[pt] Neste trabalho, a fosforimetria em temperatura ambiente em substrato sólido (SSRTP) foi utilizada para o desenvolvimento de método para determinação ultra-traço e seletiva de criseno e de pireno em amostras complexas contendo diversos outros hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPA). O criseno e o pireno foram selecionados por serem classificados pela Agência Americana de Proteção ao Meio Ambiente (U.S. Environmental Protection Agency - EPA) como dois dos dezesseis HPA poluentes prioritários e por serem conhecidos como uma ameaça à saúde pública e à integridade dos ecossistemas marinhos. A capacidade seletiva da SSRTP foi explorada por meio do efeito externo seletivo do átomo pesado e do ajuste de pH da solução carreadora de solução de analito para o substrato de celulose. O efeito da modificação da celulose com o surfactante SDS também foi investigado, assim como o uso da varredura de modo sincronizado para melhoria da resolução espectral. O nitrato de prata em substratos contendo SDS foi identificado como indutor seletivo de fosforescência do criseno em relação ao pireno e demais HPA em estudo (antraceno, benzo[a]pireno, 1-hidroxipireno, fluoranteno, fenantreno, benzo[ghj]perileno e 1,2 benzoantraceno). Já o pireno foi determinado seletivamente com varredura convencional e sincronizada de fosforescência em substratos contendo nitrato de chumbo como indutor seletivo e soluções carreadoras de analito em meio básico (pH 12). Essa seletividade foi em relação aos HPA citados, e ao 1- hidroxipireno, mesmo este tendo uma estrutura molecular muito semelhante a do pireno. O planejamento fatorial foi usado, principalmente visando verificar as interações mútuas entre os efeitos das diferentes variáveis do método desenvolvido, e, conseqüentemente, a escolha da melhor condição experimental. Neste estudo, foram enfatizados: (i) a análise experimental estatística (testou-se a significância dos efeitos dos fatores usando a análise de variância, teste F e teste t), (ii) o uso do método gráfico (gráfico de Pareto) para a interpretação das interações (entre as variáveis) e dos resultados obtidos, assim como o refinamento do modelo, se necessário, excluindo variáveis irrelevantes. As características de desempenho foram obtidas, a fim de se validar o método proposto, obtendo assim a credibilidade técnica das medições. Testes estatísticos (testes de hipótese) com o uso de material de referência certificado (SRM NIST 1647d) e método de referência alternativo (HPLC com detecção por fluorescência) também foram incluídos no processo de validação e os resultados encontrados estão dentro do nível de 95% de confiança. Os limites de detecção do criseno e do pireno em termos de massa efetiva do analito depositada no substrato (limite de detecção absoluto - LDA) encontram-se na ordem do ng. A quantificação das fontes de variação associadas à medição, a incerteza da medição, foi estimada pelo ISO GUM e método de simulação de Monte-Carlo. Testes de seletividade com criseno e pireno na presença de outros HPA também foram realizados e os resultados obtidos permitiram que a técnica fosse utilizada para determinações seletivas. A aplicação do método em diferentes tipos de matrizes (bílis de peixe e aguardente de cana) também foi realizada e os percentuais de recuperação encontrados foram 109 (+ -) 18% (criseno) e 108 (+ -) 20% (pireno). Esses resultados são comparáveis com os obtidos por HPLC-fluorescência: 104 (+ -) 13% (criseno) e 102 (+ -) 15% (pireno). Estudos de caracterização, homogeneidade e estabilidade do criseno em matriz biológica, bílis de peixe da espécie Mugil liza, e a estimativa da incerteza da medição do material analisado também foram realizados. A incerteza da medição encontra-se na ordem do ng (referente à massa efetiva depositada no substrato de celulose). / [en] In this work, solid surface room-temperature phosphorimetry (SSRTP) was used to develop ultra-trace and selective methods for determination of chrysene and pyrene in complex samples containing several other polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs). Both chrysene and pyrene were selected because they are classificated by the U.S. Environmental Protection Agency (EPA) as two out of the sixteen major pollutants, affecting public health and marine ecosystems. The selective capability of SSRTP was explored through the selective external heavy atom effect and the adjustment of pH of the analyte solution used to carry out the analyte to the cellulose substrate. Cellulose modification with the use of the surfactant sodium dodecyl sulphat (SDS) has also been evaluated as well as the use of synchronous scanning to improve its spectral resolution. Silver nitrate together with SDS was identified as selective phosphorescence inducer for chrysene in the presence of pyrene and other PAHs which are being studied (anthracene, benzo[a] pyrene, 1- hidroxipyrene, fluoranthene, phenanthrene, benzo[ghi] perylene and 1,2 benzoanthracene). On the other hand, pyrene was selectively determined with synchronous and conventional phosphorescence scanning in substrates treated with lead nitrate as a selective inducer and