Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2015-12-03T14:40:27Z No. of bitstreams: 1 thamirisdornelasdearaujo.pdf: 2561728 bytes, checksum: fff1785edaa93117a2f0ca8fea98bc43 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2015-12-03T14:42:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 thamirisdornelasdearaujo.pdf: 2561728 bytes, checksum: fff1785edaa93117a2f0ca8fea98bc43 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-03T14:42:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 thamirisdornelasdearaujo.pdf: 2561728 bytes, checksum: fff1785edaa93117a2f0ca8fea98bc43 (MD5) Previous issue date: 2015-02-26 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / As mudanças climáticas constituem ameaça às espécies e à sustentabilidade financeira dos sistemas de produção. Estudos preliminares mostraram que embriões bovinos submetidos ao choque térmico apresentam níveis diferenciados de heterocromatina, o que pode comprometer o desenvolvimento. Algumas substâncias interferem na estrutura da cromatina ou na metilação do DNA e podem influenciar os eventos epigenéticos do desenvolvimento embrionário. O objetivo do trabalho foi avaliar o efeito de 5-aza-2’-deoxycytidine na produção de embriões bovinos utilizando oócitos submetidos ao choque térmico. Oócitos de vacas de abatedouro foram maturados em TCM-199+10% soro de vaca em cio e distribuídos em: experimento 1(NHS, sem choque térmico) - 5%CO2 e 38,5ºC 24h; experimento 2 (HS, choque térmico) - 6,5-7,0%CO2 e 41,5ºC 12h + 12h em 5%CO2 e 38,5ºC. Foi realizada FIV em FERT-TALP por 20h nas condições convencionais de maturação. Procedeu-se o cultivo em CR2aa+2,5%SFB a 38,5ºC, 5%CO2 e 5%O2 por 8 dias. Em cada experimento os embriões foram divididos nos seguintes tratamentos: sem adição de 5-aza (NHS ou HS - Controles), expostos a 5-aza (10nM) por 24h (NHS24h ou HS24h) ou por 48h (NHS48h ou HS48h). Após exposição à droga os embriões foram cultivados em meio idêntico ao de NHS e HS até completarem o desenvolvimento. O estágio de desenvolvimento e a taxa de embriões foram avaliados nos dias 3 (D3), 7 (D7) e 8 (D8), e blastocistos D8 foram avaliados por TUNEL quanto à taxa apoptótica. Embriões D2 e D3 foram submetidos à imunofluorescência para marcação de HP1β. Não houve diferença na clivagem dos dois experimentos. O percentual de embriões com 8 células em D3 foi menor em todos os grupos tratados com 5-aza. Menores taxas de blastocistos em D7 e D8 foram obtidas no tratamento NHS48h. Menores taxas de blastocistos foram produzidas em D7 e D8 para HS24h e HS48h. O número de células totais e da massa celular interna dos blastocistos não diferiu entre os grupos dos dois experimentos. O índice apoptótico nos grupos do experimento 1 foi similar, e no experimento 2 ocorreu diferença apenas entre os grupos HS24h e HS48h. O índice apoptótico da massa celular interna não diferiu nos dois experimentos. O uso de 5- aza não influencia as taxas de clivagem em D3, mas a longa exposição reduz as taxas de blastocistos. Associado ao choque térmico, 5-aza reduz as taxas de blastocistos independente do tempo de exposição. No entanto, não houve injúrias celulares detectáveis nos embriões que se desenvolveram a blastocisto. A intensidade do sinal para heterocromatina em embriões com 4-7 células foi similar entre os grupos, o percentual de núcleos não marcados foi baixo e NHS24h marcou mais núcleos fortemente. Embriões de 8-16 células apresentaram redução na intensidade do sinal quando expostos a 5-aza, o que não ocorre nos embriões de choque térmico, com intensidades similares a NHS, e 5-aza não tem aparente efeito sobre a presença de HP1β. Mudanças nos padrões de eucromatina e heterocromatina nos embriões de choque térmico podem estar relacionadas a uma ativação do genoma embrionário mais complexa, reduzindo a produção de blastocistos. / Climate changes is a threat to the species and the financial sustainability of the production systems. Preliminary studies showed that bovine embryos submitted to heat shock presented differentiated levels of heterochromatin, which can compromise the development. Some substances interfere in the chromatin structure or DNA methylation can influence the epigenetic events of embryonic development. The objective of this work was to evaluate the effect of 5-aza-2'deoxycytidine in the production of bovine embryos using oocytes submitted to heat shock. Oocytes of slaughterhouse cows were matured in TCM-199 + 10% serum cow in heat and distributed on: experiment 1 (NHS without heat shock) - 5%CO2 and 38.5ºC 24h; experiment 2 (HS with heat shock) - 6.5-7.0%CO2 and 41.5ºC 12h + 12h in 5%CO2 and 38.5ºC. IVF was performed in FERT-TALP for 20h in conventional maturation conditions. The cultivation was performed in CR2aa+2.5%FBS a 38.5ºC, 5%CO2 and 5%O2 for 8 days. In each experiment, the embryos were divided into the following treatments: without addition of 5-aza (NHS or HS - Controls), exposed to 5- aza(10nm) for 24h (or