Made available in DSpace on 2014-06-12T15:54:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2
arquivo88_1.pdf: 861536 bytes, checksum: 11993c5a3da46ed594a599203ef0f7e0 (MD5)
license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5)
Previous issue date: 2010 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / O queijo de coalho é um dos principais produtos produzidos no Estado de Pernambuco a partir
de leite de vaca cru e/ou leite pasteurizado. Esta pesquisa teve como objetivo avaliar o perfil
dos peptídeos bioativos do queijo de coalho fresco produzidos no município de Cachoeirinha
PE As amostras de queijo coalho foram coletadas em março e julho do ano de 2008 e
transportadas para o Laboratório de Imunopatologia Keizo Azami - LIKA/UFPE. Para a
extração dos peptídeos solúveis, 40g da amostra dos queijos foram homogeneizadas com duas
vezes do seu peso em água ultrapura, usando um misturador automático, em seguida foram
centrifugadas 3 vezes a 10.000 rpm por 20 minutos a 4°C. Após esse procedimento o
sobrenadante final foi filtrado em papel de filtro, liofilizado e armazenado a -20°C. Os extratos
dos peptídeos solúveis do queijo de coalho de Cachoeirinha da primeira e segunda coleta foram
submetidos à Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) realizada no AKTA system
Amersham Pharmacia Biotech usando coluna de exclusão molecular tipo Superdex Peptide
HR10/30 equilibrada com água ultrapura a fluxo de 0,2 mL/ min e coluna de troca iônica Mono
Q HR 10/10 equilibrada com tampão Tris-HCl 25mM, pH 7,0, a fluxo de 1,0mL/min. A fração
catiônica foi eluída em tampão de equilíbrio, enquanto que a aniônica foi eluída no tampão de
equilíbrio em gradiente de NaCl a 1M. O eluato protéico das cromatografias realizadas foi
acompanhado por um detector UV a 260 e 280nm. O extrato de peptídeos solúveis do queijo
coalho e o pool dos picos obtidos após as corridas cromatográficas em ambas as colunas,
serviram como amostra para a avaliação do perfil eletroforético em SDS-PAGE. A massa dos
peptídeos quando não visualizadas na eletroforese foi conhecida através da análise em espectro
de massa do tipo MALDI-TOF, aparelho do tipo Autoflex III, de matriz de ácido alfa-ciano 4-
hidroxicinâmico em acetonitrila 33% e ácido trifluoroacético 0,1%, operada com modo de
aquisição linear positivo. A atividade antimicrobiana dos extratos dos peptídeos solúveis e dos
pools catiônicos obtidos após cromatografia de troca iônica foi testada frente à Enterococcus
faecalis ATCC 6057, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538
(bactéria gram-positiva), Escherichia coli ATCC 25922, Pseudômonas aeroginosa ATCC
27853, Klebsiela pneumoniae ATCC 29665 (bactéria gram-negativa) e Candida albicans
ATCC 50 - IBB (fungo) pela técnica de poço, disco-difusão e microdiluição para a
determinação concentração inibitória mínima (CIM). Os resultados obtidos após as análises
cromatográficas realizadas em coluna de exclusão molecular mostraram perfil peptídico similar
com a observação de picos eluídos no mesmo tempo de retenção enquanto que a cromatografia
de troca iônica mostrou perfil similar apenas para a fração catiônica não apresentando
similaridade para a fração aniônica. Perfil eletroforético similar também foi observado nos
extratos dos peptídeos solúveis com 17 bandas para as duas coletas realizadas. O pool dos picos
I obtidos por cromatografia de exclusão molecular apresentou 14 e 15 bandas, para 1° e 2°
coleta, respectivamente. O pool pico II obtidos por cromatografia de exclusão não foram
visualizados no gel de eletroforese, sendo suas massas moleculares conhecidas através de
análises em espectro de massa. Essas análises evidenciaram a presença de 5 diferentes
peptídeos. Inibição do crescimento de Bacillus subtilis ATCC 6633 foi observada em todos os
testes realizados, apresentando média de halos de inibição de 5,25 mm para a técnica de difusão
em poço e 3,75 mm para a técnica de disco-difusão. Bacillus subtilis ATCC 6633 foi sensível a
ação do extrato dos peptídeos solúveis e a fração catiônica com concentração inibitória mínima
de 9,37 mg/ mL e 6,22 μg/ mL, respectivamente. Enquanto que Enterococcus faecalis ATCC
6057 foi sensível apenas ao pool da fração catiônica com concentração inibitória mínima de
199,37 μg/ mL
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/2145 |
| Date | 31 January 2010 |
| Creators | Maria Pereira Dias, Giselle |
| Contributors | Lúcia Figueiredo Porto, Ana |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.0088 seconds