using analyte carrier solution with pH 12. This selectivity towards pyrene was achieved in the presence of all the other tested PAHs, including the 1- hidroxipyrene, even though they have quite similar molecular structures. A factorial design was applied in order to verify mutual interactions among factors of the different variables and to find the best experimental conditions. It has been emphasized in this study: (i) statistical experimental analysis (testing the significance of the factors using the analysis of variation, F-test and t-test), (ii) graphic method (Pareto´s chart) to the interpretation and evaluation of the interactions among all the variables and obtained results, the model was refined whenever necessary so exclude irrelevant variables. After choosing the best experimental condition, the performance characteristics were obtained validating the proposed method. Statistical tests were applied in order to compare results obtained using a standard reference material analysis (NIST SRM 1647d). The proposed method was also compared with a reference analytical technique (HPLC with fluorescence detection) and the results obtained are within 95% confidence level. Chrysene and pyrene absolute detection limits were found in the ng order. The quantification of the variation sources associated to the measurement (the measurement´s uncertainty) was estimated based on ISO GUM and Monte-Carlo simulation method. Selectivity tests for chrysene and pyrene, in presence of the other PAHs were also performed. The methods were applied to different types of samples (fish bilis and spirit drink from sugar cane) and the recoveries were 109 (+ -) 18% (chrysene) and 108 (+ -) 20% (pyrene) by SSRTP. These results are comparable to ones obtained by HPLCFluorescence: 104 (+ -) 13% (chrysene) and 102 (+ -) 15% (pyrene). Characterization, homogeny and stability studies in a biological matrix (fish bilis of the type Mugil liza) and the estimation of uncertainty of the analysed material were also done. The measurement uncertainty was found in ng order (in terms of the effective mass deposit in the cellulose substrate).

[pt] No presente trabalho, a cromatografia eletrocinética capilar micelar (MECC) e a fosforimetria em temperatura ambiente em substrato sólido (SSRTP) foram utilizadas como técnicas analíticas para a determinação de duas estrobilurinas (picoxistrobina e piraclostrobina) e de uma fluoroquinolona (enrofloxacina), respectivamente. As condições ótimas de analise por MECC foram determinadas a partir de um estudo univariado dos seguintes parâmetros experimentais e instrumentais: pH do eletrólito de corrida, concentração do tampão, concentração de surfactante (dodecil-sulfato de sódio - SDS), tipo e quantidade de modificador orgânico, temperatura de trabalho e diferença de potencial aplicada. Depois de definidas as condições ótimas (tampão borato 40 mmol L-1, pH igual a 8,5; SDS 30 mmol L-1; acetonitrila 15 por cento em volume, 25 gruas Celsius e 25 kV) foi realizado um estudo para diminuir o limite de detecção (LD) e o limite de quantificação (LQ) do método. Para tal, foi usado o modo de pré-concentração no capilar denominado modo de empilhamento normal (NSM). Nessa abordagem, as soluções de padrões e amostras foram dissolvidas em uma solução de maior impedância (água: borato 40 mmol L-1 pH igual a 8,5 50:50 por cento v/v). Uma cela de caminho óptico alongado também foi utilizada para a tentativa de aumentar a sensibilidade do método. As curvas analíticas foram construídas com o uso de padrão interno (azoxistrobina) e apresentaram comportamento linear e homocedástico com valores de R2 próximos a 0,999. Com o modo NSM, os valores de LD (xb mais 3sb) e de LQ (xb mais 10sb) para a picoxistrobina e para a piraclostrobina ficaram na ordem de 10-7 mol L-1. A precisão do método (repetitividade e reprodutibilidade interna) apresentaram valores entre 5 e 8 por cento para tempo de migração e área dos picos. O método foi aplicado na análise de urina e água de riacho, ambas fortificadas com as estrobilurinas. As amostras de urina foram previamente passadas em coluna de extração em fase sólida (C-18). As recuperações obtidas para a piraclostrobina foram 75 mais ou menos 4 por cento para as amostras de urina e 94 ou menos 10 por cento para as amostras de água de riacho. Para a picoxistrobina os valores de recuperação foram de 109 mais ou menos 9 por cento e 102 mais ou menos 9 por cento para as amostras de urina e água do riacho respectivamente. As características fosforescentes da enrofloxacina foram estudadas de modo univariado em função de vários parâmetros experimentais tais como o tipo e quantidade de sal de átomo pesado indutor de fosforescência, presença de surfactante modificador de superfície de celulose, influência de concentração hidrogeniônica na solução do analito e estudo do tempo de exposição ao UV para a formação de fotoproduto de sinal mais estável. As melhores condições para o método fosforescente para enrofloxacina foram obtidas em solução básica (solução acetona: NaOH 0,05 mol L-1 50:50 por cento v/v) irradiada com UV por 30 min e substrato contendo 80 Vg de TlNO3. O método foi