Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:42:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 321928.pdf: 2095743 bytes, checksum: 8044a3c0eb4a0fdf00d211952041505f (MD5) Previous issue date: 2013 / O malation é um composto tóxico pertencente à classe dos pesticidas organofosforados (OF) que tem como mecanismo primário de ação inibir a enzima acetilcolinesterase (AChE), levando à clássica síndrome colinérgica. No entanto, estudos vêm demonstrando que a neurotoxicidade decorrente da exposição crônica a esta classe de pesticidas pode ocorrer sem sintomas colinérgicos antecedentes e parece não depender da inibição da enzima AChE. Quanto ao tratamento da intoxicação aguda por esses compostos, a eficácia das oximas clinicamente disponíveis (por exemplo, pralidoxima), utilizadas para reativar a AChE inibida, tem sido questionada. Dessa forma, o primeiro objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia da pralidoxima e de uma oxima experimental (K074) na reativação da AChE após exposição aguda ao malation, bem como na prevenção de possíveis alterações bioquímicas relacionadas com o estresse oxidativo induzidas pelo malation, utilizando camundongos Swiss. O malation (1,25 g/kg, s.c.) induziu uma diminuição significativa da atividade da AChE no córtex pré-frontal, hipocampo e sangue dos animais 24 h após uma única injeção. Após os tratamentos com as oximas (1/4 da DL50, i.m., 6 h após a exposição ao malation), foi observado que a pralidoxima (66 mg/kg) foi capaz de reverter significativamente a inibição da AChE sanguínea, enquanto que a oxima K074 (5,8 mg/kg) não teve efeitos de reativação em relação à enzima sanguínea. Interessantemente, ambas as oximas testadas foram incapazes de reativar a AChE inibida pelo malation no córtex pré-frontal e no hipocampo após a injeção intramuscular ou intracerebroventricular (1/4 de DL50, 6 h após a exposição ao malation). Os parâmetros bioquímicos relacionados com o estresse oxidativo (atividade das enzimas glutationa peroxidase, glutationa redutase e catalase, bem como os níveis de peroxidação lipídica) não foram afetados nos animais tratados com malation, oximas ou atropina. No entanto, quando a pralidoxima e K074 foram administradas por via intramuscular 6 h após a exposição ao malation, estas oximas foram capazes de aumentar a atividade das enzimas antioxidantes no córtex pré-frontal e hipocampo. Estes resultados indicam que as atividades da AChE periférica e central não estão necessariamente correlacionadas após o tratamento com malation/oximas, além disso, considerando que os tratamentos disponíveis na clínica para a intoxicação com malation não parecem eficazes, este estudo reforça a necessidade de busca por novos reativadores da AChE capazes de reativar eficientemente a enzima sanguínea e cerebral após o envenenamento com malation. O próximo objetivo do trabalho foi investigar os efeitos de administrações repetidas (ao longo de um período de 15 dias) com doses de malation que não causam toxicidade colinérgica, sobre o desempenho cognitivo (relacionado à memória), bem como alterações bioquímicas no hipocampo de camundongos adultos. Os tratamentos com malation (30 e 100 mg/kg, pela via subcutânea) não afetaram o peso corporal dos animais durante o período experimental, além disso, não foram observados sinais evidentes de toxicidade colinérgica durante todo o período de tratamento. Apenas a dose de 100 mg/kg de malation foi capaz de inibir significativamente a atividade da AChE hipocampal após um período de tratamento de 15 dias; no entanto, esta inibição não produziu sinais aparentes de toxicidade. Ao final do tratamento de 15 dias, os animais expostos ao malation (30 e 100 mg/kg) mostraram uma diminuição significativa na capacidade de memória espacial, a qual foi acompanhada por uma diminuição da atividade do complexo I mitocondrial, aumento da expressão das proteínas pró-apoptóticas Bax e Bak, bem como ativação astroglial no hipocampo. Por outro lado, os níveis de sinaptofisina (marcador de sinapses), de colina acetiltransferase (marcador de neurônios colinérgicos) e de aquaporina4 (proteína associada com disfunção da barreira hematoencefálica) não foram alterados pelo tratamento com malation. O déficit no teste de memória espacial de curto prazo causado pela exposição dos animais a 30 mg/kg de malation, dose que não causou inibição da atividade da AChE hipocampal, indica a possibilidade de acontecimentos não colinérgicos relacionados com a modulação da performance cognitiva nestes animais. A partir dos resultados obtidos neste trabalho, sugere-se que o mecanismo envolvido no déficit de memória induzido pela exposição ao malation pode ser mediado, pelo menos em parte, por uma interação sinérgica entre disfunção mitocondrial e processos neuroinflamatórios. Finalmente, a partir de estudos in vitro com cultura primária de neurônios corticais, investigou-se os possíveis mecanismos que precedem a morte celular induzida pela exposição prolongada ao malaoxon. O tratamento com malaoxon 100 µM foi capaz de causar significativa morte das células corticais no dia in vitro 6 (6DIV) e significativa inibição da atividade da AChE nos tempos que precederam a morte celular (0,5 h; 24 h e 48 h). Além disso, observou-se um aumento significativo da produção de espécies reativas de oxigênio e uma diminuição do potencial de membrana mitocondrial nos primeiros 60 min de exposição das células a 100 µM de malaoxon. O pré-tratamento das culturas com o antioxidante ácido ascórbico foi capaz de proteger parcialmente, embora significativamente, da morte celular induzida pela exposição prolongada ao malaoxon. Os nossos resultados indicam que a morte das células neuronais corticais expostas ao malaoxon pode estar associada com indução de estresse oxidativo. No entanto, estudos adicionais são necessários para elucidar os mecanismos envolvidos com a toxicidade do malaoxon neste tipo de cultura, bem como a participação da AChE nestes eventos <br> / The organophosphorus (OP) pesticide malathion is a highly neurotoxic compound and its toxicity is primarily caused by the inhibition of acetylcholinesterase (AChE), leading to cholinergic syndrome. However, studies have shown that the neurotoxicity resulting from OP chronic exposure can occur without previous cholinergic symptoms and they do not appear to be dependent on AChE inhibition. Regarding the treatment of OP acute poisoning, the clinical experience with the available oximes (e.g. pralidoxime) is disappointing and their routine use has been questioned. Thus, the first aim of this study was to investigate the potency of pralidoxime and K074 in reactivating AChE after acute exposure to malathion, as well as in preventing malathion-induced changes in oxidative-stress related parameters in mice. Malathion (1.25 g/kg, s.c.) induced a significant decrease in cortico-cerebral, hippocampal and blood AChE activities at 24 h after exposure. Oxime treatments (1/4 of LD50, i.m., 6 h after malathion poisoning) showed that pralidoxime (66 mg/kg) significantly reversed malathion-induced blood AChE inhibition, although no significant effects were observed after K074 treatment (5,8 mg/kg). Interestingly, both oximes tested were unable to reactivate the cortico-cerebral and hippocampal enzymes after intramuscular or intracerebroventricular injection (1/4 of LD50, 6 h after malathion poisoning). Biochemical parameters related to oxidative stress (cerebro-cortical and hippocampal glutathione peroxidase, glutathione reductase and catalase activities, as well as lipid peroxidation) were not affected in animals treated with malathion, oximes or atropine alone. However, pralidoxime and K074, administered intramuscularly 6 h after malathion poisoning, were able to increase the endogenous activities of these antioxidant enzymes in the prefrontal cortex and hippocampus. These results indicate that peripheral and central AChE activities are not necessarily correlated after the treatment of OP compounds and/or oximes. In addition, considering that the available treatments to malathion poisoning appear to be ineffective, the present study reinforce the need to search for potential new AChE reactivators able to efficiently reactivate the brain and blood AChEs after malathion poisoning. The next aim of this study was to investigate the effects of repeated subtoxic doses of malathion (over a 15-days period) on cognitive performance as well as biochemical changes in the hippocampus of adult mice. The treatments with malathion (30 and 100 mg/kg, subcutaneously) did not affect the body weight of animals throughout the experimental period, furthermore, no evident signs of cholinergic toxicity were observed throughout the treatment. The highest dose of malathion (100 mg/kg) was associated with significant AChE inhibition in the hippocampus after a 15-days treatment period, however, this inhibition did not produce signs of cholinergic toxicity. At the end of treatments, malathion-exposed animals (30 and 100 mg/kg) showed a significant impairment on learning-memory ability which was paralleled by a significant decrease in the mitochondrial complex I activity, increase in the levels of proapoptotic proteins (Bax and Bak) and astroglial activation (increase in the level of GFAP), in the hippocampus. On the other hand, the levels of synaptophysin (a specific synaptic marker), choline acetyltransferase (a marker of cholinergic neurons) and aquaporin 4 (a protein related with blood-brain barrier dysfunction), were not affected by the treatment with malathion. The short-term spacial memory deficit observed after the exposure to 30 mg/kg dose of malathion, that caused no hippocampal AChE inhibition, indicates the possibility that cholinergic events are not related with the modulation of the cognitive performance in these animals. From the results obtained in this study, we suggest that the cholinergic system may not be involved in the malathion-induced neurotoxic effects, in addition, we suggest that the mechanism involved in the spacial memory deficit induced by repeated malathion exposure can be mediated, at least in part, by a synergistic interaction between mitochondrial dysfunction and neuroinflammatory processes. Finally, we investigated the possible molecular events that precede malaoxon-induced cell death in cultured neuronal cortical cells. The treatment with 100 µM of malaoxon was able to cause significant death of cortical cells on day in vitro 6 (DIV6) and significant AChE inhibition in the times preceding the cell death (0.5 h, 24 h and 48 h). In addition, there was a significant increase in the production of reactive oxygen species and a decrease in mitochondrial membrane potential in the cells exposed to malaoxon. Pretreatment with the antioxidant ascorbic acid displayed a protective effect against malaoxon-induced neurotoxicity in the cortical neuronal cells. Our data indicate that the neuronal cortical cell death induced by malaoxon may be associated with induction of oxidative stress. However, additional studies are needed to elucidate the mechanisms involved in the malaoxon toxicity in these cells, as well as the involvement of AChE in these events.

OLIVEIRA, A. S. Purificação e caracterização de inibidores de tripsina de sementes de Pithecellobium dumosun e seus efeitos. 2007. 222 f. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Centro de Ciências - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2007. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-09-30T20:49:46Z No. of bitstreams: 1 2007_tese_asoliveira.pdf: 3337963 bytes, checksum: d6b49c9e4081b7dc7967d8be3fb8d65b (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-10-30T21:53:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_tese_asoliveira.pdf: 3337963 bytes, checksum: d6b49c9e4081b7dc7967d8be3fb8d65b (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-30T21:53:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_tese_asoliveira.pdf: 3337963 bytes, checksum: d6b49c9e4081b7dc7967d8be3fb8d65b (MD5) Previous issue date: 2007 / Five Kunitz-type trypsin inhibitors (JB1, JB2, JB3-1, JB3-2 and JB4) were purified from Pithecellobium dumosum seeds, a tree of the sub-family Mimosoideae, by TCA precipitation, affinity chromatography on immobilized trypsin-Sepharose and reverse phase HPLC using Vydac C-18 column. The five inhibitors had Mr between 18 and 20 kDa with a single polypeptide chain as determined by SDS-PAGE with and without reduction. JB1, JB3-1 and JB3-2 had Mr of 19.70, 19.69 and 19.69 kDa, respectively, by MALDI-TOF. JB2 and JB4 had Mr of 18.08 and 20.85, respectively, by SDS-PAGE. The N-terminal sequences of JB1, JB3-1 and JB3-2 showed identity with others Kunitz-type inhibitors. The five inhibitors were stable over a wide range of temperature and pH. The inhibition of trypsin by JB1, JB2 and JB4 was competitive. JB1, JB2, JB3-1 and JB3-2 showed Ki values of 3.56 x 10-8 M, 1.65 x 10-8 M, 4.20 x 10-8 M, 2.88 x 10-8 M, respectively, against bovine trypsin. In comparison with others inhibitors JB4, with Ki of 5.70 x 10-10 M, showed a high affinity toward trypsin. Among the inhibitors purified only JB4 inhibited chymotrypsin activity. The activities of elastase and bromelain were not inhibited for these inhibitors. The inhibition of JB1, JB2, JB3-1 and JB3-2 on papain varied between 32.93 to 48.82% of inhibition and was indicative of its bifunctionality with exception of JB4 that inhibited this activity in 9.9%. The papain inhibition by JB1 and JB2 were noncompetitive type and the Kivalues were 7.6 x 10-7 and 5.1 x 10-7 M, respectively. In vitro assays against digestive proteinases from Lepidoptera, Diptera and Coleoptera pests were carried out. These inhibitors were effective towards trypsin-like digestive enzymes of the insect in different degrees. The digestive enzymes from Zabrotes subfasciatus and Ceratitis capitata were inhibited by JB1 in 68.87 and 65.53% respectively, and Callosobruchus maculatus, Alabama argillaceae and Plodia intepunctella enzymes were inhibited in the range of 29.18 to 44.35%. Digestive enzymes from Z. subfasciatus, C. maculatus and C. capitata were inhibited by JB2 in the range of 70.04 to 74.54%, and the enzymes of A. argillaceae and P. intepunctella were suppressed in 13.58 and 48.67%, respectively. Trypsin-like activities of larval from Z. subfasciatus were suppressed in 67.33 and 56.93% by JB3-1 and JB3-2, respectively, and the activities of C. maculatus, A. argillaceae, P. intepunctella and C. capitata were inhibited by these inhibitors in the range of 5.17-49.00%. JB4 inhibited around 54.53 to 66.15% the digestive enzymes of C. maculatus, Z. subfasciatus and A. argillaceae and the digestive enzymes from P. intepunctella and C. capitata larvae in 8.97% and 37.47%, respectively. The inhibition of trypsin-like and papain-like proteinases of several insects suggested that these inhibitors may affect the growth and survival of these insect pests when incorporated into artificial diet and their bifunctionality are indicative that these inhibitors could be strong candidates to plant management programs cross transgenia. / Cinco inibidores de tripsina da família Kunitz (JB1, JB2, JB3-1, JB3-2 e JB4) foram purificados de sementes de Pithecellobium dumosum, uma árvore da subfamília Mimosoideae, por precipitação com ácido tricloroácetico (TCA), cromatografia de afinidade sobre tripsina imobilizada em Sepharose e coluna de fase reversa em sistema de CLAE. Os cinco inibidores possuem massa molecular entre 18 e 20 kDa formados por uma cadeia polipeptídica como determinado por SDS-PAGE na presença ou ausência de -mercaptoetanol. JB1, JB3-1 e JB3-2 têm massas moleculares de 19,70, 19,69 e 19,69 kDa, respectivamente, por MALDI-TOF. JB2 e JB4 têm massa molecular de 18,08 e 20,85 kDa, respectivamente. A seqüência N-terminal de JB1, JB3-1 e JB3-2 mostrou identidade com outros inibidores da família Kunitz. Os cinco inibidores foram estáveis às variações de temperatura e pH. A inibição da tripsina por JB1, JB2 e JB4 foi do tipo competitivo. JB1, JB2, JB3-1 e JB3-2 tiveram Kis de 3,56 x 10-8 M, 1,65 x 10-8 M, 4,20 x10-8 M, 2,88 x 10-8 M, respectivamente para a tripsina bovina. Em comparação com os outros inibidores JB4, com Ki de 5,70 x 10-10 M, apresentou maior afinidade para tripsina. Entre os inibidores purificados apenas JB4 inibiu moderadamente a atividade da quimotripsina. A atividade da elastase e bromelaína não foi inibida efetivamente por esses inibidores. A inibição de JB1, JB2, JB3-1 e JB3-2 sobre a papaína variaram entre 32,93 a 48,82% e foi indicativo de sua bifuncionalidade, com exceção de JB4 que inibiu fracamente essa atividade (9,93% de inibição). A inibição da papaína por JB1 e JB2 foi do tipo não competitiva e os valores de Ki foram de 7,6 x 10-7 e 5,1 x 10-7 M, respectivamente. Ensaios in vitro sobre as proteinases digestórias de Lepidoptera, Diptera e Coleoptera foram feitos. Esses inibidores foram efetivos para enzimas digestórias semelhantes à tripsina desses insetos em diferentes graus. As enzimas digestivas de Zabrotes subfasciatus e Ceratitis capitata foram inibidas por JB1 em 68,87 e 65,53%, respectivamente, e as enzimas de Callosobruchus maculatus, Alabama argillaceae e Plodia interpunctella foram inibidas entre 29,18 e 44,35%. Enzimas digestórias de Z. subfasciatus, C. maculatus e C. capitata foram inibidas por JB2 entre 70,04 e 74,54% e as enzimas de larvas de A argillaceae e P. interpunctella foram suprimidas em 13,58 e 48,67%, respectivamente. A atividade semelhante à tripsina de larvas de Z. subfasciatus foi suprimida em 67,33 e 56,93% por JB3-1 e JB3-2, respectivamente, e a atividade de C. maculatus, A argillaceae, P. interpunctella e C. capitata foram suprimidas por esses inibidores entre 5,17 e 49,00%. JB4 inibiu entre 54,53 a 66,15 % as enzimas digestivas de C. maculatus, Z. subfasciatus e A argillaceae e inibiu as enzimas digestivas de larvas de P. intepunctella e C. capitata em 8,97 e 37,47%, respectivamente. A inibição de proteinases semelhantes à tripsina e à papaína presentes no intestino de vários insetos sugere que esses inibidores possam afetar o crescimento e sobrevivência desses insetos pragas quando incorporados em sementes artificiais e esta bifuncionalidade é indicativo de que estes inibidores possam ser fortes candidatos para os programas de melhoramento de plantas via transgenia.