NHS24h or HS24h) or 48h (or NHS48h or HS48h). After exposure to the drug, embryos were cultivated in the same NHS and HS to complete development. The development stage and the rate of embryos were evaluated at day 3 (D3), 7 (D7) and 8 (D8), and blastocysts were evaluated by TUNEL as the apoptotic rate. Embryos D2 and D3 were submitted to immunofluorescence for marking HP1β. There was no difference in the cleavage of the two experiments. The percentage of 8-cell embryos D3 was lower in all the groups treated with 5-aza. Lower blastocyst rates were obtained in treatment NHS48h. Lower blastocysts rates were produced in D7 and D8 to HS24h and HS48h.The number of total cells and the inner cell mass of blastocysts was similar between groups in the two experiments. The apoptotic index in experimental group 1 was similar, and in experiment 2 occurred only difference between HS24h and HS48h groups. The apoptotic index of the inner cell mass did not differ in both experiments. The use of 5-aza do not affect the cleavage rates in D3, but the long exposition reduces blastocyst rates. Associated with heat shock, 5-aza reduces blastocyst rates independent of the exposition time. However, there was no detectable cell injury in embryos that developed to blastocyst. The intensity of the signal for heterochromatin in embryos with 4-7 cells was similar between the groups, the percentage of HP1β negative nucleus was low and more nucleus were exhibiting increased HP1β signal in NHS24h. 8-16 cell embryos present a reduction of signal intensity when exposed to 5-aza, which does not occur in the heat shock embryos with similar intensities to NHS, and 5-aza has apparently no effect on HP1β levels. Changes in euchromatin and heterochromatin patterns in the heat shock embryos may be related to a complex EGA related to those groups, which might be related to lower blastocyst rate.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2015-12-04T16:57:41Z No. of bitstreams: 1 cynthiaelainedeoliveira.pdf: 2251347 bytes, checksum: 0237faa67ec7e2daece33f180b29cd01 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2015-12-07T03:22:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cynthiaelainedeoliveira.pdf: 2251347 bytes, checksum: 0237faa67ec7e2daece33f180b29cd01 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-07T03:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cynthiaelainedeoliveira.pdf: 2251347 bytes, checksum: 0237faa67ec7e2daece33f180b29cd01 (MD5) Previous issue date: 2015-05-07 / O teste de Allium cepa L. tem sido rotineiramente empregado para a avaliação de ecotoxicologia e prospecção de efeitos biológicos. A estratégia mais comum associada ao teste é a análise de parâmetros citogenéticos, tais como índice mitótico e percentual de alterações cromossômicas. O uso da citometria de fluxo para a análise de citogenotoxidade e mutagênese em A. cepa ainda é um aspecto pouco explorado. Diante disto, o presente trabalho teve como objetivo estabelecer parâmetros de citometria de fluxo para a análise de citogenotoxidade em A. cepa, utilizando como agente mutagênico o cloreto de sódio. Bulbos de A. cepa foram expostos em água destilada por um período mínimo de 24 horas e em seguida submetidos às concentrações de cloreto de sódio (0; 31,25; 62,5; 125; 250 e 500mM) por 2, 4, 8, 12 e 24 horas. O cloreto de sódio foi utilizado por ser conhecido na literatura como indutor de morte celular em plantas. Os parâmetros considerados na citometria de fluxo foram: intensidade de fluorescência, FSC (tamanho nuclear) e SSC (complexidade nuclear). Já na análise citogenética, os parâmetros avaliados foram índice mitótico (IM) e alterações cromossômicas. Foi realizado ensaio cometa nos tratamentos expostos por 24 horas para a averiguação de fragmentação do DNA. Células controle foram caracterizadas quanto ao tamanho nuclear, por meio de técnicas citogenéticas e pela citometria de fluxo. Houve redução no IM com o aumento da concentração e tempo de exposição aos tratamentos. Da mesma forma, os resultados de citometria de fluxo indicaram uma diminuição gradual significativa no percentual de células em G1, S e S + G2. Nos tratamentos com índice mitótico próximo ou igual a zero foram observadas características de morte celular, como condensação do núcleo (diminuição do FSC e intensidade de fluorescência) e fragmentação do material genético (aumento de sub-G1 e coeficiente de variação); esta fragmentação também foi observada no ensaio cometa. Os resultados da análise de complexidade interna (SSC) foram inversamente proporcionais aos dados de tamanho nuclear (FSC), indicando que a condensação da cromatina ocorre de maneira irregular. Diante dos resultados, pode-se identificar que estes parâmetros de citometria de fluxo podem ser utilizados com segurança na avaliação de morte celular em A. cepa, considerando as características de condensação do núcleo e fragmentação do DNA. Curiosamente, em todas as análises a concentração 