Las plaquetas (PLTs) son protagonistas en la reparación de las heridas, ya que contienen factores de crecimiento (GFs), los cuales producen quimiotaxis, proliferación y diferenciación celular, neovascularización y deposición de matriz extracelular (ECM). Se ha propuesto la utilización de concentrados de plaquetas (PCs) autólogos para acelerar la reparación de las heridas y estimular la capacidad de regeneración de los tejidos lesionados. En los capitulos III y IV de esta tesis se presentan dos estudios clínicos sobre el efecto de un concentrado plaquetario (PC) autólogo en caballos con patología músculo-esquelética grave. Este PC fue preparado por medio de una nueva técnica de doble centrifugación en tubo. Una caracterización celular y molecular de este PC se presenta en el cápitulo V de ésta tesis. Se evaluó el efecto de la inyección intra-articular del PC en 7 caballos con enfermedad articular grave clasificada así según el grado de cojera (DL) y la efusión sinovial (JE). El PC produjo una mejoría estadísticamente significativa del DL y JE (p<0.05). La mejoría más notable fue observada a los dos meses de finalizado el tratamiento y permaneció hasta 8 meses después (ver cápitulo III). En el capitulo IV se evaluó el efecto del PC en 7 caballos con lesiones tendinosas (tendonitis del tendón flexor digital superficial (SDFT) y ligamentosas (desmitis del ligamento suspensorio (DSL)). Todos los caballos mejoraron significativamente su DL y la respuesta a la prueba de flexión (p<0.05). Los registros ultrasonográficos mejoraron en los caballos con tendinopatías, pero no cambiaron en los que tenían desmopatías. Dos caballos con tendinitis retornaron con exito a su nivel de competición sin recidivar. Un caballo con tendinosis crónica recidivó. El resto de pacientes con desmopatías volvieron a su nivel de competición pre-lesión. Se obtuvieron un promedio de 250 ± 71.8 x 106 plaquetas, 8.68 ± 3.78 leucocitos x 106 y 12515 ± 2443 pg de TGF- ?1/ml de PC. No se observaron signos clínicos adversos asociados con el tratamiento. En el cápitulo V se realizó un análisis celular y molecular del PC usado clínicamente (PC¬C), sangre entera y 4 fracciones de PCs adicionales (PC-A, PC-B y PC-D), los cuales son obtenidos durante la elaboración del PC-C. El objetivo fue evaluar el método de obtención de este PC, en el que son necesarios dos periodos de centrifugación. Todas las muestras fueron analizadas mediante citometría de flujo y determinación de los niveles de TGF- ?1. Las concentraciones de plaquetas para PC-A, PC-B, PC-C y PC-D fueron un 45%, 44%, 71% y 21%, respectivamente más altas en comparación con cada PC y la sangre entera. Las concentraciones de TGF- ?1 para PC-A, PC-B, PC-C y PC-D fueron un 38%, 44%, 44% and 37%, respectivamente más altas en comparación con cada PC y la sangre entera. Se concluyó que el método empleado para concentrar plaquetas es valido para producir PCs con niveles potencialmente terapéuticos de TGF-?1. Los resultados obtenidos en esta tesis abren un nuevo y prometedor campo de investigación para conocer los efectos clínicos y moleculares de los PCs en caballos con enfermedad crónica músculo-esquelética. Los resultados que se puedan obtener en caballos serán de gran valor para conocer el uso potencial de los PCs autólogos en seres humanos con similares patologías. / Platelets (PLTs) play a central role in wound healing, since they contain growth factors (GFs), which produce chemotaxis, cellular proliferation and differentiation, neovascularization, and extra¬cellular matrix (ECM) deposition. The use of autologous platelet concentrates (PCs) has been proposed to accelerate wound repair and to stimulate the regenerative capacity of injured tissues. Two clinical studies about the effect of an autologous platelet concentrate (PC) in horses with severe musculoskeletal pathology are presented in chapters III and IV of this thesis. The PC was prepared by a novel double centrifugation tube method. A cellular and molecular characterization of this PC is presented in chapter V of this thesis.The effect of the intraarticular injection of this PC in 7 horses with severe joint