SOBREIRA, A. C. M. Estudo da expressão dos genes das bombas de prótons (V-ATPase e V-PPase) e dos contra-transportadores vacuolares (NHX) de Vigna unguiculata (L.) Walp submetidos a estresses abióticos. 2009. 118 f. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2009. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-10-03T19:03:30Z No. of bitstreams: 1 2009_tese_acmsobreira.pdf: 1938746 bytes, checksum: 064fea08dd8578e2f6b67de140140d86 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-11-11T23:03:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_tese_acmsobreira.pdf: 1938746 bytes, checksum: 064fea08dd8578e2f6b67de140140d86 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-11T23:03:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_tese_acmsobreira.pdf: 1938746 bytes, checksum: 064fea08dd8578e2f6b67de140140d86 (MD5) Previous issue date: 2009 / The acummulation of Na+ in the central vacuole represents an important mechanism for plants to cope with salt stress. The vacuolar content and the regulations of their volumes in vegetable cells depend on the activity of transporters and channels located in the tonoplast (vacuolar membrane). The vacuolar membrane possesses two different proton pumps (V-ATPase and V-PPase), aquoporine, and systems of primary and secondary transporters like the vacuolar Na+/H+ antiporter (NHX). The two transmembrane proton pumps work as systems of primary transport in vegetable cells and both enzymes generate a difference of proton electrochemical potential through the vacuolar membrane which can provide energy to antiport system, H+/substrate. The vacuolar Na+/H+ antiporter, uses the electrochemical gradient generated by the primary transporters to pump Na+ ions inward the vacuole. In the present work were first determined the Na+ and K+ content followed by the gene expression of the vacuolar proton pumps (VHA-A, VHA-E and HVP) and the vacuolar antiporters (NHX2 and NHX6) from seedlings of Vigna unguiculata subjected to salt and osmotic stress. The seedlings were grown on nutritive medium in the absence of NaCl and PEG (control condition), presence of NaCl 100 mM (salt stress) or in the presence of PEG 6000 200,67g.L-1 (osmotic stress). The ion Na+ content essay showed an increase in all plant tissues when submitted to salt stress, while the K+ ions decreased in the same condition. The gene expression of the vacuolar proton pumps and the Na+ antiporter from roots and leaves showed an increase in all studied conditions being more expressive to V-PPase, NHX2 and NHX6 suggesting a coordinated regulation of these genes. The results from leaves showed that VHA-A and VHA-E were increased, while the others genes tend to remain constant in the osmotic stress. These results suggest that salt and osmotic stress induced a differential regulation of all studied genes, being the vacuolar Na+ antiporters an important part on keep the cellular homeostasis when the plants were submitted to salt stress. / O acúmulo de Na+ no vacúolo central representa um importante mecanismo de defesa de plantas contra o estresse salino. A regulação dos volumes e conteúdos dos vacúolos de células vegetais depende da atividade de transportadores e canais localizados no tonoplasto (membrana vacuolar). A membrana vacuolar possui duas distintas bombas de prótons (V-ATPase e V-PPase), aquoporinas e vários sistemas de transportes ativos e/ou secundários, como os contra-transportadores Na+/H+ vacuolares. As duas bombas de prótons transmembranares funcionam como sistemas de transporte primário nas células vegetais e ambas as enzimas geram uma diferença de potencial eletroquímico de prótons através da membrana vacuolar. Os contra-transportadores vacuolares Na+/H+ utilizam o gradiente eletroquímico de prótons gerado pelos transportadores primários para transportar Na+ para dentro do vacúolo. No presente trabalho inicialmente foram determinados os conteúdos de íons Na+ e K+ em raízes, hipocótilos e folhas e em seguida a análise da expressão dos genes das bombas de prótons (VHA-A, VHA-E e HVP) e dos contra-transportadores vacuolares (NHX2 e NHX6) em plântulas de Vigna unguiculata (L.) Walp cv. Vita 5 submetidas a estresse salino e osmótico. As plântulas foram crescidas em meio nutritivo na ausência de NaCl e PEG (controle), na presença de 100 mM de NaCl (estresse salino) ou na presença de 200,67 g/L de PEG (estresse osmótico). O conteúdo de íons Na+ aumentou em todos os tecidos da planta quando submetidos ao estresse salino (NaCl 100 mM) enquanto que o conteúdo de íons K+ diminuiu na mesma condição. A expressão dos genes das bombas de prótons e dos contra-transportadores vacuolares de folhas e de raízes no estresse salino aumentou em todas as condições estudadas, porém o aumento foi mais expressivo para os genes da V-PPase, NHX2 e NHX6 sugerindo uma regulação paralela entre esses genes. Já no estresse osmótico, os resultados para as folhas mostraram que a expressão dos genes VHA-A e VHA-E aumentaram enquanto que os outros genes não sofreram mudanças significativas. Nossos resultados sugerem que o estresse salino e o estresse osmótico induziram uma regulação diferenciada em todos os genes sendo o contra-transportador Na+/H+ importante na homeostase celular quando as plantas foram submetidas ao estresse salino e osmótico.

OLIVEIRA, B. R. C. Efeito dos extratos hexânico e etanólico das folhas da gravioleira (Annona muricata L.) sobre a resposta imunológica de camundongos imunizados com ovalbumina. 2011. 95 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-10-20T20:33:32Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_brcoliveira.pdf: 1633150 bytes, checksum: db2169e402ea6234205dc67904ddf9e5 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-10-21T16:28:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_brcoliveira.pdf: 1633150 bytes, checksum: db2169e402ea6234205dc67904ddf9e5 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-21T16:28:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_brcoliveira.pdf: 1633150 bytes, checksum: db2169e402ea6234205dc67904ddf9e5 (MD5) Previous issue date: 2011 / O objetivo do presente trabalho foi avaliar o perfil fitoquímico, o potencial antioxidante in vitro, o efeito toxicológico e a atividade imunomoduladora in vivo dos extratos etanólico e hexânico de folhas da gravioleira (Annona muricata L.). Para tanto, foram utilizadas folhas de A. muricata L. colhidas no mês de agosto de 2009, no município de Trairi, Ceará. A identificação botânica da folha foi realizada no Herbário Prisco Bezerra da Universidade Federal do Ceará - UFC (voucher nº 49002). Para os testes in vivo, foram utilizados camundongos Swiss e ratos albinos Wistar, todos oriundos de colônias do Biotério Central/UFC. O protocolo experimental foi submetido e aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa com Animal da UFC (Nº 16/10). Os extratos etanólico (EE) e hexânico (EH) foram avaliados quanto a composição fitoquímica e suas atividades antioxidantes in vitro. O EE apresentou taninos, catequinas, saponinas e esteróides, enquanto o EH apresentou apenas esteróides. Quanto à capacidade antioxidante, o EE apresentou maior índice de varredura do radical DPPH que o EH. Para avaliação do efeito toxicológico, os EE e EH foram administrados por via oral em camundongos, diariamente nas concentrações de 10, 100 e 1000 mg kg-1 durante 30 dias consecutivos e parâmetros clínicos e comportamentais foram observados. Os extratos não provocaram sintomas tóxicos, nem alteraram os parâmetros bioquímicos nem o peso relativo dos órgãos. Para o estudo da atividade imunomoduladora, os animais foram imunizados com ovalbumina (OVA; 10 µg; via s.c.) nos dias 0, 14 e 28 dias antes dos tratamentos com ou sem adjuvante de Freund e tratados ou não por via oral com Levamisol® (10 mg kg-1) e os EE e EH (10 e 100 mg kg-1) por 42 dias consecutivos. Os títulos de anticorpos totais e IgE específicos anti-OVA foram quantificados por ELISA e PCA respectivamente. EE e EH revelaram uma cinética de síntese de anticorpos anti-OVA distinta. EE e EH estimularam a produção de anticorpos totais anti-OVA, contudo não modularam a síntese de IgE anti-OVA. Neste sentido, os extratos da folha da gravioleira são imunoestimulantes e não induziram toxicidade.