aplicado em formulações farmacêuticas contendo enrofloxacina e que são utilizadas na medicina veterinária (solução e comprimidos). Um método com a técnica de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) adaptado da literatura foi utilizado para análise das amostras de enrofloxacina, sendo os resultados comparáveis àqueles obtidos por SSRTP. A curva analítica apresentou resposta linear e homoscedástica na faixa de trabalho escolhida com R2 maior que 0,99. Os valores de LD (xb mais 3sb) e de LQ (xb mais 10sb) foram respectivamente 2,1 and 4,8 ng respectivamente. A precisão (repetitividade e reprodutibilidade interna com troca de analista) do método apresentaram valores entre 2 e 19 por cento. A incerteza de medição do sinal fosforescente foi calculada usando o método sistemático indicado no ISO GUM e valores entre 18 e 26 por cento foram alcançados, com valores de repetitividade com troca de substrato a fonte mais importante de incerteza. No procedimento de validação, os valores de concentração de enrofloxacina encontrados nas amostras de medicamento analisadas por SSRTP e por HPLC foram estatisticamente semelhantes (valor de texperimental iguais a 0,48 e 1,04 sendo menor que o valor de tcrítico igual a 2,23). / [en] In the present work, micellar electrokinectic capillary chromatography (MECC) and solid surface room-temperature phosphorimetry (SSRTP) were used as analytical techniques for the determination of two strobilurins (picoxystrobin and pyraclostrobin) and of one fluoroquinolones (enrofloxacin), respectively. The experimental conditions for MECC have been optimized using an univariate approach for the following experimental and instrumental parameters: pH of the working electrolyte, concentration of the buffer, concentration of surfactant (sodium dodecyl-sulphate - SDS), type and amount of organic modifier, working temperature and applied potential. After defined the best conditions (borate buffer 40 mmol L(-1) pH=8.5; 30 SDS mmol L(-1); acetonitrile 15% in volume, 25 ºC and 25 kV), a study was carried through to improve the limit of detention (LD) and the limit of quantification (LQ) of the method. In order to do that, an on-line analyte pre-concentration called normal stacking mode (NSM) was used. In such approach, the standards and samples have been dissolved in a solution of higher impedance (water: borate 40 mmol L(-1) pH=8.5 50:50% v/v). A high sensitivity detection cell also was used to attempt the increasing of the sensitivity of the method. The analytical curves have been constructed with the use of an internal standard (azoxystrobin) and a linear response and homocedastic behavior were observed with R2 values of at least 0.999. The NSM mode allowed the values of LD (x(b) + 3(sb)) and of LQ (x(b) + 10(sb)) in the order of 10(-7) mol L(-1) for picoxystrobina and pyraclostrobina. The precision of the method (repeatability and intermediate precision) was characterized by values between 5 and 8%. The method was applied in the analysis urine and stream water, both type of samples fortified with the strobilurins. The urine sample was previously passed through a solid phase extraction column (C-18). The recoveries achieved for pyraclostrobina were 75  +- 4% for urine and 94  +- 10% for stream water samples. For picoxystrobin, the recovery values were 109  +- 9% and 102  +- 9% respectively for urine and stream water samples. The phosphorimetric characteristics of enrofloxacin have been studied in an unvaried way for experimental parameters such as the type and quantity of phosphorescence inducer (heavy atom salt), surfactant used as cellulose surface modifier, influence of the hidrogenionic concentration in the analyte solution and study of the UV exposition time for the formation of a more signal stable photoproduct. The best conditions for the phosphorimetric method for enrofloxacin were the use of basic solution (solution acetone: NaOH 0.05 mol L-1 50:50% v/v) irradiated with UV for 30 min and cellulose substrates containing 80 Vg of TlNO3. The method was applied in pharmaceutical formulations containing enrofloxacin employed in veterinary medicine (solution and pills). A method based on high efficiency liquid chromatography (HPLC), adapted from literature, was used as a reference method and the the results obtained for enrofloxacin was comparable to the ones achieved by SSRTP. The analytical curve presented linear and homocedastic behavior with R2 values higher than 0.99. The LD (x(b) + 3(sb)) and the LQ (x(b) + 10(sb)) values were 2.1 and 4.8 ng respectively. The precision (repeatability and intermediate precision with change of analyst) of the method presented values between 2 and 19%. The uncertainty of the phosphorescence measurement was calculated using the systematic method indicated in the ISO GUM. Values between 18 and 26% had been achieved, with the repeatability with substrate change the most important source uncertainty. In the validation procedure, enrofloxacin concentration values found in the medicine samples analyzed by SSRTP and HPLC were statistically similar ( t(experimental) value of 0.48 and 1.04 smaller than the t(critic) value of 2.23).

