JORGE, Roberta Jeane Bezerra. Venômica e antivenômica de Bothrops erythromelas : estudo da variação intraespecífica. 2015. 131 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-03-06T13:00:26Z
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Previous issue date: 2015 / ABSTRACT
Bothrops erythromelas
snake is a species of medical importance responsible for snakebites,
predominantly in the Northeast of B
razil. This study aimed to conduct a comparative
proteomic study of venoms pool of this species from five geographical regions of the
Northeast: Ceará, Pernambuco, Juazeiro, Paraíba and Itaparica Island. In addition, we
investigated the ability of
Bothrops
antivenom (SAB) of the Vital Brazil Institute and
polyspecific serum (BCL) of Costa Rica to neutralize the venoms from these populations
(antivenomics) and the ability to neutralize the
in vivo
haemorrhagic activity of venom. Two
-
dimensional electrophores
is (2DE) showed similar patterns of protein distributed in the range
of 14
-
95 kDa molecular mass and isoelectric points ranging from 4 to 8.5. Thirty to forty
fractions were collected by Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography (RP
-
HPLC). Each
chromatographic fraction collected manually were analyzed by polyacrylamide
gel electrophoresis
-
SDS (SDS
-
PAGE) and protein bands were excised and subjected to
venomic analysis resulting in the identification of approximately 65 proteins and 8 species of
peptides belonging to 12 protein families (Bradykinin
-
Potentiating Peptides (BPPs), Snake
Venom Vascular Endothelial Growth Factor (svVEGF), Phospholipase A
2
, Serine Preotease,
Metalloproteases class I and class III (PI and PIII
-
Symp), Disintegrins and
Disintegrin
-
like
and Rich in Cysteine domains, C
-
type Lectins, Nucleotidases (5'
-
nucleotidase; 5'NT and
Phosphodiesterase; PDE), Secretory Proteins rich in Cysteine (CRISP) and snake venoms
Phospholipase B. Through this work it was shown that the proteomes
of venoms of B.
erythromelas of different regions of Northeast are similar and seem to be quite kept according
to their geographical distribution, although they contain peculiar differences such as the
presence of CRISP detected only in the venoms of Pern
ambuco and 5 'NT in the population
of
Juazeiro; and PDEs only in proteomes of populations of Ceará and Pernambuco and PLB in
Ceará, Juazeiro and Itaparica Island. The antivenomics results showed that SAB pentavalent
serum immunoreactivity is similar across
the five populations and more efficient compared to
the polyvalent BCL. However, it can be seen that especially low molecular weight fractions
are not efficiently recognized by both antivenoms. Although differences were shown in their
neutralization effic
acy, both were
effective in neutralizing antivenom hemorrhagic activity.
Despite the
B.erythromelas
snake inhabit acomprehensivegeographical area
,
the five
populations showed similar composition, displaying a highly conserved profile of
representative venom
protein classes. Therefore, this study assigned all proteins in the venom
of
B. erythromelas
that have been characterized in the literature (BPP, PLA2 Asp49, PIII
-
Symp and svVEGF) and provided additional information to the presence of Serine Proteases
and
C
-
type Lectins and other minor or specific components (PDE, 5'NT, PLB, CRISP). / UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARÁ
FACULDADE DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE FISIOLOGIA E FARMACOLOGIA
PÓS
-
GRADUAÇÃO EM FARMACOLOGIA
ROBERTA JEANE BEZERRA JORGE
VENÔMICA E ANTIVENÔMICA DE
Bothro
p
s
eryth
r
omelas
: ESTUDO DA VARIAÇÃO
INTRAESPECÍ
FICA
.
ORIEN
TADORA: HELENA SERRA AZUL MONTEIRO
CO
-
ORIENTADOR
: JUAN JOSÉ CALVETE
CHORNET
Fortaleza
2015
ROBERTA JEANE BEZERRA JORGE
VENÔMICA E ANTIVENÔMICA DE
Bothro
ps
eryth
r
omelas
: ESTUDO DA VARIAÇÃO
INTRAESPECIFICA
.
Tese de Doutorado
apresentada ao
Cur
so
de Pós
-
G
raduação
em Farmacologia da Universidade Federal do
Ce
ará para obtenção do titulo de Doutor
em Farm
a
cologia
ORIENTADORA: HELENA SERRA AZUL MONTEIRO
CO
-
ORIENTADOR
: JUAN JOSÉ CALVETE
CHORNET
Fortaleza
2015
Dados Internacionais de Catalogação na Publicação
Universidade Federal do Ceará
Biblioteca de Ciências da Saúde
J71v
Jorge, Roberta Jeane Bezerra.
Venô
mica e Antivenômica de
Bothrops erythromelas
: estudo da variação
intraespecífi
ca.
/
Roberta Jeane B
ezerra Jorge.
–
2015.
130 f.: il. color., enc.; 30 cm.
Tese (doutorado)
–
Universidade Federal do Ceará, Faculdade de Medicina, Departamento de
Fisiologia e Farmacologia, Programa de Pós
-
Graduação em Farmacologia, Doutorado em
Farmacologia, Fortaleza, 201
5.
Área de Concentração: Farmacologia.
Orientação: Profa. Dra. Helena Serra Azul Monteiro.
Co
-
Orientação: Prof. Dr. Juan José Calvete Chornet.
1. Bothrops. 2. Proteômica. 3. Venenos de Serpente. I. Título.
CDD 615.942
A
os
meus pais Nádja e Roberto e ao meu irmão Júnior.