SOARES, C. E. A. Caracterização estrutural e potencial da galactomanana de Adenanthera pavonina L. como matéria-prima para produção de filmes comestíveis bioativos. 2009. 261 f. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2009. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-11-04T22:37:56Z No. of bitstreams: 1 2009_tese_ceasoares.pdf: 2754023 bytes, checksum: cbaa3472d8afb20346b1fe52025a22dc (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-11-11T22:41:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_tese_ceasoares.pdf: 2754023 bytes, checksum: cbaa3472d8afb20346b1fe52025a22dc (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-11T22:41:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_tese_ceasoares.pdf: 2754023 bytes, checksum: cbaa3472d8afb20346b1fe52025a22dc (MD5) Previous issue date: 2009 / In this thesis work, bioactive edible films were produced by using a galactomannan-starch-nisi blend. The galactomannan from the endosperm of seeds of Adenanthera pavonina was extracted and the fine structure of the gum endospermic was studied by NMR techniques. The reason M / G (= 1.46) was determined and its structure is in agreement with those reported in the literature for galactomannans. Study of IR data supported the NMR data obtained in this work. This galactomannan showed rheological behavior typical of seed gums. Gelatinized corn starch was used to produce blends with the galactomannans. In rheological tests, the force applied to the flow curves to the dispersion of gelatinized corn starch and mixtures of starch-galactomannan did not adequately characterize these polymer systems in solution. The oscillatory tests, in turn, were more sensitive to detect differences between the different systems evaluated allowing for a more appropriate characterization. The construction of the sorption isotherms was an interesting approach to characterize edible films produced from blends of systems of polysaccharides and starch-galactomannan-nisin blend. Significant differences were detected in these films and have to relate the behavior of water to the structural arrangement of various edible films produced. The humidity was as dependent on key parameters measured in films such as temperature and content of glycerol. The hysteresis phenomenon was shown to the edible films of starch galactomannan blend. Finally, the mathematical model of sorption described by the G.A.B. equation is suggested as one that best represents the data obtained in experimental conditions tested here. Thermal stability curves obtained by DSC for galactomannan and edible films which produced without and with the antimicrobial agent nisin, led to associate the data with those obtained by aw,corroborating, in thecase of the film containing nisin, the antimicrobial contributes to an increased hydration of the edible film. The presence of nisin in edible films produced with the starchgalactomannan blend and glycerol reduced the growth of L. monocitogenes, reducing the number of colony-forming units and acting as a barrier to contamination. The study of action of nisin through the test of the inhibition zone and the bioassay enabled characterization of the edible films through the using of good techniques. Finally, more studies should be conducted to determine whether additional changes in the composition or the structure of the films could modify the antimicrobial activity due to inactivation of nisin or altering its release. / Neste trabalho de Tese, filmes comestíveis bioativos foram produzidos a partir da blenda galactomanana-amido-nisina. A galactomanana do endosperma de sementes de Adenanthera pavonina foi extraída e sua estrutura fina foi estudada através de técnicas de RMN. Sua razão M/G (=1,46) determinada e sua estrutura estão de acordo com o que foi relatado na literatura para galactomananas. Estudo de IR corroboram os dados de RMN obtidos nesse trabalho. Essa galactomanana apresentou comportamento reológico típico de gomas de sementes. Amido de milho gelatinizado foi empregado para produzir blendas com a galactomanana. Nos testes reológicos, o esforço aplicado para curvas de escoamento da dispersão de amido de milho gelatinizado e das misturas de galactomanana-amido não permitiu caracterizar adequadamente esses sistemas de polímeros em solução. Os ensaios oscilatórios, por sua vez, foram mais sensíveis para detectar as diferenças entre os distintos sistemas avaliados permitindo uma caracterização de maneira mais adequada. A construção de isotermas de sorção foi numa abordagem interessante para caracterizar filmes comestíveis produzidos a partir dos sistemas de blendas de polissacarídeos e do complexo galactomanana-amido-nisina. Diferenças significativas foram detectadas nesses filmes e permitiram relacionar o comportamento da água ao arranjo estrutural dos diferentes filmes comestíveis produzidos. A umidade foi observada como dependente de importantes parâmetros avaliados nos filmes, tais como a temperatura e o conteúdo de glicerol. O fenômeno da histerese foi evidenciado para os filmes comestíveis da blenda galactomanana-amido. Finalmente, o modelo matemático de sorção descrito pela equação G.A.B. é sugerido como aquele que melhor representa os dados obtidos nas condições experimentais testadas aqui. As curvas de estabilidade térmica obtidas por DSCl para a galactomanana e os filmes comestíveis, produzidos sem o antimicrobiano e contendo a nisina, permitiram associar os dados de DSC aos obtidos pelas medias de aw, corroborando, no caso do filme contendo nisina, que o antimicrobiano contribui para uma maior hidratação do filme comestível. A presença de nisina nos filmes comestíveis produzidos com a blenda galactomanana-amido e glicerol reduziu o crescimento de L. monocitogenes, diminuindo o número de unidades formadoras de colônias e atuando como barreira para a contaminação. O estudo da ação da nisina através do teste do halo de inibição e do bioensaio permitiu caracterizar os filmes comestíveis através do uso de técnicas satisfatórias. Finalmente, mais estudos devem ser conduzidos a fim de determinar se mudanças adicionais na composição ou na estrutura dos filmes poderiam modificar a atividade antimicrobiana devido à inativação da nisina ou alterando sua liberação.