[pt] Neste trabalhou desenvolveu-se métodos analíticos baseados na fosforimetria em temperatura ambiente em substrato sólido (FTASS) para determinação seletiva de fluorquinolonas. Mais especificamente, avaliou-se a viabilidade do uso do nitrato de tório como sal de átomo pesado indutor de fosforescência visando a determinação seqüencial de norfloxacino (NOR) e levofloxacino (LEV), determinação seletiva de NOR em presença de ciprofloxacino (CIP), assim como a determinação seletiva de CIP em presença de gatifloxacino (GAT) ou moxifloxacino (MOX). Realizou-se uma cuidadosa comparação entre o sinal fosforescente obtido com o uso do nitrato de tório e os obtidos pelos sais indutores tradicionalmente utilizados na FTASS. Estudou-se univariadamente o efeito da quantidade de sal indutor de átomo pesado depositado no substrato sólido, a quantidade de um surfactante modificador de superfície e a concentração hidrogeniônica da solução carreadora de analito na magnitude do sinal fosforescente. Também foram avaliadas possíveis interações entre esses fatores experimentais por meio de um planejamento fatorial 23. Com a estratégia de análise bem definida, desenvolveram-se metodologias para a determinação de NOR, LEV e CIP em formulações farmacêuticas comerciais e simuladas e em urina enriquecida sem que se fosse aplicado procedimentos de separação do analito de interesse das outras substâncias concomitantes. Para tal, a estratégia de varredura sincronizada foi fundamental. Os parâmetros analíticos de mérito obtidos com o uso do nitrato de tório foram comparados com os obtidos com o do acetato de cádmio (átomo pesado indutor de fosforescência de fluorquinolonas já descrito na literatura). Em todos os casos estudados, a resposta analítica apresentou comportamento linear em função da massa depositada de NOR, LEV e CIP no substrato (R2>0,99), com boa repetitividade e sensibilidade (avaliada pelos limites de detecção e quantificação absolutos na ordem de ng). Tanto nas formulações farmacêuticas quanto em urina enriquecida, os resultados obtidos com o método desenvolvido com o uso do sal de tório na determinação seqüencial de NOR/LEV e na determinação seletiva de NOR/CIP foram mais vantajosos que os obtidos com o uso do sal de cádmio. Em ambos os casos, o método desenvolvido com o uso do Th(NO3) 4 mostrou-se válido desde que a proporção molar das misturas NOR/LEV e NOR/CIP não ultrapassem a condição de 1 (analito) para 5 (interferente). Para o método desenvolvido na determinação seletiva de CIP em misturas contendo GAT, o Th(NO3)4 também mostrou-se mais adequado que o acetato de cádmio, Cd(OAc)2, sendo obtidos resultados satisfatórios, desde que a proporção molar CIP/GAT não ultrapassasse 1 para 2. No entanto, interferências do tipo nãoespectral foram observadas na presença de quantidades maiores de GAT (até 10 vezes mais), as quais podem ser facilmente corrigidas utilizando o método de adição do analito. Já nas misturas contendo CIP/MOX, o método desenvolvido para a determinação seletiva de CIP com o uso do sal de tório foi muito favorável em proporções equimolares e em quantidades contendo duas vezes mais MOX. Em misturas contendo maiores quantidades de MOX, observou- se interferências do tipo espectral que não puderam ser contornadas por sincronização, devido seus (Lambda)sinc.muito próximos. Porém, utilizando Cd(OAc) 2 nas misturas contendo CIP/MOX em razões molares maiores que 1:2 se observou interferências apenas do tipo não-espectral, que podem ser corrigidas por procedimento adequado de calibração. Esse caso foi o único cujo sal de cádmio mostrou-se superior ao método desenvolvido com o uso do sal de tório. / [en] In this work, analytical methods based on solid surface room-temperature phosphorimetry were developed aiming the selective determination of fluorquinolones. More spectilly, thorium nitrate was evaluated as phosphorescence inducer aiming the sequential determination of norfloxacin (NOR) and levofloxacin (LEV), selective determination of NOR in presence of ciprofloxacin (CIP), as well as the selective determination of CIP in the presence gatifloxacin (GAT) or moxifloxacin (MOX). In order to that, the phosphorescence induced by thorium nitrate was compared with the ones achieved using other traditionally employed heavy atom enhancers in solid surface room-temperature phosphorimetry (SSRTP). Univariated studies were made in order to evaluate the effect of the amounts of heavy atom salt and