Introdução: O vírus da hepatite G (GBV-C/HGV) é um flavivírus de genoma RNA de fita simples polaridade positiva, replicando em linfócitos, não sendo até hoje associado a qualquer patogenia humana. Estudos recentes demonstram que pessoas co-infectadas pelos vírus GBV-C/HGV e HIV têm menor progressão para AIDS e morte, embora alguns estudos tenham falhado em demonstrar tais efeitos. Objetivo: Determinar a soroprevalência e viremia (qualitativa) por GBV-C/HGV nas amostras de pacientes HIV+ e desenvolver uma metodologia de PCR em tempo real para fazer a determinação das cargas virais de GBV-C/HGV. Métodos: Avaliamos a presença de anticorpo e RNA do vírus GBV-C/HGV em 253 amostras de plasma de mulheres HIV positivas, coletadas entre 1997-99. Realizamos o ensaio imunoenzimático anti-E2 (EIA anti-HGenv kit, Roche(TM)), a reação em cadeia da polimerase (PCR), o NESTED PCR e, padronizamos um PCR em tempo real (RT-PCR), ensaio baseado no sistema Taqman, também aplicado nas mesmas amostras. A curva-padrão do ensaio foi feita com diluições seriadas de uma bolsa de plasma GBV-C/HGV+, e os resultados expressos em unidades aleatórias/mL. Resultados: Das 253 amostras testadas, 64 foram positivas para o anticorpo anti-E2 (25,3%), 36 RNA positivas no PCR convencional (14,2%) e, no NESTED PCR e PCR em tempo real 57 amostras foram concordantemente RNA positivas (22,5%), perfazendo um índice total de exposição de 48% (25.3 + 22.5). A carga viral teve uma média de 1.396 UA/mL (13.625 - 1.1UA/mL. As cargas virais encontradas não tiveram correlação direta com parâmetros laboratoriais da infecção pelo HIV como a carga viral e a contagem de células CD4. Conclusões: Foi obtida uma metodologia simples, rápida e de boa sensibilidade e especificidade, permitindo a quantificação do RNA do vírus GBV-C com reprodutibilidade. A metodologia permite análise simultânea de um grande número de amostras, sendo apropriada para estudos clínicos. A prevalência de exposição á este agente na população feminina HIV+ estudada é alta, provavelmente decorrente da via sexual comum de transmissão dos agentes. / Introduction: The Hepatitis G (GBV-C / HGV) agent is a flavivirus. Its genome is composed of single stranded RNA of positive polarity, replicating in lymphocytes. Up to now, it hasn\'t been implicated in any disease associated to human beings. Recent studies demonstrate that persons co-infected by the viruses GBV-C / HGV and HIV have a slower rate of progression to AIDS and death, although some studies have failed in demonstrating such effects. Objective: To determine the soroprevalence and viremia (qualitative) of GBV-C / HGV in samples from HIV-infected women. To develop a methodology of Real-Time PCR for GBV-C / HGV viral load determination. Methods: The presence of antibody and GBV-C/HGV RNA was evaluated in 253 plasma samples from HIV infected women, collected between 1997-99. An immunoenzymatic assay (EIA kit for anti-E2, Roche(TM)) was applied to obtain the seroprevalence while the polymerase chain reaction (PCR), nested PCR, and a standardized Taqman based real-time PCR (RT-PCR), were used in the assessment of viral RNA. For the viral load, a standard-curve was made with serial dilutions of a plasma bag containing GBV-C/ HGV RNA+, and results were expressed in random units/mL, in comparison to the reference matherial. Results: Of the 253 samples tested, 64 were positive for anti-E2 (25.3%), 36 RNA positive by PCR (14.2%), and 57 (22.5%) where both nested PCR and real-time PCR RNA positive, for a total exposure index of 48%. The mean viral load was of 1.396 RU/mL (13.625 - 1.1 RU/mL). GBV-C/HGV Viremia was not correlated to HIV laboratorial parameters, i.e. CD4 and HIV-RNA counts. Conclusions: A simple, fast and efficient system for the determination of GBV-C/HGV viral load was developed, presenting appropriate sensitivity and specificity, allowing reproducible quantification of GBV-C RNA in stored plasma samples. The methodology allows simultaneous analysis of a large number of samples, being appropriate for clinical studies. The prevalence of exposition to this agent in the studied female population is high, probably a consequence of the common sexual way of transmission of the agents.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-22062010-123341 |
| Date | 01 June 2010 |
| Creators | Silva, Synara Alexandre Araujo |
| Contributors | Levi, José Eduardo |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | Dissertação de Mestrado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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