SANTOS, E. C. M. Filmes biodegradáveis de galactomanana: uso na conservação de frutos. 2012. 145 f. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-12-02T20:41:26Z No. of bitstreams: 1 2012_tese_ecmsantos.pdf: 1698489 bytes, checksum: 85d8aaee0918378b821f09ddbd340a35 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-01-15T18:38:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_tese_ecmsantos.pdf: 1698489 bytes, checksum: 85d8aaee0918378b821f09ddbd340a35 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-15T18:38:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_tese_ecmsantos.pdf: 1698489 bytes, checksum: 85d8aaee0918378b821f09ddbd340a35 (MD5) Previous issue date: 2012 / Os produtores de frutas estão se adaptando às mudanças nos padrões de consumo e exigência cada vez maior dos consumidores quanto à qualidade das frutas frescas disponíveis no mercado. A necessidade do mercado de atender à demanda dos centros de consumo, que estão cada vez mais distantes dos centros de produção, faz com que seja necessário, prolongar a vida útil das frutas sem que estas percam seus atributos de proteção à saúde, em consequência do processo de senescência natural. Pesquisas voltadas ao desenvolvimento de novas tecnologias para a redução das perdas pós-colheita são fundamentais para a economia nacional: além de minimizar as perdas, elevam a competitividade e procuram atender às qualidades de um mercado cada vez mais exigente. Filmes biodegradáveis e revestimentos comestíveis têm recebido atenção nos últimos anos, principalmente em função de seu potencial de aplicação para conservação de frutas. O objetivo deste trabalho foi estudar os filmes biodegradáveis preparados a partir de galactomanana de Caesalpinia pulcherrima e glicerol visando o seu emprego na constituição de embalagens para aumentar o tempo de prateleira de frutos. Inicialmente foi analisado o efeito das condições de preparação dos filmes nas propriedades de barreiras e foi observado que tanto temperatura quanto tempo de secagem causam um efeito positivo na permeabilidade ao vapor de água desses filmes, sendo escolhido, assim, a temperatura de 50 ºC e 12 horas como metodologia padrão de preparação dos filmes. Em seguida, foi avaliado a influência das concentrações de galactomanana e glicerol nas propriedades físico-químicas, foi verificado que as variáveis foram estatisticamente significativas, com destaque para o glicerol que apresentou influência positiva em todos os testes, ou seja, o aumento da concentração do glicerol proporciona um aumento na absorção de umidade, conteúdo de umidade, permeabilidade ao vapor de água e na permeabilidade ao oxigênio e ao dióxido de carbono, provavelmente devido ao seu caráter higroscópico. O aumento na concentração de galactomanana provoca uma diminuição na absorção de umidade, conteúdo de umidade e na permeabilidade ao oxigênio e dióxido de carbono. Foi observado que a temperatura e a umidade relativa apresentam uma grande influência nas propriedades de barreiras dos filmes, visto que o aumento dessas variáveis provoca um aumento na permeabilidade ao vapor de água e ao oxigênio. Para entender como os filmes se comportariam frente a esforços mecânicos, foi avaliado a influência das concentrações de galactomanana e de glicerol nas propriedades mecânicas e foi verificado que a espessura dos filmes aumenta com o aumento dessas variáveis e que o polissacarídeo é responsável por aumentar a elasticidade, a força de perfuração e ruptura dos filmes e que o plastificante tem influência positiva no alongamento e na força necessária para rasgar o filme. Após o conhecimento de todas as propriedades físico-químicas, de barreira e mecânicas e tendo as formulações necessárias para a finalidade proposta, a formulação GalGli de (0,4:1,0) (%, m:m), foi escolhida para testar o desempenho dos filmes como embalagem na manutenção do tempo de prateleira de maçãs fatiadas. Foi observado que as maçãs que receberam a proteção dos filmes apresentaram a menor taxa de respiração, perda de massa 10% menor e baixos índices de escurecimento e variação de cor quando comparadas com aquelas que não foram recobertas nas condições testadas. Dessa forma, os filmes estudados neste trabalho possuem grande potencial para aplicação no setor de embalagens e contribuir para aumentar o período de conservação de frutos.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Bioquímica / Made available in DSpace on 2012-10-26T11:25:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Epilepsia é uma doença crônica caracterizada por ataques epilépticos recorrentes. Cerca de 20-30% dos pacientes com epilepsia não obtém controle satisfatório das crises mesmo com uso adequado de fármacos, sendo estes candidatos à avaliação pré-cirúrgica. Em animais a administração de pilocarpina tem sido utilizada como modelo experimental de epilepsia, reproduzindo em roedores as principais características da epilepsia do lobo temporal mesial associada à esclerose do hipocampo (ELTM-EH) em seres humanos. Nesse modelo a administração de pilocarpina (Pilo-SE) induz o status epilepticus, onde as crises podem perdurar algumas horas (período agudo). A seguir o animal passa por um período com melhora e remissão espontânea das crises (período latente/4-44 dias). Finalmente, no período crônico (após 45 dias), os animais passam a apresentar crises espontâneas recorrentes (2-4 crises/animal/semana). Os neurônios da área epileptogênica apresentam peculiaridades em sua fisiologia que os tornam propensos ao surgimento de descargas assíncronas. Sistemas de sinalização inter e intracelular são fundamentais na modulação da atividade sináptica e podem estar envolvidos na fisiopatologia da epilepsia. Entre os alvos de importância podemos destacar: a) sistema glutamatérgico, via receptores NMDA, AMPA e transportadores gliais de glutamato (EAAT1 e 2); b) proteínas cinases como MAPKs (ERK, JNK, p38MAPK) e AKT. No presente estudo foi avaliado o perfil de fosforilação de MAPKs, AKT e da subunidade GluR1 do receptor AMPA (por western blotting) e o perfil de expressão dos transportadores de glutamato EAAT1 e 2 e da subunidade NR1 do receptor NMDA (por qRT-PCR) no hipocampo (Hip) e córtex (Ctx) de ratos adultos submetidos ao modelo da pilocarpina. As estruturas foram retiradas 1h, 3h, 12h (período agudo), 5 dias (período latente) e 50 dias (período crônico) após administração de Pilo-SE. Os principais resultados incluem: 1) aumento da fosforilação da subunidade GluR1 do receptor AMPA no sítio Ser831 no Hip e Ser845 no Ctx no período agudo e diminuição de seu conteúdo total no período latente; 2) ativação de ERK1 e p38MAPK em ambas as estruturas 1 e 12h após o início do Pilo-SE. A fosforilação da isoforma JNK2/3 (54kDa) diminuiu 3h após o início Pilo-SE e na fase crônica no Hip e Ctx. A fosforilação de AKT aumentou apenas no Hip durante o período latente. Em relação ao perfil de expressão da subunidade NR1 do receptor NMDA e os transportadores gliais de glutamato, encontramos uma diminuição na expressão do mRNA da subunidade NR1 e transportadores EAAT1 e 2 no Ctx, no período latente. No Hip a expressão do transportador EAAT2 diminuiu e a expressão da subunidade NR1 aumentou no período crônico. Os resultados demonstram alterações na transdução de sinal, expressão da subunidade NR1 e transportadores EAAT1 e 2 no Ctx e Hip após Pilo-SE de forma dependente da estrutura e tempo. Estas mudanças podem estar relacionadas com modificações neuronais e gliais na fisiologia intrínseca e rede epileptogênica na ELTM-EH.