Mikoplazmų tyrimus apsunkina genetinių įrankių trūkumas. Ne išimtis ir Mycoplasma gallinarum – platų šeimininkų ratą turinti silpno patogeniškumo bakterija. Šiame darbe aprašomas pirmųjų M. gallinarum skirtų vektorių, į kurių sudėtį įeina chromosominė replikacijos pradžios sritis (oriC), kūrimas. Be to, šio tyrimo metu pirmą kartą pademonstruota sėkminga šios mikoplazmų rūšies transformacija. Iš šešių sukonstruotų vektorių penki replikavosi M. gallinarum ląstelėse, o šeštasis nebuvo funkcionalus dėl AT turtingoje srityje pasroviui nuo antrosios DnaA dėžutės atsiradusios mutacijos. Kai kurie vektoriai, kultivuojant transformantus in vitro, integravosi į chromosomą. Homologinės rekombinacijos dažnis dar labiau padidėjo po transformacijos ilgą laiką gaivinant ląsteles augimo terpėje be antibiotiko. Sukurti oriC vektoriai galėtų būti naudojami genetiniams M. gallinarum tyrimams, ypač genams inaktyvuoti ir ekspresuoti, bei suteiktų daugiau žinių apie molekulines šios bakterijos savybes. / Genetic studies of mycoplasmas are limited by the lack of a replicable vector system. Mycoplasma gallinarum, an opportunistic pathogen having a wide range of hosts, is not the exception. This study describes the identification and cloning of the M. gallinarum origin of replication (oriC) in order to construct the first vectors for this species. Additionally, this report provides the first evidence of the successful transformation of M. gallinarum. Five out of six developed vectors have been functional. The replication of the sixth vector has not been supported due to the mutation in the AT rich region downstream the second DnaA box. During in vitro passages, some vectors have been integrated into the chromosome. The rate of chromosomal integration has been even further increased by the lack of antimicrobial selection pressure during cultivation. Hence developed oriC plasmids are useful for genetic studies, including inactivation or expression of selected genes, in M. gallinarum, and lead to a better understanding of its molecular biology.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LABT_ETD/oai:elaba.lt:LT-eLABa-0001:E.02~2011~D_20141223_174936-28800 |
| Date | 23 December 2014 |
| Creators | Rimavičiūtė, Reda |
| Contributors | Meškys, Rolandas, Dumalakienė, Irena, Vilnius University |
| Publisher | Lithuanian Academic Libraries Network (LABT), Vilnius University |
| Source Sets | Lithuanian ETD submission system |
| Language | Lithuanian |
| Detected Language | English |
| Type | Master thesis |
| Format | application/pdf |
| Source | http://vddb.library.lt/obj/LT-eLABa-0001:E.02~2011~D_20141223_174936-28800 |
| Rights | Unrestricted |
Page generated in 0.0684 seconds