62,5mM de NaCl se destacou por apresentar um elevado percentual de c-metáfases e algumas metáfases poliploidizadas. Esta mesma concentração foi testada quanto à capacidade de induzir c-metáfases em células de alface e tomate e os resultados sugerem o cloreto de sódio como potencial agente antimitótico. / Allium cepa L. assay has been routinely used for the evaluation of ecotoxicology and prospecting of biological effects. The most common strategy associated with this test is the analysis of cytogenetic parameters such as mitotic index and percentage of chromosomal abnormalities. The use of flow cytometry for cytogenotoxicity and mutagenesis analysis in A. cepa is still an unexplored aspect. The present work aims to establish parameters from flow cytometry for cytogenotoxicity analysis in the Allium cepa test using with mutagen, sodium chloride. A. cepa bulbs were exposed in distilled water for a minimum of 24 hours and then exposed to the concentrations of sodium chloride (0, 31.25, 62.5, 125, 250, and 500mM) for 2, 4, 8, 12 and 24 hours. The sodium chloride was used because it is known in the literature as an inducer of cell death in plants. The parameters considered in flow cytometry were: fluorescence intensity, FSC (nuclear diameter) and SSC (nuclear complexity). In the cytogenetic analysis, the parameters evaluated were: mitotic index (MI) and chromosomal alterations. Comet assay was carried out in treatments exposed for 24 hours to the investigation of DNA fragmentation. Control cells were characterized by nuclear size, either by cytogenetic as by flow cytometry. A decrease in the percentage of dividing cells was observed in a dose-time dependent. Likewise, the results of flow cytometry showed significant decrease in the percentage of cells in G1, S and S + G2. In the treatments with mitotic index equal or close to zero features of cell death were observed as nuclei condensation (decrease of the FSC and fluorescence intensity) and fragmentation of genetic material (increased sub-G1 and coefficient of variation); this fragmentation was also viewed by comet assay. The results of analysis of internal complexity (SSC) were inversely proportional to the FSC data indicating that chromatin condensation occurs irregularly in the nuclear membrane. From the results, you can identify those parameters that flow cytometry can be used safely in assessing cell death in A. cepa, considering the characteristics of the nucleus condensation and DNA fragmentation. Interestingly, in all analyzes the NaCl concentration 62,5mM stood out with a high percentage of c-metaphase and some polyploid metaphase. This same concentration was tested for ability to induce c-metaphases lettuce and tomato cells and the results suggest the potential sodium chloride as antimitotic agent.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2015-12-02T17:27:23Z No. of bitstreams: 1 raquelmoraisdepaiva.pdf: 1569486 bytes, checksum: 7ddf7a46c894d89e5e6cc6cccac8350e (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: Título maiúsculo on 2015-12-03T11:34:10Z (GMT) / Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2015-12-03T11:47:25Z No. of bitstreams: 1 raquelmoraisdepaiva.pdf: 1569486 bytes, checksum: 7ddf7a46c894d89e5e6cc6cccac8350e (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: Palavras-chave: primeira letra de cada palavra em maiúsculo. Acrescentar uma em cada linha (não precisa colocar ponto e nem vírgula no final) on 2015-12-03T12:00:49Z (GMT) / Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2015-12-03T13:29:45Z No. of bitstreams: 1 raquelmoraisdepaiva.pdf: 1569486 bytes, checksum: 7ddf7a46c894d89e5e6cc6cccac8350e (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2015-12-03T13:58:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 raquelmoraisdepaiva.pdf: 1569486 bytes, checksum: 7ddf7a46c894d89e5e6cc6cccac8350e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-03T13:58:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 raquelmoraisdepaiva.pdf: 1569486 bytes, checksum: 7ddf7a46c894d89e5e6cc6cccac8350e (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / O estudo de diversidade genética é importante na caracterização de populações de espécies vegetais como forrageiras. O aumento da produtividade é um objetivo constante do melhoramento das forrageiras e depende diretamente da diversidade genética existente. O Azevém (Lolium multiflorum Lam.) é uma forragem de inverno, muito utilizada para o gado devido à sua alta palatabilidade, digestibilidade e resistência ao pisoteio. A espécie é proveniente da Europa e, largamente utilizada no Sul do Brasil. Como parte do Programa de Melhoramento de Azevém da Embrapa Gado de Leite o presente trabalho teve como objetivo principal estimar a diversidade genética de 32 populações de azevém. O DNA de 628 indivíduos foi extraído, e marcadores microssatélites obtidos por amplificação cruzada foram utilizados. Um dendrograma foi gerado pelo algoritmo