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Bioquímica / Made available in DSpace on 2012-10-26T12:16:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 303335.pdf: 7527707 bytes, checksum: 3905e085925065f9d8f7a15fc27cd6b8 (MD5) / O pré-condicionamento induzido por N-metil-D-aspartato (NMDA) é uma poderosa ferramenta terapêutica contra insultos neuronais posteriores, por diversas razões: administração periférica, interação específica com receptores NMDA (NMDAR) e pelo quadro de neuroproteção gerado. No entanto, pouco se sabe sobre os mecanismos moleculares envolvidos na geração do pré-condicionamento por NMDA no cérebro. A descoberta do mecanismo de sinalização celular gerado é crucial para delinear novas abordagens neuroprotetoras. Por essa razão, o objetivo deste trabalho foi investigar os possíveis mecanismos envolvidos no pré-condicionamento por NMDA utilizando uma abordagem proteômica para identificar proteínas expressas entre os camundongos pré-condicionados após 24h de administração de NMDA e após 1h e 72h de indução com NMDA (não protegidos). Ao grupo controle foi administrado solução salina (0,9% NaCl) e os demais grupos foram sacrificados após 1 hora, 24 horas ou 72 horas de administração com N-metil-D-aspartato (NMDA, 75mg/Kg de animal). O hipocampo de cada animal foi removido para extração das proteínas totais. Foram aplicados 250 mg / mL de proteína para análise em gel bidimensional (pI linear 3-10, gel SDS-PAGE 12,5%). Em seguida, os géis 2-DE foram corados com Coomassie Briliant Blue G-250 e analisados no programa Image Master 7.0 Platinum. A média de intensidade dos spots foram analisados (dados em % volume) entre os diferentes tempos de indução (1h, 24h e 72h). Foram encontradas seis proteínas com expressão diferencial significante com p <0,05 com base em ANOVA duas vias e Bonferroni pós-teste, sendo que quatro proteínas indicaram níveis de expressão elevada em 24h (proteína de choque térmico 70 kDa (HSP70), creatina cinase, aspatil-tRNA sintetase e proteína de ligação a fosfatidiletanolamina) e duas mostraram expressão diminuída (proteína de choque térmico 70 kDa (HSP70) e a proteína vacuolar V-ATPase). Além disso, a identificação e caracterização por espectometria de massa (MALDI-TOF) de 22 proteínas não alteradas mostrou-se útil, uma vez que essas proteínas desempenham funções celulares cruciais e também são necessárias para a geração da neuroproteção, entre essas se destacaram duas proteínas detectadas somente nos animais protegidos após 24h de administração com NMDA: subunidades alfa e beta da proteína de choque térmico 90 kDa (HSP90) e uma subunidade de HSP70. Todos esses resultados indicam que são necessárias diversas vias intracelulares associadas para mediar o pré-condicionamento e a neuroproteção. A identificação das proteínas relacionadas ao pré-condicionamento podem ajudar a elucidar os mecanismos celulares e moleculares de prevenção bem como na descoberta de novos alvos terapêutico por meio da determinação de uma janela de tempo mais efetiva nos tratamentos.

Trifluralina (a, a, a,trifluoro-2,6-dinitro-N, N-dipropil-p-toluidina) (TFL) é um herbicida pré-emergente, incorporado ao solo que tem sido usado na agricultura desde a década de sessenta; ele é moderadamente persistente em vários tipos de solos do Brasil. O objetivo deste estudo foi isolar - de um solo agrícola contaminado por quatro décadas - e caracterizar bactérias resistentes a TFL, determinar suas habilidades em degradar a TFL, investigar a presença de gens degardadores que possam estar envolvidos na degradação da TFL e propor um método de ensino teórico prático sobre a biodegradação, para cursos de graduação. Oito bactérias foram isoladas, pela técnica de subculturas repetidas em meio contendo TFL como única fonte de carbono, e identificadas, pelo método bioquímico e seqüenciamento do rDNA 16S como Klebsiella oxytoca, Herbaspirillum seropedicae, 3 strains of Bacillus simplex, 2 de Pseudomonas montelli e uma outra Pseudomonas sp. Uma terceira bactéria (iaolado #9), não identificada, que crescia ao redor de cristais de TFL em meio sólido, foi isolada; esta é uma técnica nova que poderá ser útil no isolamento de bactérias que são resistentes a outros compostos pouco solúveis em água. Todas as bactérias isoladas foram submetidas ao teste de biodegradação, em um meio contendo sais minerais, 0,1% succinato, 0,1 % de extrato de leveduras e 50 mg. L-1 de TFL Cinco bactérias reduziram a concentração de TFL no meio, após trinta dias de incubação: Klebsiella oxytoca (24,6 %), Herbaspirillum seropedicae (16,4 %), Bacillus simplex 2 (25.0 %), Bacillus simplex 3 (16.0 %) e isolado 9 (21.0 %). Uma bactéria conhecida como degradadora da TFL, Brevundimonas diminuta (NCIMB 10329) degradou a TFL, neste meio, de maneira semelhantes ao das bactérias isoladas. Os DNAs extraídos das quatro bactérias identificadas degradadoras da TFL, foram sondados para os gens catbólicos ndoB, todC, xylX, catA e xylE, os quais codificam as enzimas naftaleno 1,2-dioxigenase, toluene dioxigenase, toluate 1,2-dioxigenase, catecol 1,2-dioxigenase e catecol 2,3-dioxigenase, respectivamente. Técnicas de PCR e hibridização demonstraram que os DNAs de todas estas quatro bactérias foram fortemente hibridizadas para o gen ndoB, contudo, usando a técnica de ¨zonas claras¨, observou-se que nenhuma delas degradou naftaleno. Estes resultados indicam a presença de gens dioxigenases, nestas bactérias degradadoras da TFL, que poderiam estar transformando a TFL como substrato principal, ou como cometabolismo. O conhecimento sobre processos de biodegradação é necessário para os graduados dos cursos de agronomia, química, biologia, tecnologia de alimentos, etc. Neste trabalho, também, propomos o estudo teórico e prático da compostagem o qual estimula o interesse dos estudantes em aprender sobre o metabolismo envolvido neste, e em outros, processos biotecnológicos.