disease was evaluated on the basis on degree of lameness (DL) and joint effusion (JE). When PCs were injected into the joint a statistically significant improvement in both DL and JE (p<0.05) were observed. The most marked improvement was maximun 2 months after the last injection and persisted up to 8 months later (see chapter III). The clinical effect of PC injection in 7 horses with soft tissue musculoskeletal injuries namely: SDFT tendinopathy and desmopathy of the susensory ligament (DSL) was also evaluated (see the chapter IV). All the horses presented a clinical and a statistical (p<0.05) decrease of the DL and the response to flexion test. Ultrasonic appearance improved in the horses with SDFT lesions, but remained the same in the horses with DSL. Two horses with acute SDFT tendinopathy returned successfully to competition level without reinjury. One horse with chronic SDFT tendinopathy relapsed. The rest of the horses with DSL returned successfully to competition level without reinjury. A mean of 250 ± 71.8 x 106 platelets, 8.68 ± 3.78 leucocytes x 106, and 12515 ± 2443 pg TGF-?1 were obtained per ml of the PC. No adverse reactions resulted from this treatment. A cellular and a molecular study of the PC clinically used in this thesis (PC-C),of whole blood and of three additional PCs (PC-A, PC-B, and PC-D) obtained during the PC-C preparation were performed (see the chapter V) to compare the single and the double centrifugation tube methods for concentrating equine platelets. Whole blood and the 4 PCs were analyzed using flow cytometry for cellular quantification and determination of TGF- ?1 in all the samples. Platelet concentrations for PC-A, PC-B, PC-C and PC-D were 45%, 44%, 71% and 21% higher, respectively, compared to the same values for citrated whole blood samples. TGF- ?1 concentrations for PC-A, PC-B, PC-C and PC-D were 38%, 44%, 44% and 37% higher, respectively, compared to citrated whole blood sample values. In conclusion, the single and double centrifugation tube methods are reliable methods for concentrating equine platelets and obtaining potentially therapeutic TGF- ?1 levels. The results obtained in this thesis open a new encouraging research field on clinical and molecular effects of PCs in equine chronic musculoskeletal pathology. The future potential results obtained in horses can be of key value to determine the potenetial use of autologous PCs in human beings with chronic musculoskeletal pathology.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:TDX_UAB/oai:www.tdx.cat:10803/5732 |
| Date | 18 May 2006 |
| Creators | Carmona Ramírez, Jorge Uriel |
| Contributors | Prades, Marta, Universitat Autònoma de Barcelona. Departament de Medicina i Cirurgia Animals |
| Publisher | Universitat Autònoma de Barcelona |
| Source Sets | Universitat Autònoma de Barcelona |
| Language | English |
| Detected Language | Spanish |
| Type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis, info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
| Format | application/pdf |
| Source | TDX (Tesis Doctorals en Xarxa) |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess, ADVERTIMENT. L'accés als continguts d'aquesta tesi doctoral i la seva utilització ha de respectar els drets de la persona autora. Pot ser utilitzada per a consulta o estudi personal, així com en activitats o materials d'investigació i docència en els termes establerts a l'art. 32 del Text Refós de la Llei de Propietat Intel·lectual (RDL 1/1996). Per altres utilitzacions es requereix l'autorització prèvia i expressa de la persona autora. En qualsevol cas, en la utilització dels seus continguts caldrà indicar de forma clara el nom i cognoms de la persona autora i el títol de la tesi doctoral. No s'autoritza la seva reproducció o altres formes d'explotació efectuades amb finalitats de lucre ni la seva comunicació pública des d'un lloc aliè al servei TDX. Tampoc s'autoritza la presentació del seu contingut en una finestra o marc aliè a TDX (framing). Aquesta reserva de drets afecta tant als continguts de la tesi com als seus resums i índexs. |
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