surface modifier present in the substrate as well as the influence of the pH of the analyte carrier solution. The interaction among these factors were also studied through experimental factorial desings (23). After the definition of the analytical strategy to be employed, analytical methods were developed for the determination of NOR, LEV and CIP in simulated mistures and analyte spiked urine without employing any procedure to physically separate the analyte from the others components of the sample. In order to do that, the use of syncronized scanning was fundamental. The analytical figures of merit achieved using thorium nitrate and cadmium acetate (heave atom inducer already reported in the literature for fluorquinolones) were campared. In both cases, linear analytical responses in function of the amount of analyted present in the substrate were achieved (R2>0,99). Good repetitivity of results and sensibility (evaluated through the estimation of the limits of detection and quantification) were in the ng order. When testing pharmaceutical formulations and spiked urine, the use of Th(NO3)4 showed clear advantage over Cd(OAc)2, allowing the sequential determination of NOR/LEV and the selective determination of NOR in the presence of CIP. The selective determination of NOR using Th(NO3)4 could be made for mixtures containing up to five times more LEV or CIP in molar proportion. For the developed method aiming the determination of CIP in mistures containing GAT, Th(NO3)4 was found to be more adequate heavy atom enhancer than Cd(OAc)2. The method was free from interferences for samples containing two times more GAT than CIP (in molar proportion). However, interferences observed for mixtures containing higher amounts of GAT could be easily corrected by the using of the standard addition method for quantification. In mixtures containing CIP and MOX, the developed method using Th(NO3)4 was suitable for mixtures containing equimolar proportions of these two fluorquinolones. Spectral interferences were observed for higher amounts of MOX. Such interference could not be resolved due to close (lambda) values characteristic for the two FQs. However, for the method using Cd(OAc)2 in mixtures containing CIP/MOX in molar proportion more them 1:2 only non spectral interferences were observed, but this interferences can be corrected by the use of proper calibration strategy. This was the only situation where Cd(OAc)2 demonstrate better results than Th(NO3)4.

[pt] Os derivados da camptotecina (CPT), irinotecana (CPT-11) e topotecana (TPT) são usados para o tratamento do câncer, sendo a CPT um potencial contaminante em medicamentos anticâncer a base de CPT-11 ou TPT. Neste trabalho, a fosforimetria na temperatura ambiente em substrato sólido (SSRTP) foi proposta como técnica analítica para a determinação do princípio ativo do anticâncer injetável a base de CPT-11 e de traços do contaminante CPT em formulações farmacêuticas anticâncer. As características fosforescentes dos dois analitos foram estudadas de modo univariado em função de diversos parâmetros experimentais, como o tipo e a quantidade de sal de átomo pesado indutor de fosforescência, influência do valor do pH do tampão usado na solução do analito e quantidade de surfactante modificador de superfície da celulose. Uma vez definidos os fatores relevantes, o planejamento fatorial do tipo composto central foi realizado para a determinação de traços do contaminante (CPT) com o intuito de estudar os efeitos principais e as possíveis interações entre os fatores de resposta visando à escolha da melhor condição experimental. As melhores condições foram obtidas usando substratos de celulose contendo 332 microgramas de TlNO3 (indutor da fosforescência) em solução carreadora contendo tampão Britton-Robinson (pH 10,5). Para a CPT-11 a otimização foi realizada apenas pela abordagem univariada, com as seguintes condições escolhidas: 662 microgramas de Pb(NO3)2 em substratos de celulose contendo 577 microgramas de SDS. A CPT pôde ser determinada seletivamente em matrizes contendo 40 vezes mais TPT, em concentração, usando a determinação no ponto isodiferencial (367 nm) da derivada de segunda ordem do espectro de excitação. Para matrizes contendo CPT-11, esse desempenho foi mais limitado, pois a CPT só foi determinada seletivamente em misturas contendo até 5 vezes mais CPT-11. Para cada uma das condições selecionadas foram realizados estudos para obtenção dos