[pt] No presente trabalho, a cromatografia eletrocinética capilar micelar (MECC) e a fosforimetria em temperatura ambiente em substrato sólido (SSRTP) foram utilizadas como técnicas analíticas para a determinação de duas estrobilurinas (picoxistrobina e piraclostrobina) e de uma fluoroquinolona (enrofloxacina), respectivamente. As condições ótimas de analise por MECC foram determinadas a partir de um estudo univariado dos seguintes parâmetros experimentais e instrumentais: pH do eletrólito de corrida, concentração do tampão, concentração de surfactante (dodecil-sulfato de sódio - SDS), tipo e quantidade de modificador orgânico, temperatura de trabalho e diferença de potencial aplicada. Depois de definidas as condições ótimas (tampão borato 40 mmol L-1, pH igual a 8,5; SDS 30 mmol L-1; acetonitrila 15 por cento em volume, 25 gruas Celsius e 25 kV) foi realizado um estudo para diminuir o limite de detecção (LD) e o limite de quantificação (LQ) do método. Para tal, foi usado o modo de pré-concentração no capilar denominado modo de empilhamento normal (NSM). Nessa abordagem, as soluções de padrões e amostras foram dissolvidas em uma solução de maior impedância (água: borato 40 mmol L-1 pH igual a 8,5 50:50 por cento v/v). Uma cela de caminho óptico alongado também foi utilizada para a tentativa de aumentar a sensibilidade do método. As curvas analíticas foram construídas com o uso de padrão interno (azoxistrobina) e apresentaram comportamento linear e homocedástico com valores de R2 próximos a 0,999. Com o modo NSM, os valores de LD (xb mais 3sb) e de LQ (xb mais 10sb) para a picoxistrobina e para a piraclostrobina ficaram na ordem de 10-7 mol L-1. A precisão do método (repetitividade e reprodutibilidade interna) apresentaram valores entre 5 e 8 por cento para tempo de migração e área dos picos. O método foi aplicado na análise de urina e água de riacho, ambas fortificadas com as estrobilurinas. As amostras de urina foram previamente passadas em coluna de extração em fase sólida (C-18).
As recuperações obtidas para a piraclostrobina foram 75 mais ou menos 4 por cento para as amostras de urina e 94 ou menos 10 por cento para as amostras de água de riacho. Para a picoxistrobina os valores de recuperação foram de 109 mais ou menos 9 por cento e 102 mais ou menos 9 por cento para as amostras de urina e água do riacho respectivamente. As características fosforescentes da enrofloxacina foram estudadas de modo univariado em função de vários parâmetros experimentais tais como o tipo e quantidade de sal de átomo pesado indutor de fosforescência, presença de surfactante modificador de superfície de celulose, influência de concentração hidrogeniônica na solução do analito e estudo do tempo de exposição ao UV para a formação de fotoproduto de sinal mais estável. As melhores condições para o método fosforescente para enrofloxacina foram obtidas em solução básica (solução acetona: NaOH 0,05
mol L-1 50:50 por cento v/v) irradiada com UV por 30 min e substrato contendo 80 Vg de TlNO3. O método foi aplicado em formulações farmacêuticas contendo enrofloxacina e que são utilizadas na medicina veterinária (solução e comprimidos). Um método com a técnica de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) adaptado da literatura foi utilizado para análise das amostras de enrofloxacina, sendo os resultados comparáveis àqueles obtidos por SSRTP. A curva analítica apresentou resposta linear e homoscedástica na faixa de trabalho escolhida com R2 maior que 0,99. Os valores de LD (xb mais 3sb) e de LQ (xb mais 10sb) foram respectivamente 2,1 and 4,8 ng respectivamente. A precisão (repetitividade e reprodutibilidade interna com troca de analista) do método apresentaram valores entre 2 e 19 por cento. A incerteza de medição do sinal fosforescente foi calculada usando o método sistemático indicado no ISO GUM e valores entre 18 e 26 por cento foram alcançados, com valores de repetitividade com troca de substrato a fonte mais importante de incerteza. No procedimento de validação, os valores de concentração de enrofloxacina encontrados nas amostras de medicamento analisadas por SSRTP e por HPLC foram estatisticamente semelhantes (valor de texperimental iguais a 0,48 e 1,04 sendo menor que o valor de tcrítico igual a 2,23). / [en] In the present work, micellar electrokinectic capillary
chromatography
(MECC) and solid surface room-temperature phosphorimetry
(SSRTP) were used
as analytical techniques for the determination of two
strobilurins (picoxystrobin
and pyraclostrobin) and of one fluoroquinolones
(enrofloxacin), respectively. The
experimental conditions for MECC have been optimized using
an univariate
approach for the following experimental and instrumental
parameters: pH of the
working electrolyte, concentration of the buffer,
concentration of surfactant
(sodium dodecyl-sulphate - SDS), type and amount of organic
modifier, working
temperature and applied potential. After defined the best
conditions (borate buffer
40 mmol L(-1) pH=8.5; 30 SDS mmol L(-1); acetonitrile 15%
in volume, 25 ºC and 25
kV), a study was carried through to improve the limit of
detention (LD) and the
limit of quantification (LQ) of the method. In order to do
that, an on-line analyte
pre-concentration called normal stacking mode (NSM) was
used. In such
approach, the standards and samples have been dissolved in
a solution of higher
impedance (water: borate 40 mmol L(-1) pH=8.5 50:50% v/v).