UPGMA, usando-se o software NTSYS, através do coeficiente de similaridade de Dice. Dentre os trinta e cinco pares de primers testados, vinte e cinco (71,5%) apresentaram amplificação cruzada em L. multiflorum, demonstrando a eficiência de utilização de marcadores desenvolvidos para espécies proximamente relacionadas. Quinze marcadores foram selecionados com base no sucesso da amplificação cruzada e maior número de polimorfismos. Os valores da matriz de coeficientes de similaridade obtidos variaram de 0,43 a 0,93. Observou-se a presença de divergência genética entre as populações, indicando que elas possuem uma ampla base genética. Este resultado está de acordo com a extensa distribuição geográfica e com o sistema alógamo de reprodução da espécie. / The genetic diversity estimation is important to characterize plant populations including forage species. The increase of productivity is a constant objective in forage breeding programs and is directly dependent of the genetic diversity. The ryegrass (Lolium multiflorum Lam.) is a winter grass, widely used for cattle due to its high palatability, digestibility and resistance to trampling. The species was introduced from Europe and is widely used in southern Brazil. As part of The Embrapa Dairy Cattle Ryegrass Breeding Program, the present work aimed to estimate the genetic diversity among 32 ryegrass populations. The DNA of 628 individuals was extracted and microsatellite markers obtained by cross amplification were used. A dendrogram was generated by UPGMA algorithm, using NTSYS software and Dice’s similarity coefficient. Among the thirty-five pairs of tested primers, twenty five (71.5%) showed cross amplification in L. multiflorum, demonstrating the efficiency of using cross amplification of microsatellite markers from related species. Fifteen markers were chosen based on the cross amplification success and the level of polymorphism. The values of similarity coefficient matrix varied from 0.43 to 0.93. Genetic divergence among the populations was observed, indicating that the populations possess a wide genetic base. This result corroborates the wide geographical distribution and the allogamous reproduction system previously reported for the species.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2015-12-09T13:39:55Z No. of bitstreams: 1 ernestodasilveiragoulartguimaraes.pdf: 2498729 bytes, checksum: 6d75444a1433ed6c93931367c98d37a4 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2015-12-09T13:51:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ernestodasilveiragoulartguimaraes.pdf: 2498729 bytes, checksum: 6d75444a1433ed6c93931367c98d37a4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-09T13:51:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ernestodasilveiragoulartguimaraes.pdf: 2498729 bytes, checksum: 6d75444a1433ed6c93931367c98d37a4 (MD5) Previous issue date: 2015-03-11 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A doença obstrutiva pulmonar crônica é quarta maior causa de morte no mundo. Abordagens utilizando a engenharia de tecidos para tratar tal condição estão ganhando destaque na comunidade acadêmica. Uma fonte viável de células-tronco pluripotentes, assim como protocolos de diferenciação altamente eficientes são necessários para dar sustentação à regeneração do tecido alveolar lesados. O cultivo de células-tronco embrionárias microencapsuladas em hidrogéis tridimensionais em microgravidade modelada recentemente mostrou ser mais eficaz para a diferenciação de células epiteliais alveolares que protocolos bidimensionais padrões. Tendo em vista este protocolo, o objetivo deste trabalho foi de avaliar a influencia de uma nova matriz de encapsulamento feita de colágeno tipo I comparado à matriz de encapsulamento padrão de alginato para diferenciação e crescimento de células tronco embrionárias de camundongos (E14 12 delta S) para um fenótipo de células epiteliais alveolares, utilizando meio condicionado de células A549 como indutor de diferenciação. Foi realizada a caracterização físico-química do novo material hidrogélico (deformação por secagem, percentual de água, análise topográfica e cinética de transporte molecular), determinação do crescimento dos agregados celulares e o numero total final de células viáveis ao final do experimento. Foram analisamos marcadores gênicos de diferenciação para endoderme (FOXA2, SOX17 e CXCR4) e tecido epitelial pulmonar (SPA, SPB e SPC) na metade e ao final do experimento. O novo material apresentou uma capacidade aprimorada de transporte de massas devido à natureza de sua estrutura mais porosa e hidrofílica, com fibras aparentes bem definidas. As células apresentaram uma maior curva de crescimento dentro do novo material assim como maior numero total de células viáveis ao final do experimento. A análise genética de marcadores de endoderme mostrou que a nova matriz de colágeno propicia uma aparente diferenciação mais rápida em endoderme que na matriz de