Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Botânica, 2015. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-10-11T12:43:37Z
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Previous issue date: 2017-10-11 / A água é de importância fundamental para a vida, pois constitui a matriz onde ocorre a maioria dos processos bioquímicos que são essenciais. As estruturas e funções das proteínas dependem da presença de água. As plantas naturalmente têm a capacidade de suportar ambientes desfavoráveis e essa capacidade de resistir ao ambiente é determinada geneticamente. Atualmente, mecanismos de proteção em nível molecular têm sido estudados, como os fatores de transcrição DREB (Dehydration-Responsive Element- Binding) que foram identificados e caracterizados inicialmente em Arabidopsis thaliana. Fatores de transcrição (FT) iniciam uma cascata gênica conferindo tolerância à desidratação, salinidade ou altas e baixas temperaturas, ou seja, estresses abióticos. Em trabalho anterior o promotor do gene RcDREB1 dirigiu a expressão do gene gus que foi detectada apenas em grãos de pólen de plantas transgênicas de tabaco no momento da antese. Este trabalho visa obter plantas transgênicas de tabaco expressando o gene RcDREB1 constitutivamente para testar a hipótese de que essas plantas poderão ser tolerantes ao estresse hídrico. Para alcançar este objetivo, foi inserido o gene RcDREB1 no vetor pCAMBIA3300 onde o promotor constitutivo 35SCaMV dirigirá sua expressão. As plantas resistentes ao agente seletivo glufosinato de amônio foram analisadas para a presença do transgene por PCR e para a detecção da proteína fosfinotricina acetiltransferase (PAT). Essas análises confirmaram que 11 plantas eram transgênicas. Cinco linhagens de plantas transformadas foram testadas para tolerância a estresse hídrico onde a rega das plantas foi removida por nove dias. Quatro das linhagens utilizadas no teste anterior tiveram a viabilidade dos pólens avaliada por exposição a alta temperatura (37ºC). Os resultados mostraram que a linhagem T6 apresentou maior tolerância ao estresse hídrico assim como um ganho de biomassa durante o período do estresse. E o pólen da linhagem T11 apresentou viabilidade estatisticamente maior que a linhagem WT. O com os resultados obtidos gene RcDREB1 se mostrou um gene candidato a programas de melhoramento de cultivares comerciais. / Water is fundamental for life, as it is the matrix, in which occurs most essential biochemical processes. The structures and functions of proteins depend on the presence of water. Plants have a natural ability to withstand harsh environments and ability to withstand this environment is genetically determined. Currently, protection mechanisms at the molecular level have been studied, such as DREB transcription factors (Dehydration- Responsive Element-Binding) that were identified and initially characterized in Arabidopsis thaliana. Transcription factors (TF) initiate a gene cascade conferring tolerance to dehydration, salinity or high and low temperatures, i.e. abiotic stresses. In our previous work, the promoter of the RcDREB1 gene, controlling the expression of the gus gene, have shown expression only in pollen grains of transgenic tobacco plants at the time of anthesis. This work aims to obtain transgenic tobacco plants constitutively expressing the RcDREB1gene to test the hypothesis that these plants may be tolerant to water stress. To accomplish this, the RcDREB1 gene was inserted into the pCAMBIA3300 vector under control of the constitutive promoter 35SCaMV. Plants resistant to the selective agent glufosinate ammonium were analyzed for the presence of the transgene by PCR and for the detection of protein phosphinothricin acetyltransferase (PAT). These analyzes confirmed that 11 plants were transgenic. Five transformed plants lines were tested for tolerance to drought stress by removing watering for nine days. Four of the lines were evaluated for the viability of pollen, exposed to high temperature (37 ° C). Results showed that the line T6 was more tolerant to water stress as well as a gain of biomass during the stress period. In addition, the pollen viability showed to be statistically higher in the line T11 when compared to the WT plants. These results demonstrated that RcDREB1 gene is a candidate for the improvement of commercial crops.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unb.br:10482/24797 |
| Date | 27 February 2015 |
| Creators | Rego, Tomas Felipe Costa do |
| Contributors | Aragão, Francisco José Lima |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UnB, instname:Universidade de Brasília, instacron:UNB |
| Rights | A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data., info:eu-repo/semantics/openAccess |
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