parâmetros de desempenho. Em ambos os casos, a resposta analítica teve comportamento linear (homocedático) em função da massa de CPT ou de CPT-11 presentes no substrato de celulose. Os limites de detecção e de quantificação absolutos ficaram na ordem do ng. Um estudo detalhado da estimativa da incerteza de medição também foi realizado e a incerteza combinada associada à medição de fosforescência da CPT foi de até 16 por cento. O método foi aplicado na quantificação de CPT-11 em soluções injetáveis com 97,5 mais ou menos 5,5 por cento de recuperação e na determinação de CPT em medicamentos a base de TPT (101,5 mais ou menos 3,5 por cento de recuperação medindo em 367 nm do espectro de excitação após derivação de segunda ordem) e nas matrizes urina (102,5 mais ou menos 3,5 por cento de recuperação) e saliva (102,5 mais ou menos 4,5 por cento de recuperação), ambas fortificadas com CPT e usando-se detecção em 570 nm do espectro de emissão de varredura normal. Testes comparativos entre a SSRTP e a HPLC-DF foram realizados e os resultados foram satisfatórios para um nível de 95 por cento de confiança. Uma comparação entre diferentes substratos foi também realizada para avaliar requisitos práticos, variabilidade de sinal do analito e do branco, o que indicou vantagens do substrato de nylon sobre o de celulose. / [en] Irinotecan (CPT-11) and topotecan (TPT) are employed for cancer treatment and camptothecin (CPT) is a potential contaminant in anti-cancer drugs based on CPT-11 or TPT. In this work, solid substrate room-temperature phosphorimetry (SSRTP) was proposed as analytical technique for the quantification of CPT-11 in anti-cancer drugs and for the determination of traces of CPT in CPT-11 and TPT based anti-cancer pharmaceutical formulations. The phosphorescence characteristics of the analytes have been studied and experimental conditions (type and amount of the heavy atom salts used to induce phosphorescence, influence of the pH of the analyte carrier solution and the amount of surface modifier) were optimized in an univariate way. For the method aiming the determination of CPT, a further optimization using a central composite design was made in order to identify the main effects and possible interactions among factors. The best conditions had been achieved using cellulose substrate containing 332 micrograms of TlNO3 (phosphorescence inducer) and analyte carrier solution containing Britton-Robinson buffer (pH 10.5). For the CPT-11, best conditions were achieved in cellulose substrates containing 577 micrograms of SDS and 662 micrograms of Pb(NO3)2 The selective determination of CPT could be performed in samples containing a higher amount of TPT (40 times) if the signal measurement is made at the isodifferential wavelength (367 nm) of the second derivative excitation spectra. For samples containing CPT-11, selective determination of CPT could be made in samples containing CPT-11/CPT molar proportion no higher than 5. Parameters of merit have been obtained for both methods. Analytical responses presented linear behavior in the in working range from the limit of quantification up to at least 348.0 ng of CPT or 440.2 ng of CPT-11 (deposited in the center of the substrate). Absolute limits of detection and quantification were 26.8 and 42.3 ng for CPT and 79.6 and 99.9 ng for CPT-11. A detailed metrological study was performed for the measurement of CPT and the combined uncertainty associated to the phosphorescence measurement was 16 percent. The method was applied for the quantification of CPT-11 in injectable solutions with recovery of 97.5 more or less 5.5 percent. For CPT, recovery in TPT based pharmaceutical formulation, previously fortified with the analyte, was 101.5 more or less 3.5 percent (measurement made at 367 nm of the second derivative excitation spectra). In analyte fortified urine and saliva, recoveries were respectively 102.5 more or less 3.5 percent and 102.5 more or less 4.5 percent (using non-derived spectra and detention at 570 nm of the emission band). Comparative tests between the SSRTP and HPLC-DF have been made and the results agreed (at a 95 percent confidence level). A comparison using different substrates (nylon and cellulose) was also performed in order to evaluate practical aspects, analyte signal intensity and the variability of the analyte and blank signals. The result indicated advantages in using nylon substrates for the phosphorimetric determination of CPT.

