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Previous issue date: 2015-02-27 / Erros na reprogramação epigenética no embrião reconstruído pela técnica de
Transferência Nuclear de Célula Somática (TNCS) reduzem sua taxa de sucesso. A
sincronização do ciclo do oócito receptor com o da célula doadora foi descrito como
um dos principais fatores que contribuem para uma reprogramação adequada.
Extratos da planta Azadirachta indica A. Juss (Nim) demonstraram potencial para
inibir o ciclo de células cancerígenas e o crescimento de tumores, o que levou a
hipótese de que ele pode ser efetivo, também, em células somáticas doadoras de
núcleo para a clonagem. O presente trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos de
extratos de Nim sobre o ciclo de fibroblastos bovinos, bem como verificar se tais
tratamentos diminuem a viabilidade das células ou alteram a expressão de genes de
estresse e apoptose. Foram testadas quatro concentrações (50, 100, 200 e 300
oso, etanólico e hexânico, por 12 ou 24 horas de exposição,
utilizando um controle positivo (soroprivação) e um controle com
do ciclo e a reversibilidade foram analisadas por Citometria de Fluxo, a expressão
dos genes HSP70.1A, HSBP1, HSP27.P1, BAX, BCL-2 e WNT5A avaliada por PCR
em tempo real e a viabilidade celular por Azul de Tripan. Os resultados foram
submetidos à ANOVA e as médias comparadas pelo teste de Student Newman
Keuls, com valores de P<0,05 considerados significativos. Os tratamentos de 100 e
os únicos capazes
de sincronizar o ciclo das células em G0/G1 de forma reversível (88,59 ± 0,26% e
88,36 ± 0,32%, respectivamente), quando comparadas ao controle com mL
(81,89 ± 0,43%), apresentando redução de células em G0/G1 dentro das 12 horas
seguintes à exposição ao extrato. Apenas para estes tratamentos, portanto, foi
realizada a análise de viabilidade celular e expressão gênica. Para o grupo de
fibroblastos tratados com houve redução da viabilidade (50,16 ± 2,76%)
em relação aos demais, que foram semelhantes (P>0,05) entre si. Para os dois
tratamentos correu sub-expressão da maior parte dos genes, com exceção de
HSP27 HSP70 mL, quando estes foram comparados
ao controle com . Com isso, conclui-se que, dentre os tratamentos testados,
o melhor seria o extrato etanólico, a .
Portanto, este tratamento tem potencial para ser testado na produção de embriões
pela técnica de TNCS e contribuir para melhorar sua eficiência. / Errors in epigenetic reprogramming in reconstructed embryos by technique Somatic
Cell Nuclear Transfer (SCNT) reduce your success rate. The synchronization of the
receiver oocyte cycle with the donor cell was described as one of the main factors
that contribute to an appropriate reprogramming. Extracts of Azadirachta indica A.
Juss (Neem) have demonstrated potential to inhibit the cell cycle of cancerigens cells
and growth of tumors, which led to the hypothesis that it may be effective also in
nucleus donor somatic cell for cloning. This study aimed to evaluate the effects of
Neem extracts on cell cycle of bovine fibroblasts and verify if these treatments reduce
the viability of cells and change the expression of stress and apoptosis genes. Were
tested four concentrations (50, 100, 200 and 300 μg/mL) of the aqueous, ethanolic,
and hexane extract, by exposure to 12 or 24 hours, using a positive control (inhibition
serum starvation) and a control with 0 μg/ml . The inhibition and reversibility of cycle
were analyzed by Flow Cytometry, the expression of genes HSP70.1A, HSBP1,
HSP27.P1, BAX, BCL-2 and WNT5A evaluated by real-time PCR, and cell viability by
Trypan Blue. The results were subjected to analysis of variance and means were
compared by the Student Newman Keuls test, with values P<0.05 considered
significant. The treatments of 100 and 200 μg/ml of the ethanol extract, for 24 hours
of exposure, were able to synchronize the cell cycle in the G0/G1 (88,59 ± 0,26% and
88,36 ± 0,32%, respectively), compared to the control with 0 μg/ml (81.89 ± 0,43%),
being the only ones that were reversible, returning to cycle within 12 hours after the
removal of extract. Just these treatments, therefore, cell viability and gene
expression analysis was performed. For the group of fibroblasts treated with 200
μg/mL was reduced the viability (50,16 ± 2,76%) compared to the others, which were
similar (P>0.05) between them. For both treatments ran under expression of most
genes, with the exception of HSP27 to 100 μg/mL and HSP70 to 200 μg/mL, when
they have been compared to the control with 0 μg/mL. In conclusion, among the
treatments tested, the best was the ethanol extract, 100 μg/mL, for 24 hours of
exposure. Therefore, this treatment have potential to be tested in the production of
embryos by SCNT technique and helping to improve their efficiency.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:hermes.cpd.ufjf.br:ufjf/77 |
| Date | 27 February 2015 |
| Creators | Rabelo, Natana Chaves |
| Contributors | Camargo, Luiz Sérgio de Almeida, Raposo, Nádia Rezende Barbosa, Carvalho, Wanessa Araújo |
| Publisher | Universidade Federal de Juiz de Fora, Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas: Imunologia e Doenças Infecto-Parasitárias/Genética e Biotecnologia, UFJF, Brasil, ICB – Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFJF, instname:Universidade Federal de Juiz de Fora, instacron:UFJF |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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