alginato, assim como, inicia mais rapidamente a expressão aparente de marcadores de células epiteliais alveolares (SPA e SPB, mas não SPC). Este trabalho mostra que microcápsulas de colágeno tipo I são aparentemente uma matriz melhor para crescimento e diferenciação em microgravidade modelada de células-tronco embrionárias para a produção in vitro de células epiteliais alveolares. Palavras / Chronic obstructive pulmonary disease is the fourth leading cause of death worldwide. Approaches using tissue engineering to treat this condition have recently gained prominence in the academic community. A viable source of pluripotent stem cells, as well as highly efficient differentiation protocols is needed to support the regeneration of injured alveoli. Culture of embryonic stem cells in three-dimension microencapsulated hydrogels in modeled microgravity has recently been shown to be more effective for the differentiation of alveoli epithelium cells than standard two-dimensional protocols. Given this protocol, the aim of this study was to evaluate the influence of a new encapsulation matrix made of collagen type I compared to standard encapsulation material of alginate for the differentiation and growth of mouse embryonic stem cells (E14 12 delta S) towards alveoli epithelium phenotype using A549-cells conditioned medium as inducer of the differentiation. Was performed a physical-chemical characterization of the new hydrogel material (drying deformation, water percentage, topographical analysis and molecular transport kinetics analysis) as well as the growth of cellular aggregates and total number of viable cells at the end of the experiment. Gene markers were analyzed for endoderm differentiation (FOXA2, SOX17 and CXCR4) and alveoli epithelial tissue (SPA, SPB and SPC) at the middle and at the end of the experiment. The new material shows an enhanced mass transport ability due to its own porously and hydrophilic structure nature with well-defined apparent fibers. Cells exhibited a higher growth curve as well as a higher total number of viable cells at the end of the experiment. Genetic analysis for markers of endoderm showed that new collagen matrix apparently provides a faster endoderm differentiation than the alginate matrix, and starts the apparent expression of alveolar epithelium markers (SPA and SPB, but not SPC) sooner. This work showed that collagen type I microcapsules are apparently a better matrix for growth and differentiation in modeled microgravity of embryonic stem cells for in vitro production of alveolar epithelial cells.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2015-12-04T17:40:43Z No. of bitstreams: 1 sabinewohlresviana.pdf: 8250469 bytes, checksum: d5749466ebaf01dd23c74317cbef4a6a (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2015-12-07T03:23:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sabinewohlresviana.pdf: 8250469 bytes, checksum: d5749466ebaf01dd23c74317cbef4a6a (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-07T03:23:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sabinewohlresviana.pdf: 8250469 bytes, checksum: d5749466ebaf01dd23c74317cbef4a6a (MD5) Previous issue date: 2015-01-27 / O objetivo geral deste estudo foi investigar variações genômicas e transcriptômicas do receptor de hormônio luteinizante (LHR) e seu papel nos processos de dominância folicular e resposta à superovulação em bovinos. Foram realizados três experimentos, sendo que em todos se utilizou cDNA sintetizado a partir do RNA total extraído de células da granulosa (CG) folicular. Para a caracterização do transcrito do LHR, CG foram recuperadas de folículos dominantes de vacas das raças Gir (n=16) e Holandês (n=16). Após a PCR e o sequenciamento, os dados foram analisados para a presença de polimorfismos, frequência alélica, conteúdo de informação polimórfica (PIC) e Equilíbrio de Hardy-Weinberg (HWE). Vinte e um polimorfismos de base única (SNPs) foram identificados, sendo 17 em Gir e 14 em Holandês. A classificação dos SNPs de acordo com os valores de PIC identificou 12 como altamente informativos em Gir e cinco em Holandês. Em relação a HWE, oito SNPs não estavam em equilíbrio em Gir e 10 em Holandês. Duas isoformas derivadas de splicing alternativo também foram identificadas, uma no éxon 1 e outra no éxon 10. Conclui-se que o LHR em bovinos leiteiros apresenta uma alta frequência de polimorfismos e múltiplas isoformas. Para avaliar o papel das isoformas do LHR nas CG durante a divergência folicular, a emergência da onda folicular foi sincronizada em novilhas Gir (n=10) e Holandês (n=10) e os folículos foram aspirados individualmente em diâmetros correspondentes aos períodos de pré-divergência, divergência, e pós-divergência. A expressão relativa das isoformas de LHR foi determinada por PCR em Tempo Real e os resultados foram relacionados com as concentrações intrafoliculares de estradiol (E2if). Em ambas as raças, houve um aumento progressivo na concentração