Juvenil idiopatisk artrit (JIA) är en autoimmun reumatisk sjukdom som drabbar barn före 16 års ålder. Den vanligaste varianten är oligoartikulär JIA, vilket innebär att den påverkar två till fyra leder med symptom så som svullnad, ömhet, stelhet, rodnad eller nedsatt motorik. Oligoartikulär JIA är även associerad med uveit, vilket är en autoimmun ögonsjukdom som förstör synen. Sjukdomen är i nuläget dåligt förstådd och forskning behövs för att kunna identifiera markörer som kan användas för diagnostik. Enzymkopplad immunadsorberande analys (ELISA) är inom vårdens laborativa arbete en mycket vanlig metod för att undersöka patienters serum och identifiera specifika markörer som tyder på sjukdom. En ELISA kan utföras på olika sätt beroende på om den letar efter antigen eller antikroppar. Syftet med denna studie var att optimera en indirekt ELISA för detektion av autoantikroppar och genomföra en metodjämförelse med en redan väl undersökt kulbaserad autoantikroppsmetod. Studien omfattar 14 serumprov från olika patienter och använder sig av rekombinant framställda protein epitope signature tag (PrEST)-antigener för att identifiera autoantikroppar. PrEST-antigener består av ett humant variabelt proteinsegment och en protein-tag som består av ett albuminbindande protein (ABP) med en N-terminal HIS-tag (His6ABP). För att förhindra ospecifik inbindning till His6ABP-delen av PrEST-antigenerna så framställdes His6ABP, med vilket serum inkuberades innan de undersöktes med ELISA. Då resultatet tolkades binärt kunde stor likhet ses mellan de två olika metoderna för samtliga PrEST-antigener som undersöktes, vilket innebär att metoden kan fortsätta utforskas. Resultatet visade också att His6ABP-delen skulle kunna orsaka korsreaktivitet, vilket dock inte är något negativt för metodens validitet. / Juvenile idiopathic arthritis (JIA) is an autoimmune rheumatic disease that affects children before the age of 16. The most common variant is oligoarticular JIA, which means it affects two to four joints with symptoms such as swelling, tenderness, stiffness, redness, or reduced mobility. Oligoarticular JIA is also associated with uveitis, an autoimmune eye disease which damage eyesight. The disease is currently poorly understood, and research is needed to identify markers that can be used for diagnostics. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) is a very common method in healthcare laboratory work to examine patients' serum and identify specific markers that indicate disease. An ELISA method can be performed in different ways depending on whether it is looking for antigen or antibodies. The aim of this study was to optimize an indirect ELISA for detection of autoantibodies and conduct a method comparison with an already well established bead-based autoantibody array method. The study included 14 sera samples from different patients and used recombinantly produced protein epitope signature tag (PrEST) antigens to identify autoantibodies. PrEST antigens consist of a human variable protein segment and a protein tag consisting of albumin binding protein (ABP) with an N-terminal HIS-tag (His6ABP). To prevent non-specific binding to the His6ABP portion of the PrEST antigens, His6ABP were recombinantly produced and used for pre-absorption of serum before being examined by ELISA. When the result was interpreted binary, great similarity could be seen between the two different methods for all PrEST antigens examined, which calls for further exploring of the method. The result also showed that the His6ABP part could possibly cause cross-reactivity, which is interesting but doesn’t affect the validity of the method.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UPSALLA1/oai:DiVA.org:mau-60545 |
| Date | January 2023 |
| Creators | Friberg, Viktor |
| Publisher | Malmö universitet, Fakulteten för hälsa och samhälle (HS) |
| Source Sets | DiVA Archive at Upsalla University |
| Language | Swedish |
| Detected Language | Swedish |
| Type | Student thesis, info:eu-repo/semantics/bachelorThesis, text |
| Format | application/pdf |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.0029 seconds