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Previous issue date: 2010-12-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Non-conventional leafy vegetables can be used as food in adequate quantities as an alternative
source of nutrients. However, before its consumption, should take into account their
nutritional composition, which depends on its bioavailability and the absence of cytotoxicity
and anti-nutritional factors. In this study, leaves of carrot were analyzed to determine the
proximate composition, antinutritional factors and haemolytic activity, antibacterial and
antifungal. Chemical composition and content of antinutritional factors (lectins, tannins and
saponins) were determined in fresh leaves, bleached, boiled and lyophilized. For extraction of
proteins, we used six solutions under stirring for 3 hours at 25°C, and the crude extract.
Hemagglutination assay was determined by double serial dilution of the extract in test tubes
containing saline and erythrocytes at 3% of human blood A and B, and rabbit. We
investigated the specificity of the lectin by sugars using inhibition with many simple
carbohydrates. Soluble proteins was performed by Bradford method. The inactivation of the
lectin was tested with the crude extract with a pH variation (2.08 to 13.08) and temperature
(40 to 100º C). Protein extract was precipitated with ammonium sulfate at 80% saturation,
obtaining the active fraction (0-80). This was subjected to affinity chromatography (stromapolyacrylamide)
and used to check the resistance of the lectin against chelating agents,
denaturants, reducing agents, oxidants and proteolytic enzymes (trypsin, papain and
bromelain). After treatment of the lectin with these agents, there was testing hemagglutination
activity (HA). Tannins were determined using tannic acid as standard and the hemolytic
activity of saponin for the search. Tests were carried out for antibacterial, antifungal and
haemolytic with the protein fraction. The HA was best seen when using 0.15 M NaCl. Among
the erythrocytes tested lectin preferentially agglutinated rabbit treated and not treated with
proteolytic enzymes (154.26 HU/mgP), with specificity for the carbohydrate lactose,
galactose and arabinose. It was found that the lectin is inactivated at temperatures from 100ºC
and at acid pH 2.08. Lectin sample was resistant to proteolytic enzymes, reducing agent,
oxidizing and denaturing for 30 minutes. However, the total loss of HA occurred with the
administration of chelating agent on the day and overnight after denaturing. Ions in the
presence of isolated HA was maintained. Chromatography showed a peak that had HA and
protein profile of fractions and the active peaks and no assets were subjected to
electrophoresis on polyacrylamide gel in the presence of sodium dodecyl sulfate (SDS),
indicating a partial purification. Total tannin contents ranged from 0,16% to 0,60% cooked
leaf to fresh leaf. Research saponin was negative in the sample. The protein fraction showed
no inhibitory effect on the growth of dermatophyte fungi, however, showed activity against
Staphylococcus aureus and Escherichia coli with a minimum inhibitory concentration of 1,9
μg/mL of protein. Samples tested did not cause hemolytic effect against human erythrocytes
A and B. We conclude from this study that the carrot leaves have nutritional properties that
enable it to use. It also has anti-nutritional factors that are inactivated by heat. / Os vegetais folhosos não convencionais podem ser utilizados na alimentação humana em
quantidades adequadas como fonte alternativa de nutrientes. Entretanto, antes de seu
consumo, deve-se levar em conta sua composição nutricional, que depende de sua
biodisponibilidade e ausência de citotoxicidade e fatores antinutricionais. Neste estudo, folhas
de cenoura foram analisadas para se determinar a composição centesimal, fatores
antinutricionais e atividade hemolítica, antibacteriana e antifúngica. A composição centesimal
e o teor de fatores antinutricionais (lectinas, taninos e saponinas) foram determinados na folha
fresca, branqueada, cozida e liofilizada. Para a extração das proteínas, foram utilizadas seis
soluções sob agitação constante durante 3 horas à temperatura de 25ºC, obtendo-se o extrato
bruto. O ensaio de hemaglutinação foi determinado por meio de diluição duplo-seriada do
extrato em tubos de ensaio contendo solução salina e eritrócitos a 3% de sangue humano A, B
e O e de coelho. Foi investigada a especificidade da lectina por açúcares utilizando inibição
com diversos carboidratos simples. O teor de proteínas solúveis foi realizado pelo método de
Bradford. A inativação da lectina foi testada com o extrato bruto com uma variação de pH
(2,08 a 13,08) e temperatura (40 a 100ºC). O extrato protéico foi precipitado com sulfato de
amônio a 80% de saturação, obtendo a fração ativa (0-80). Esta foi submetida à cromatografia
de afinidade (estroma-poliacrilamida) e utilizada na verificação da resistência da lectina frente
a agentes quelantes, desnaturantes, redutores, oxidantes e enzimas proteolíticas (tripsina,
papaína e bromelaína). Após tratamento da lectina com estes agentes, realizou-se teste de
atividade hemaglutinante (AH). Os taninos totais foram determinados usando o ácido tânico
como padrão e a atividade hemolítica para a procura de saponina. Realizaram-se testes de
atividade antibacteriana, antifúngica e hemolítica com a fração protéica. A AH foi melhor
verificada quando se utilizou NaCl 0,15 M. Dentre os eritrócitos testados a lectina aglutinou
preferencialmente os de coelho tratado e não tratado com enzimas proteolíticas (154,26
UH/mgP), apresentando especificidade pelos carboidratos lactose, galactose e arabinose.
Verificou-se que a lectina é inativada em temperaturas, a partir de 100ºC e em pH ácido 2,08.
A amostra lectínica se mostrou resistente a ação de enzimas proteolíticas, agente redutor,
oxidante e desnaturante por 30 minutos. Porém, a perda total da AH ocorreu com a
administração do quelante no dia e do agente desnaturante após overnight. Na presença de
íons isolados a AH foi mantida. A cromatografia mostrou um pico que apresentou AH e o
perfil protéico das frações e dos picos ativos e não ativos foram submetidos à eletroforese em
gel de poliacrilamida em presença de dodecil sulfato de sódio (SDS) indicando uma
purificação parcial. Os teores de taninos totais variaram de 0,16% para folha cozida a 0,60%
para a folha fresca. A pesquisa de saponina foi negativa na amostra analisada. A fração
protéica não apresentou efeito inibitório sobre o crescimento de fungos dermatófitos, todavia,
apresentou atividade contra Staphylococcus aureus e Escherichia coli com uma concentração
inibitória mínima de 1,9 μg/mL de proteína. As amostras testadas não causaram efeito
hemolítico frente a eritrócitos humanos A e B. Conclui-se a partir do presente estudo, que as
folhas de cenoura possuem propriedades nutricionais que a habilitam para consumo. Possui
ainda fatores antinutricionais que são inativados pelo calor.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede.biblioteca.ufpb.br:tede/4313 |
| Date | 15 December 2010 |
| Creators | Leite, Maria Clerya Alvino |
| Contributors | Gadelha, Tatiane Santi |
| Publisher | Universidade Federal da Paraíba, Programa de Pós Graduação em Ciências da Nutrição, UFPB, Brasil, Ciências da Nutrição |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFPB, instname:Universidade Federal da Paraíba, instacron:UFPB |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 2075167498588264571, 600 |
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