A high sensitivity
detection cell also was used to attempt the increasing of
the sensitivity of the
method. The analytical curves have been constructed with
the use of an internal
standard (azoxystrobin) and a linear response and
homocedastic behavior were
observed with R2 values of at least 0.999. The NSM mode
allowed the values of
LD (x(b) + 3(sb)) and of LQ (x(b) + 10(sb)) in the order of
10(-7) mol L(-1) for picoxystrobina
and pyraclostrobina. The precision of the method
(repeatability and intermediate
precision) was characterized by values between 5 and 8%.
The method was
applied in the analysis urine and stream water, both type
of samples fortified with
the strobilurins. The urine sample was previously passed
through a solid phase
extraction column (C-18). The recoveries achieved for
pyraclostrobina were 75 Â +-
4% for urine and 94 Â +- 10% for stream water samples. For
picoxystrobin, the
recovery values were 109 Â +- 9% and 102 Â +- 9% respectively for
urine and stream
water samples. The phosphorimetric characteristics of
enrofloxacin have been
studied in an unvaried way for experimental parameters such
as the type and
quantity of phosphorescence inducer (heavy atom salt),
surfactant used as cellulose surface modifier, influence of
the hidrogenionic concentration in the
analyte solution and study of the UV exposition time for
the formation of a more
signal stable photoproduct. The best conditions for the
phosphorimetric method
for enrofloxacin were the use of basic solution (solution
acetone: NaOH 0.05 mol
L-1 50:50% v/v) irradiated with UV for 30 min and cellulose
substrates containing
80 Vg of TlNO3. The method was applied in pharmaceutical
formulations
containing enrofloxacin employed in veterinary medicine
(solution and pills). A
method based on high efficiency liquid chromatography
(HPLC), adapted from
literature, was used as a reference method and the the
results obtained for
enrofloxacin was comparable to the ones achieved by SSRTP.
The analytical
curve presented linear and homocedastic behavior with R2
values higher than
0.99. The LD (x(b) + 3(sb)) and the LQ (x(b) + 10(sb))
values were 2.1 and 4.8 ng
respectively. The precision (repeatability and intermediate
precision with change
of analyst) of the method presented values between 2 and
19%. The uncertainty
of the phosphorescence measurement was calculated using the
systematic
method indicated in the ISO GUM. Values between 18 and 26%
had been
achieved, with the repeatability with substrate change the
most important source
uncertainty. In the validation procedure, enrofloxacin
concentration values found
in the medicine samples analyzed by SSRTP and HPLC were
statistically similar
( t(experimental) value of 0.48 and 1.04 smaller than the
t(critic) value of 2.23).
| Identifer | oai:union.ndltd.org:puc-rio.br/oai:MAXWELL.puc-rio.br:13068 |
| Date | 02 March 2009 |
| Creators | CABRINI FERRAZ DE SOUZA |
| Contributors | RICARDO QUEIROZ AUCELIO |
| Publisher | MAXWELL |
| Source Sets | PUC Rio |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | TEXTO |
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