de E2if ao longo do desenvolvimento folicular. O E2if foi maior em Holandês quando comparado com Gir antes, durante, e depois da divergência; mas foi similar em folículos de mesmo diâmetro nas duas raças. Observou-se um pico de expressão de LHR total após o início da divergência folicular. A expressão das isoformas de LHR foi ou baixa (Holandês) ou sub-regulada (Gir) durante este mesmo período. Os resultados sugerem que a divergência precoce do folículo dominante em raças de Bos indicus podem estar relacionados à maior sensibilidade ao feedback negativo do estradiol. Além disso, mudanças sequenciais na expressão das isoformas de LHR podem regular a função do LHR durante da divergência folicular em bovinos. A avaliação do comportamento das isoformas de LHR durante a indução exógena do crescimento folicular foi realizada em novilhas Gir caracterizadas com boa (n=5) ou má (n=5) resposta à superovulação. Em ambos os grupos, foram coletadas CG de folículos (8 mm) cujo crescimento ocorreu sem (Controle) ou com estimulação por FSH (SOV). No grupo de boa resposta, não houve diferença na expressão de LHR total entre os tratamentos Controle e SOV. No grupo de má resposta, a expressão de LHR total foi menor em SOV comparado com Controle, mas não houve diferença na expressão das isoformas. Conclui-se que o LHR é diferencialmente expresso em folículos dominantes de novilhas caracterizadas com boa ou má resposta a superovulação. / The aim of this study was to evaluate genomic and transcriptomic variations at the luteinizing hormone receptor (LHR) and its role at the follicular dominance establishment and superovulation outcome in bovine. Three experiments were performed, and for all evaluations cDNA synthesized from total RNA extracted from follicular granulosa cells (GC) were used. To characterize the LHR transcript, GC were recovered from dominant follicles from Gir (n=16) and Holstein (n=16) cows. After PCR and sequencing, data were analized to identify polymorphisms, allelic frequency, polymorphic information content (PIC) and Hardy-Weinberg Equilibrium (HWE). Twenty one single nucleotide polymorphism (SNP) were identified, being 17 in Gir and 14 in Holstein. The classification of SNP according to PIC values identified 12 as highly informative in Gir and five in Holstein. Considering HWE, eight SNP were not in equilibrium in Gir and 10 in Holstein. Two isoforms were also identified, one in exon 1 and other in exon 10. We concluded that LHR in dairy cattle shows a high frequency of polymorphism and multiple isoforms. To evaluate the LHR isoforms role in GC during follicular divergence, the follicular wave emergence was synchronized in Gir (n=10) and Holstein (n=10) heifers and follicles were individually aspirated at the corresponding sizes of pre-, divergence, and post-. The relative expression of LHR isoforms was determined by real time PCR and results were correlated to the intrafollicular estradiol (E2if) concentrations. In both breeds, there was a progressive increase in E2if concentration during follicular development. The E2if in Holstein was higher when compared to Gir before, during, and after divergence; but was similar in follicles of same size in both breeds. We observed a peak for the total LHR expression after the beginning of the follicular divergence. The expression of LHR isoforms was low (Holstein) or under-regulated (Gir) during this same period. The results suggest that the early follicular divergence of the dominat follicle in Bos indicus breeds can be related to a higher sensitivity to the estradiol negative feedback. Besides, sequential changes in LHR isoforms expression can act regulating the LHR function during folicullar divergence in bovine. The evaluation of LHR isoforms behavior during the exogenous induction of follcilualr development was performed in Gir heifer previously characterized as good (n=5) or poor (n=5) responders to superovulation. In both groups, GC were collected from follicles (8 mm) which growth occurred without (Control) or with FSH stimulation (SOV). In good responders group, there was no difference in the LHR expression between the Control and SOV treatments. In the poor responders group, the total LHR expression was lower in SOV when compared to Control, but there was no difference in the expression of the isoforms. We concluded that LHR is differentially expressed in dominant follicles from heifers characterized as good or poor responders to superovulation.