Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-04-19T04:18:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2015 / A análise histopatológica do tecido ósseo ou mineralizado apenas é possível após a desmineralização tecidual que consiste em imergir as amostras em soluções ácidas ou quelantes. Este trabalho teve como objetivo testar diferentes procedimentos de desmineralização dos ossos, a fim de estabelecer o melhor valor destes em amostras fixadas em formalina e embebidos em parafina. Foram utilizados 130 discos de fêmur obtidos de 10 ratos Wistar machos adultos e distribuídos aleatoriamente em 5 grupos para desmineralização em soluções de ácido nítrico 5%, 10% e 20% (Grupo I), ácido fórmico 10%, 20% e 30% (Grupo II), ácido acético 10%, 20% e 30% (Grupo III), EDTA pH 7,4 a 5%, 10% e 20% (Grupo IV) e solução de Anna Morse (Grupo V). Cortes seriados de 3 µm de espessura foram coradas com hematoxilina-eosina (H&E) para calcular a porcentagem de lacunas ocupadas por osteócitos. Os cortes histológicos também foram coradas com Tricrômio de Masson e Picrosirius sob polarização e uma análise semi-quantitativa foi aplicada para verificar a integridade do tecido muscular adjacente ao osso e a preservação das fibras colágenas. Foi calculado o tempo (dias) e o custo (dólares) para a realização da desmineralização completa para cada solução. O Grupo I exigiu menor tempo e custo financeiro (0,8 a 5,7 dias). A porcentagem mais elevada de lacunas ocupadas por osteócitos foi encontrada na desmineralização com a solução de ácido acético 10% (95,64% ± 0,95), seguido por ácido acético 30% (87,52 ± 3,41%) e EDTA 5% (82,14% ± 4,02). Grupos III e IV necessitaram maior tempo para conclusão da desmineralização (48 a 79,8 dias). Entre todas as soluções, o ácido nítrico 5% apresentou menor custo em comparação com outras soluções (P < 0,001), enquanto o ácido acético 30% teve maior custo para a conclusão da desmineralização. O Grupo IV teve a maior integridade muscular e do colágeno tipo I e II em relação aos demais grupos (P < 0.01). Assim, concluímos que a desmineralização com ácido acético 10% foi o mais eficaz na preservação do tecido ósseo, enquanto o EDTA 5% foi o melhor na manutenção do colágeno e do músculo adjacente ao osso. Ácido nítrico 5% mostrou melhor equilíbrio entre tempo e o custo como solução desmineralizadora.<br> / Abstract : Histopathological analysis of bone and mineralized tissue is only possible after tissue demineralization consisting in immersing the samples in acid or chelating solutions. The aim of this study was to test different decalcification bone procedures in order to establish the best value of these in formalin-fixed and paraffin-embedded samples. Femurs were removed from ten adult male Wistar rats to obtain 130 bone disks randomly divided into 5 groups that were demineralized with nitric acid solutions at 5%, 10%, 20% (Group I), formic acid at 10%, 20% and 30% (Group II), acetic acid at 10%, 20% and 30% (Group III), EDTA pH 7.4 at 5%, 10% and 20% (Group IV) and Morse´s solution (Group V). Serial 3-µm-thick sections were obtained and stained with hematoxylin-eosin (H&E) to calculate the percentage of osteocytes-occupied lacunae. The sections were also stained with Masson's trichrome in conjunction with picrosirius red under polarized light followed by a semi-quantitative analysis to verify the adjacent muscle to bone integrity and preservation of collagen fibers. It was measured the time in days for the complete demineralization for each solution and the financial cost in dollars was calculate for carrying out the solutions. Group I demanded the shortest time (0.8 to 5.7 days). The highest percentage of osteocytes-occupied lacunae was found with 10% acetic acid solution (95.64% ± 0.95) followed by 30% acetic acid (87.52% ± 3.41) and 5% EDTA (82.14% ± 4.02). Groups III and IV required more time for demineralization (48 to 79.8 days). Among all solutions, 5% nitric acid required less cost compared with other solutions (P < 0.001) whereas 30% acetic acid required higher cost for the completion of demineralization. Group IV had the highest integrity for muscle and collagen type I and II (P < 0.01). Thus, we concluded that demineralization with 10% acetic acid was the most effective in preserving the bone tissue while 5% EDTA was the best in maintaining the collagen and adjacent muscle to bone. Five percent nitric acid showed the most efficient result as it balances both time and cost as demineralizing solution.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsc.br:123456789/160768 |
| Date | January 2015 |
| Creators | Abrantes, Adelino António Artur |
| Contributors | Universidade Federal de Santa Catarina, Gondak, Rogério de Oliveira, Siqueira, Filipe Modolo |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | 66 p.| il., tabs. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSC, instname:Universidade Federal de Santa Catarina, instacron:UFSC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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