâmetros toxicológicos em coelhos. O tratamento de coelhos com 5 µmol/kg/dia não induziu toxicidade, no entanto, quando os animais foram tratados com 50 µmol/kg, sinais leves de toxicidade foram observados, e o tratamento com maior dose utilizada (500 µmol/kg) causou mortalidade em 85% dos animais, indicando intensa toxicidade. Assim estes resultados indicam que os efeitos toxicológicos da exposição aguda ao (PhSe)2 em coelhos é dependente da dose. Considerando o envolvimento da LDL oxidada (LDLox) na patogênese da aterosclerose, investigamos o efeito protetor do (PhSe)2 sobre danos citotóxicos induzidos pela exposição de macrófagos murinos J774 à LDLox. O pré-tratamento com (PhSe)2 reduziu os efeitos citotóxicos desencadeados pela LDLox incluindo a geração de ROS, distúrbio da homeostase do .NO, ativação de metaloproteinases de matriz, formação de células espumosas e disfunção mitocondrial em macrófagos in vitro. Além disso, os efeitos da sinalização redox do (PhSe)2 apresentados neste estudo, foram acompanhados por uma regulação da atividade de ligação do NF-.B. Considerando o efeito promissor de compostos orgânicos de selênio como moléculas antiaterogênicas, na última parte deste estudo, avaliamos o efeito de diaril disselenetos substituídos, p-metoxi-difenil disseleneto (DM) e p-cloro-difenil disseleneto (DC), na oxidação da LDL induzida por Cu2+. Ambos os compostos causaram inibição dose-dependente na oxidação de soro humano e de LDL isolada. A parte proteica da LDL humana isolada também foi protegida contra a oxidação induzida por Cu2+. Além disso, o DM e DC eficientemente diminuíram a formação de células espumosas induzidas por LDLox em macrófagos J774. O potencial efeito antiaterogênico destes compostos foi relacionado à sua atividade mimética a GPx e sua propriedade de atuar como substrato para TrxR mamífera, duas importantes vias envolvidas na decomposição de peróxidos. Tomados em conjunto, os resultados deste trabalho sugerem um novo papel para os compostos orgânicos de selênio como potenciais agentes antiateroscleróticos.