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2015-12-02T18:48:24Z No. of bitstreams: 1 natanachavesrabelo.pdf: 1986585 bytes, checksum: 916ff1701b2aae3c4a92119e278425b5 (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: Título: somente primeira letra da primeira palavra em maiúsculo e nomes próprios também. Palavras-chave: acrescentar uma em cada linha (não precisa colocar ponto e nem vírgula no final) on 2015-12-03T11:57:13Z (GMT) / Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2015-12-03T12:40:30Z No. of bitstreams: 1 natanachavesrabelo.pdf: 1986585 bytes, checksum: 916ff1701b2aae3c4a92119e278425b5 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2015-12-03T13:57:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 natanachavesrabelo.pdf: 1986585 bytes, checksum: 916ff1701b2aae3c4a92119e278425b5 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-03T13:57:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 natanachavesrabelo.pdf: 1986585 bytes, checksum: 916ff1701b2aae3c4a92119e278425b5 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Erros na reprogramação epigenética no embrião reconstruído pela técnica de Transferência Nuclear de Célula Somática (TNCS) reduzem sua taxa de sucesso. A sincronização do ciclo do oócito receptor com o da célula doadora foi descrito como um dos principais fatores que contribuem para uma reprogramação adequada. Extratos da planta Azadirachta indica A. Juss (Nim) demonstraram potencial para inibir o ciclo de células cancerígenas e o crescimento de tumores, o que levou a hipótese de que ele pode ser efetivo, também, em células somáticas doadoras de núcleo para a clonagem. O presente trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos de extratos de Nim sobre o ciclo de fibroblastos bovinos, bem como verificar se tais tratamentos diminuem a viabilidade das células ou alteram a expressão de genes de estresse e apoptose. Foram testadas quatro concentrações (50, 100, 200 e 300 oso, etanólico e hexânico, por 12 ou 24 horas de exposição, utilizando um controle positivo (soroprivação) e um controle com do ciclo e a reversibilidade foram analisadas por Citometria de Fluxo, a expressão dos genes HSP70.1A, HSBP1, HSP27.P1, BAX, BCL-2 e WNT5A avaliada por PCR em tempo real e a viabilidade celular por Azul de Tripan. Os resultados foram submetidos à ANOVA e as médias comparadas pelo teste de Student Newman Keuls, com valores de P<0,05 considerados significativos. Os tratamentos de 100 e os únicos capazes de sincronizar o ciclo das células em G0/G1 de forma reversível (88,59 ± 0,26% e 88,36 ± 0,32%, respectivamente), quando comparadas ao controle com mL (81,89 ± 0,43%), apresentando redução de células em G0/G1 dentro das 12 horas seguintes à exposição ao extrato. Apenas para estes tratamentos, portanto, foi realizada a análise de viabilidade celular e expressão gênica. Para o grupo de fibroblastos tratados com houve redução da viabilidade (50,16 ± 2,76%) em relação aos demais, que foram semelhantes (P>0,05) entre si. Para os dois tratamentos correu sub-expressão da maior parte dos genes, com exceção de HSP27 HSP70 mL, quando estes foram comparados ao controle com . Com isso, conclui-se que, dentre os tratamentos testados, o melhor seria o extrato etanólico, a . Portanto, este tratamento tem potencial para ser testado na produção de embriões pela técnica de TNCS e contribuir para melhorar sua eficiência. / Errors in epigenetic reprogramming in reconstructed embryos by technique Somatic Cell Nuclear Transfer (SCNT) reduce your success rate. The synchronization of the receiver oocyte cycle with the donor cell was described as one of the main factors that contribute to an appropriate reprogramming. Extracts of Azadirachta indica A. Juss (Neem) have demonstrated potential to inhibit the cell cycle of cancerigens cells and growth of tumors, which led to the hypothesis that it may be effective also in nucleus donor somatic cell for cloning. This study aimed to evaluate the effects of Neem extracts on cell cycle of bovine fibroblasts and verify if these treatments reduce the viability of cells and change the expression of stress and apoptosis genes. Were tested four concentrations (50, 100, 200 and 300 μg/mL) of the aqueous, ethanolic, and hexane extract, by exposure to 12 or 24 hours, using a positive control (inhibition serum starvation) and a control with 0 μg/ml . The inhibition and reversibility of cycle were analyzed by Flow Cytometry, the expression of genes HSP70.1A, HSBP1, HSP27.P1, BAX, BCL-2 and WNT5A evaluated by real-time PCR, and cell viability by Trypan Blue. The results were subjected to analysis of variance and means were compared by the Student Newman Keuls test, with values P<0.05 considered significant. The treatments of 100 and 200 μg/ml of the ethanol extract, for 24 hours of exposure, were able to synchronize the cell cycle in the G0/G1 (88,59 ± 0,26% and 88,36 ± 0,32%, respectively), compared to the control with 0 μg/ml (81.89 ± 0,43%), being the only ones that were reversible, returning to cycle within 12 hours after the removal of extract. Just these treatments, therefore, cell viability and gene expression analysis was performed. For the group of fibroblasts treated with 200 μg/mL was reduced the viability (50,16 ± 2,76%) compared to the others, which were similar (P>0.05) between them. For both treatments ran under expression of most genes, with the exception of HSP27 to 100 μg/mL and HSP70 to 200 μg/mL, when they have been compared to the control with 0 μg/mL. In conclusion, among the treatments tested, the best was the ethanol extract, 100 μg/mL, for 24 hours of exposure. Therefore, this treatment have potential to be tested in the production of embryos by SCNT technique and helping to improve their efficiency.