[pt] Neste trabalho, métodos analíticos baseados na fosforimetria na temperatura ambiente foram desenvolvidos para a determinação de sete compostos policíclicos aromáticos (CPA) sulfurados e nitrogenados presentes do petróleo. Mais especificamente, o objetivo foi o de fornecer ferramentas analíticas que permitissem avaliar e quantificar estes CPA em gasolina e em uma amostra ambiental (sedimento). Adicionalmente, a informação obtida através da fosforimetria mostrou potencial para permitir diferenciar amostras (por exemplo, a identificação de amostras contaminadas) por meio de perfil em três dimensões ou curvas de nível. A aplicação de técnica de varredura sincronizada e o uso do efeito externo seletivo do átomo pesado aumentaram o grau de seletividade e de discriminação entre amostras, pois induziu fosforescência de componentes específicos na amostra e melhorou a resolução espectral dos resultados. Inicialmente, foi feito um estudo das características fosforescentes das substâncias em diferentes condições experimentais, seguido da maximização do sinal fosforescente de cada uma das substâncias nas condições experimentais mais propícias para observação do sinal fosforescente. Para tal, o papel filtro, previamente tratado para redução do sinal de fundo, foi utilizado como substrato sólido para imobilização dos analitos, permitindo a observação de intensa fosforescência na temperatura ambiente. Os parâmetros de mérito das metodologias desenvolvidas para cada um dos analitos em questão foram obtidos. As faixas lineares se estenderam entre 1,0 x 10-7 e 5,0 x 10-4 mol L-1, considerando as concentrações das soluções dos analitos aplicadas no substrato. Os coeficientes de determinação (r2) obtidos ficaram sempre acima de 0,9784. Os limites de detecção absolutos (para 5 µL de amostra) foram todos na ordem do ng, mostrando a capacidade para detecção sensível em termos de massa efetiva de analito. Os testes de repetibilidade mostraram valores variando entre 12 e 18%, o que pode ser considerado satisfatório para a técnica realizada em substrato sólido. Também foram conduzidos estudos de robustez e reprodutibilidade. Alternativamente, sinais fosforescentes foram maximizados em condições experimentais secundárias do ponto de vista da magnitude de sinal, mas potencialmente relevantes do ponto de vista da seletividade. Testes de recuperação indicaram, na maioria dos casos, resultados bastante satisfatórios no caso das misturas sintéticas contendo quantidades eqüimolares de componentes (nesse caso, foram testadas várias combinações de analitos e de interferentes) ou contendo interferentes, em concentrações cinco vezes maior que a do analito de interesse. Nos casos mais críticos em termos de interferências, recursos instrumentais ou quimiométricos foram aplicados para melhorar a seletividade e possibilitar a quantificação. Os métodos desenvolvidos foram testados em amostras simuladas de gasolina, em gasolina comercial e em uma matriz ambiental (sedimento) fortificadas com os analitos de interesse. As recuperações obtidas foram bastante satisfatórias e compreendidas entre 90% e 117%. Estudos envolvendo varreduras de fosforescência total (TPS) também foram realizados, com o intuito de se obter uma impressão digital característica para cada um dos analitos. Testes de TPS em gasolina comercial indicaram a presença de pelo menos seis dos sete analitos estudados, devido à obtenção de perfis espectrais muito semelhantes aos dos padrões. Testes adicionais mostraram a capacidade de identificar contaminações (misturas) na gasolina pela adição de diesel e de querosene. / [en] In this work, analytical methods based on room-temperature phosphorimetry were developed aiming the quantification of seven polycyclic aromatic compounds (PAC) containing sulfur and nitrogen present in petroleum. More specifically, the goal was to obtain analytical tool to allow the evaluation and the quantification of these PCA in sediment and gasoline. In addition, the phosphorimetric information displayed potential for the discrimination of samples (for instance, the identification of contaminated samples) by means of three dimension plots or level curves. The application of synchronized sweeping technique and the use of the selective external heavy atom effect had increased the degree of selectivity and discrimination between samples, since it induces phosphorescence from specific components of the sample and improved the spectral resolution of the results. Initially, a study of the phosphorescent characteristics of the compounds in different experimental conditions was made, followed of the signal maximization in the most appropriate experimental conditions for the observation of phosphorescence. Filter paper, previously treated for background reduction, was employed as solid substrate for the immobilization of analytes. The analytical figures of merit for each one of the methods had been obtained. The linear range varied between 1,0 x 10-7 mol L-1 and 5,0 x 10-4 mol L-1, taking into consideration the concentration of the solutions spotted on the substrate. The determination coefficient values (r2) were always above of 0.9784. The absolute limits of detection (5 µL sample) were in ng order, showing the sensitivity of the developed methods. The repeatability tests had enabled values varying between 12 and 18%, which can be considered satisfactory for solid substrate technique. Robustness and reproducibility studies were also carried out. Additionally, secondary experimental conditions, in terms of signal magnitude, were optimized since these could be relevant from the selective point of view. Recovery tests indicated, in most of the cases, satisfactory results for synthetic mixtures containing equimolar quantities of components (in these cases, several analyte/interferent combinations were tested) and containing interferents in concentrations five times higher than the one of the analytes. In the most critical cases in terms of interferences, instrumental or quimiometric approaches had been applied to improve selectivity and make the quantification possible. The developed methods had been tested in simulated gasoline samples, commercial gasoline and in a sediment sample fortified with the analytes of interest. The obtained recoveries had been considered satisfactory and within 90 and 117%. Total phosphorescence scanning (TPS) studies had been also carried out in order to get the characteristic fingerprint for each one of the compounds of interest. TPS tests in gasoline had indicated the presence of six out of seven of the studied analytes, since very similar fingerprints were obtained. Additional tests had demonstrated the capability of this procedure to detect gasoline contaminations with diesel or kerosene.

