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Previous issue date: 2011-08-29 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Paracoccidioidomycosis (PCM) is the most important endemic deep mycosis in Latin
America. Understanding of the complex interactions between the fungus and host must
include the identification of gene expression patterns during infection. Carbonic anhydrase
(CA) belongs to the family of zinc metalloenzymes that catalyzes the reversible hydratation of
carbon dioxide to bicarbonate. Transcriptional studies have shown that carbonic anhydrase of
P. brasiliensis is expressed in yeast cells recovered from liver of infected mice. In the present
work, we characterized the cDNAs encoding for four carbonic anhydrases of P.brasiliensis
(PbCA1, PbCA2, PbCA3, PbCA4). Recombinant PbCA1, 3 and 4 were obtained in
heterologous systems with 33 kDa, 28 kDa and 32 kDa respectively. Mass spectrometry
analysis confirmed the sequences of the produced proteins. The expression of PbCAs
transcripts was evaluated by using real-time RT-PCR in mycelium, yeast cells and mycelium
to yeast transition, in yeast cells exposed to CO2 and yeast cells recovery directly from liver
and spleen. In the presence of CO2, PbCA1, PbCA2 and PbCA4 gene expression was reduced
in the course of time. PbCA1 transcript expression was induced during the mycelium to yeast
transition. PbCA2 and PbCA4 gene expression was higher in yeast cells, when compared to
mycelium and mycelium to yeast transition. Pbca1 was induced yeast cells recovery directly
from liver and spleen while the transcripts for Pbca2 and Pbca4 were repressed in all
condictions. The gene expression data suggest differential roles of the CAs in the fungal
physiology. / Paracoccidioidomicose (PCM) é a mais importante micose endêmica na América Latina. A
compreensão das interações complexas entre o fungo e o hospedeiro deve incluir a
identificação de padrões de expressão gênica durante a infecção. Anidrase carbônica (CA)
pertence à família de metaloenzimas de zinco que catalisa a hidratação reversível do dióxido
de carbono para bicarbonato. Estudos transcricionais têm mostrado que uma anidrase
carbônica de P. brasiliensis é expressa em células de levedura recuperadas de fígado de
camundongos infectados. No presente trabalho, nós caracterizamos os cDNAs que codificam
para quatro anidrases carbônicas de P.brasiliensis (PbCA1, PbCA2, PbCA3, PbCA4). As
recombinante de PbCA1, PbCA3 e PbCA4 foram obtidas em sistemas heterólogos com 33
kDa, 28 kDa e 32 kDa, respectivamente. Análise por espectrometria de massas confirmou as
seqüências das proteínas produzidas. A expressão dos transcritos de Pbcas foi avaliada usando
real-time RT-PCR em micélio, levedura e transição de micélio para levedura; em células de
levedura expostas a CO2 e células de leveduras recuperadas diretamente do fígado e baço. Na
presença de CO2, a expressão dos genes de Pbca1, Pbca2 e Pbca4 foi reduzida no decorrer do
tempo. A expressão do transcrito de Pbca1 foi induzida durante a transição de micélio para
levedura. A expressão de Pbca2 e Pbca4 foi maior em células de levedura, quando comparada
com micélio e transição de micélio para levedura.O transcrito para Pbca1 foi induzido em
células de leveduras recuperadas diretamente do fígado e baço, enquanto que os transcritos
para Pbca2 e Pbca4 foram reprimidos em todas as conduções. Os dados de expressão gênica
sugerem diferentes papéis das CAs na fisiologia dos fungos.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tede/4533 |
| Date | 29 August 2011 |
| Creators | Tomazett, Mariana Vieira |
| Contributors | Soares, Célia Maria de Almeida, Soares, Célia Maria de Almeida, Zancopé-Oliveira, Rosely Maria, Pereira, Maristela |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Programa de Pós-graduação em Biologia (ICB), UFG, Brasil, Instituto de Ciências Biológicas - ICB (RG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 6883982777473437920, 600, 600, 600, 600, -3872772117827373404, -1634559385931244697, -2555911436985713659 |
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