AGRADECIMENTOS
A
Deus, minha força maior e inexaurível
.
A
os meus pais
pelo que sou hoje.
A todos meus
familiares e
amigos
pelo companheirismo e presteza, seria impossível e a
té
passível de cometer algum esquecimento citar o nome de todos eles, mas cada um sabe o
quanto sou grata e que podem sempre contar comigo
.
Aos que contribuíram diretamente para a realização deste trabalho: M
inha orientadora P
rofa
Dra Helena Serra Azul M
onteiro e ao meu co
-
orientador Prof
.
Dr. Juan José Calvete e
a
sua
equipe do Laboratório de Ve
nômica y Proteinómica Estructural do Instituto de Biomedicina
de Valencia e aos grandes amigos que fiz no período de estágio de doutorado
na Espanha
.
A todos os
colaboradores deste trabalho no Brasil, Espanha e Costa Rica
.
A
todos do
Laboratório de Farmacologia Venenos e Toxina
s (LAFAVET)
, aos companheiros
científicos, em especial aos amigos
que fiz
e
a
Pós
-
graduação em Farmacologia da
Universidade Federal do Cea
rá, os quais me proporcionaram
crescimento profissional e
pessoal.
A
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
(
CAPES
)
pela concessão
da bolsa de
Doutorado
Sanduiche
e
m Valencia
-
Espanha
.
Ao Conselho Nacional de Pesquisa (CNPq) pelo
apoio financeiro
.
“
Entrega teu caminho ao
S
enhor, confia nele
,
e ele
o fará
”
Salmo
37:5
RESUMO
A serpente
Bothrops erythromelas
é uma espécie de importância médica responsável por
acidentes ofídicos, com predominância no N
ordeste do Brasil. O presente trabalho teve como
objetivo realizar um estudo proteômico comparativo do
pool
de venenos desta espécie
procedentes de cinco regiões geográficas do Nordeste:
Ceará, Pernambuco, Juazeiro, Paraíba
e Ilha de Itaparica.
Além disso,
foi investigada a capacidade do soro antibotrópico (SAB) do
Instituto Vital Brazil e soro poliespecífico (BCL) da Costa Rica em neutralizar os venenos
provenientes dessas populações através da antivenômica e a capacidade de neutralização
frente à atividad
e hemorrágica
in vivo
. A eletroforese bidimensional (2DE) mostrou padrões
similares de proteínas distribuídas no intervalo de 14
-
95 kDa de massa molecular e pontos
isoelétricos variando de 4
-
8,5. Trinta a quarenta frações foram recolhidas por meio de
Cro
matografia Líquida de Alta Eficiência em Fase Reversa (RP
-
HPLC). Cada fração
cromatográfica coletada manualmente foi analisada por
eletroforese em gel de
poliacrilamida
–
SDS
(
SDS
-
PAGE) e
as bandas de proteínas foram excisadas e submetidas à
análise venômi
ca que resultaram na identificação de aproximadamente 65 proteínas e 8
espécies de peptídeos pertencentes a 12 famílias de proteínas de venenos de serpentes:
(Peptídeos Potenciadores de Bradicinina
(BPPs),
Fator de Crescimento Endotelial Vascular de
Veneno
de Serpente
(svVEGF),
Fosfolipase A
2
, Serinoproteases, Metaloproteases da classe I
e da classe III (PI e PIII
–
SVMP), Desintegrinas e Domínios tipo Desintegrina e rico em
Cisteínas, Lectinas do tipo C, Nucleotidases (5'
-
nucleotidase; 5’NT e Fosfodiester
ase; PDE),
Proteínas Secretórias Ricas em Cisteína (CRISP) e Fosfolipase B). Através desse trabalho foi
demonstrado que os proteomas dos venenos das
B. erythromelas
das diferentes regiões do
Nordeste são similares e parecem ser bastante conservados de acor
do com sua distribuição
geográfica, embora contenham diferenças peculiares tais como, a presença de CRISP
detectadas apenas nos venenos de Pernambuco e da 5’ NT na população de Juazeiro; assim
como PDEs apenas nos proteomas das populações do Ceará e Pernam
buco e da PLB no
Ceará, Juazeiro e Ilha de Itaparica. Os resultados da antivenômica mostraram que a
imunorreatividade do soro pentavalente SAB é similar frente às cinco populações e mais
eficiente em relação ao polivalente BCL. No entanto, pode
-
se observar
especialmente que as
frações de baixo peso molecular não são reconhecidas pelos dois antivenenos de forma
eficiente. Embora tenham mostrado diferenças na sua eficácia de neutralização, ambos os
antivenenos foram eficazes na neutralização da atividade hemo
rrágica
in vivo
. Apesar da
serpente de
B. erythromelas
habitar uma abrangente área geográfica, as cinco populações
estudadas apresentaram composição semelhante, exibindo um perfil altamente conservado das
classes das proteínas representativas do veneno. Po
rtanto, este estudo identificou as proteínas
do veneno de
B. erythromelas
já caracterizadas na literatura (BPP, PLA
2
Asp49, PIII
-
SVMP
e svVEGF) e forneceu informações adicionais para a presença de Serinoproteases e Lectinas
do tipo C e de outros component
es minoritários ou específicos (PDE, 5’NT, PLB, CRISP).
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.repositorio.ufc.br:riufc/10872 |
| Date | January 2015 |
| Creators | Jorge, Roberta Jeane Bezerra |
| Contributors | Chornet, Juan José Calvet, Monteiro, Helena Serra Azul |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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