Algumas características como a falta de cristais de oxalato de cálcio, de estruturas secretoras e de tricomas, e a riqueza de fibras constituíndo estratos localizados imediatamente abaixo da epiderme e limitando o parênquima cortical, e formando bainhas vasculares, subsidia a autenticidade dos rizomas de Arundo donax. Além disto, os rizomas contem amido, cumarinas, alcalóides, flavonóides e saponinas não hemolíticas. Uma lectina (ADL) especifica para GlcNAc e seus derivados oligossacarídeos foi isolada e purificada dos rizomas de Arundo donax L. (Poaceae) por cromatografia de afinidade em matriz de estroma de coelhopoliacrilamida, resultando em uma purificação de 12,15 vezes, rendimento de 6,58% e recuperação de 80 % da atividade hemaglutinante. A lectina purificada é heterotrimérica com massa molecular aproximada de 32.900 estimada por gel de filtração e de 33.000 obtida por SDS-PAGE, em condições não desnaturantes e não redutoras. A lectina purificada possui elevado conteúdo de Glu/Gln, Asp/Asn, Gly e Cys, mas não é glicosilada. ADL é relativamente estável ao calor e ao pH, e resistente à digestão por enzimas proteolíticas. Ela aglutina eritrócitos nativos de coelho, porco e em menor intensidade de rato e humanos A, B, AB e sua atividade hemaglutinante independe de cátions divalentes, mas é diminuída por agentes desnaturantes e redutores. A lectina de Arundo donax L. tem efeito citotóxico para células transformadas da linhagem HT-29, efeito inseticida para Dysdercus peruvianus e nematicida para Meloidogyne incognita. A ADL causou decréscimo na germinabilidade e retardo na germinabilidade dos diásporos de Lactuca sativa L. e também apresentou significativo efeito mitogênico e quimiotáxico. A ADL produziu sinais de toxicidade por via intraperitoneal em camundongos na dose de 300 mg/Kg e com a dose de 800 mg/Kg, 100 % dos camundongos foram a óbito, após 30 horas de sua administração. Sete isoformas da ADL foram separadas por PAGE preparativa. Das seis estudadas todas são heterotriméricas com massas moleculares relativas de suas cadeias polipeptídicas de aproximadamente 8,5, 18,9 e 13,1 kDa, totalizando 40,6 kDa. As isoformas demostraram ser estáveis face a vários fatores químicos e físico-químicos como a ADL, mas apresentaram desiguais intensidades na aglutinação de eritrócitos e inibição por carboidratos. A isoforma ADL-III é rica em resíduos de Glu/Gln, Gly, Asp/Asn e ainda Cys e as cadeias a e b possuem resíduos de triptofano na porção N-terminal. A ADL-III apresentou atividade mitogênica significativa. A ADL foi capaz de ligar-se in vitro a células transformadas das linhagens T-47D, HT-29 e T-24. Por técnicas imunohistoquímicas, a ADL foi detectada na parede celular das fibras e em algumas poucas células do parênquima cortical do rizoma. / Some characteristics like absence of calcium oxalate crystals, secretory structures and trychomes and the richness of fibers that form strata localized immediately under the epiderms and limiting the cortical parenchyma or forming bundle sheaths, subsidize the authenticity of these rhizomes. Besides the rhizomes contain amide, coumarins, alkaloids, flavonoids and nonhemolytic saponins. A lectin (ADL) specific to GlcNac and its oligosaccharides was isolated and purified from Arundo donax L. (Poaceae) rhizomes by affinity chromatography on rabbit stroma-polyacrilamide column. The lectin was purified 12.15 times, the yield of proteins was 6.58 % and the recovery of the hemagglutinating activity was 80 %. The purified lectin is heterotrimeric and has a molecular mass of 32,900 approximately estimated by gel filtration and of 33,000 by SDS-PAGE in non denaturating and non reducing conditions. The purified lectin is rich in Glu/Gln, Asp/Asn, Gly and Cys, but it is not glycosilated. ADL is relatively heat- and pHstable and it is resistent to disgestion by proteolytic enzymes. It agglutinates native rabbit, pig erythrocytes and with lower intensity rat and human A, B and AB erythrocytes, and its hemagglutinating activity is independent of divalent cations, but it is decreased by denaturating and reducing agents. Arundo donax L. lectin displays cytotoxic effect on Dysdercus peruvianus and nematicide activity againt Meloidogyne incognita. ADL decreases the germinability and delays the mean time for germinability of Lactuca sativa L. diasphores and also shows significant mitogenic and chemotactic effect. The lectin induce toxicity signals in mice by intraperitoneal injection with the dose of 300 mg/kg and 800 mg/kg caused 100 % death of the animals, 30 h after its administration. Seven isoforms of ADL were separated by preparative PAGE. The six isoforms studied are heterotrimeric, with polypeptide chains of molecular mass of 8.5, 13.1 and 18.9 kDa determined by mass spectroscophy and with 40.6 kDa of lectin molecular mass. The isoforms showed stability when subjected to the action of distinct chemical and physico-chemical factors as ADL showed. However, they exibited unequal intensity of erythrocyte agglutination and carbohydrate inhibition. ADL-III is rich in Glu/Gln, Gly and Asp/Asn and Cys residues, and its Nterminal a and b chains contain tryptophan residues. ADL-III showed significant mitogenic activity. ADL was able to bind to transformed cells from T-47D, HT-29 and T-24 lines in vitro. Immunohistochemical techniques allowed to localize ADL in the fiber cell walls and in some few cortical parenchyma cells of the rhizome.