[pt] Neste trabalho foi avaliado o uso da Fosforimetria na Temperatura Ambiente em Substrato Sólido (FTASS) como técnica analítica aplicável na determinação de dois derivados da β-carbolina (harmane e harmine). Como suporte sólido foi utilizado o papel de filtro de baixo sinal de fundo. As características fosforescentes dos analitos foram estudadas em função de diversos parâmetros experimentais, que foram posteriormente otimizados visando a maximização do sinal fosforescente. Estes parâmetros foram: efeito de íons de átomos pesados; uso de surfactante como modificador de superfície; pH e volume de tampão; sistema de solventes e irradiação prévia das β-carbolinas com UV. As melhores situações para ambos os analitos foram obtidas em pH natural com a adição de Tl+ e em pH básico na presença de Ag+. Após a otimização das condições experimentais relevantes, os parâmetros analíticos de mérito foram obtidos. Para o harmane, faixas lineares dinâmicas (a partir do limite de quantificação, LQ) de 0,39 - 456 ng (Ag+/pH=12) e de 8,10 - 911 ng (Tl+/pH=7,7) foram obtidas. Para o harmine, a faixa linear dinâmica, partindo do LQ, foi de 0,59 - 1244 ng (dividido em duas faixas distintas) quando Ag+/pH=9 foi empregado. Com o uso de Tl+/pH=5,1, a faixa obtida foi de 0,53 a 249 ng. A precisão do método para as duas substâncias ficou dentro do esperado para esta técnica. Também foi estudado o potencial interferente de algumas substâncias (AZT, talidomida e outros) e da matriz urina. O desempenho do método foi testado através de testes de recuperação em formulações farmacêuticas simuladas e em urina enriquecida com o(s) analito(s), sendo as recuperações encontradas dentro da faixa recomendada de 90 a 110 %. Estudos envolvendo a determinação seletiva em misturas contendo ambos os derivados da β-carbolina mostraram a viabilidade da determinação seletiva de harmine na presença de harmane usando apenas um ajuste de pH. / [en] In the present work a Solid Surface Room-Temperature Phosphorimetry (SSRTP) based analytical method was developed aiming the determination of two â-carbolines derivatives (harmane and harmine). A low background filter paper was employed as solid support. The phosforimetric characteristics of the analytes were studied as function of several parameter, afterwards optimized aiming the maximization of phosphorescence. Among the studied parameters were the effect of heavy atom ions; the use of surfactants as substrate surface modifier; pH and volume of buffer; solvent system and the previuos UV irradiation of the analytes. The best results for both analytes were achieved using Tl+ in natural pH and using Ag+ in basic pH. After optimization of the relevant experimental conditions, the analytical figures of merit were obtained. For harmane, linear dynamic ranges (starting from the limit of quantification, LQ) from 0.39 to 456 ng (Ag+/pH=12) and from 8.10 to 911 ng (Tl+/pH=7.7) were achieved. For harmine, the linear dynamic ranges, stating from LQ, were from 0.59 to 1244 ng (divided in two linear ranges) when Ag+/pH=9 was used. When Tl+/pH=5.1 was employed, linear ranges were from 0.53 to 249 ng. The precision of the method was in accordance with the values expected for this technique. The potential interferent effect of some substances (AZT, thalidomide and others) as well as the effect of urine matrix were also studied. The performance of the method was evaluated by recovery tests using simulated pharmaceutical formulations and analyte spiked urine samples. In both cases, recoveries within the recomended range (from 90 to 110 %) were achieved. Studies involving the selective determination of â-carbolines derivatives have indicated that the determination of harmine in the presence of harmane is feasable only by a simple sample pH adjustment.