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2015-12-04T11:30:17Z No. of bitstreams: 1 marianamacedodealmeida.pdf: 4650594 bytes, checksum: 73217ac8cb6474bd22ccc88955919c7c (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2015-12-07T03:19:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marianamacedodealmeida.pdf: 4650594 bytes, checksum: 73217ac8cb6474bd22ccc88955919c7c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-07T03:19:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marianamacedodealmeida.pdf: 4650594 bytes, checksum: 73217ac8cb6474bd22ccc88955919c7c (MD5) Previous issue date: 2015-03-04 / A prevalência de sobrepeso e obesidade está crescendo em taxa alarmante no mundo. Essas condições fornecem maior risco para doenças crônicas, incluindo diabetes tipo 2. Nesse contexto, o ácido linoléico conjugado (CLA) tem atraído considerável atenção, principalmente devido às suas propriedades antiobesidade e antidiabética. O presente estudo objetivou avaliar de forma independente os efeitos do CLA proveniente de fontes natural e sintética sobre o risco de obesidade, sensibilidade à insulina e perfil de lipídeos séricos. Cinquenta ratos Wistar machos foram atribuídos aos seguintes tratamentos dietéticos (n=10/ grupo), por 60 dias: Controle Normolipídico (CN): dieta contendo 4,0% de óleo de soja (OS); Manteiga Controle (MC): dieta contendo 21,7% de manteiga padrão e 2,3% de OS; Manteiga enriquecida com CLA (M-CLA): dieta contendo 21,7% de manteiga enriquecida com CLA cis-9, trans-11 e 2,3% de OS; Controle Hiperlipídico (CH): dieta contendo 24,0% de OS e CLA Sintético (S-CLA): dieta contendo 1,5% de mistura de isômeros de CLA (Luta-CLA 60) e 22,5% de OS. Os animais alimentados com M-CLA tiveram menores níveis de insulina em jejum do que aqueles alimentados com dieta MC, enquando os níveis de PPARγ no tecido adiposo foram aumentados no grupo M-CLA comparado com o grupo MC. Além disso, R-QUICK foi menor nos animais alimentados com MC do que naqueles alimentados com CN, enquanto nenhuma diferença no R-QUICK foi observada entre os grupos CN e M-CLA. Os níveis de colesterol HDL e triglicérides foram maiores nos ratos alimentados com CLA-M. Portanto, a manteiga alto CLA preveniu a hiperinsulinemia, aumentou o colesterol HDL e causou hipertrigliceridemia. A dieta S-CLA não teve efeito sobre a ingestão alimentar e composição alimentar. Os ratos alimentados com S-CLA apresentaram menores níveis da proteína PPARγ no tecido adiposo, hiperinsulinemia, hiperglicemia, índice de HOMA aumentado e maiores níveis de colesterol HDL. Portanto, cautela deve ser tomada antes que suplemetos sintéticos contendo CLA cis-9, trans-11 e CLA trans- 10, cis-12 sejam recomendados. / The prevalence of overweight and obesity is increasing at an alarming rate. These conditions are a major risk for chronic diseases, including type 2 diabetes. In this context, conjugated linoleic acid (CLA) has attracted considerable attention, mainly due to its anti-obesity and anti-diabetic properties. The present study aimed to independently evaluate the effects of CLA from natural and synthetic sources on obesity risk, insulin sensibility and profile of serum lipids. Fifty male Wistar rats were assigned to the following dietary treatments (n=10/group), for 60 days: Normolipidic Control (CN): diet containing 4.0% soybean oil (SO); Control Butter (MC): diet containing 21.7% standard butter and 2.3% SO; and CLA enriched Butter (M-CLA): diet containing 21.7% cis-9, trans-11 CLA-enriched butter and 2.3% SO; Hyperlipidic Control (CH), diet containing 24.0% SO; Synthetic CLA (S-CLA), diet containing 1.5% of an isomeric CLA mixture (Luta-CLA 60) and 22.5% SO. M-CLA-fed rats had lower serum insulin levels at fasting than those fed with the MC diet, while the PPARγ protein levels in adipose tissue was increased in M-CLA-fed rats compared to MCfed rats. Furthermore, R-QUICK was lower in MC than in CN group, while no differences in R-QUICK were observed among CN and M-CLA. Serum HDL cholesterol and triacylglycerol levels were higher in M-CLA-fed rat. Thus, feeding rats on a high-fat diet containing butter naturally enriched in cis-9, trans-11 CLA prevented hyperinsulinemia, increased HDL cholesterol levels and caused hypertriglyceridemia. The S-CLA diet had no effect on dietary intake and body composition. S-CLA-fed rats had lower levels of PPARγ protein in adipose tissue, hyperinsulinemia, hyperglycemia, increased HOMA index and higher levels of serum HDL cholesterol. Therefore, caution should be taken before synthetic supplements containing cis-9, trans-11 and trans-10, cis-12 CLA are recommended.