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Previous issue date: 2010-08-02 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Among the pests that attack corn crop in Brazil, there is Spodoptera frugiperda (JE Smith,
1797) (Lepidoptera: Noctuidae), known as fall armyworm, which is the major corn pest. Due
to genetic instability during serial passage of baculoviruses in insect cell culture, the viral
bioinseticides in vitro production development is the greatest challenge for mass production
of this bioproduct. Successive passages of virus using extracellular viruses (BVs), necessary
during viral bioinseticides production scaling up, leads to the appearance of aberrant forms of
virus, a process so called as "passage effect ". The main consequence of passage effect is the
production of occlusion bodies (OB) decrease, preventing its production using in vitro
process. In this study, it was carried out a serial passage of baculovirus Spodoptera frugiperda
multiple nucleopolyhedrovirus, isolate 18, using Sf21 cells. A decrease in the production of
occlusion bodies from 170 to 92 in the third to fourth passage was observed. A factorial
experimental design (22) was employed to verify the influence of two input variables,
concentration of the hormone 20 - hydroxyecdysone (CH) and cholesterol (CC) on the values
of response variables (volumetric and the specific OB production) of the process, seeking to
define the optimum operating ranges trying to reverse or minimize the passage effect. The
result indicated a negative influence of the cholesterol addition and positive effect in the
hormone supplementation which the optimum range found for the concentrations studied
were 8 to 10μg/mL and 5 to 6.5 mg / mL, for cholesterol and hormone concentrations
respectively. New experiments were performed with addition of hormone and cholesterol in
order to check the influence of these additives on the OB production independently. While the
best result obtained from the factorial experiment was 9.4 x 107 OB/mL and 128.4 specific
OB/cell, with the addition of only 6μg/mL 20-hydroxyecdysone these concentrations
increased to 1.9 x 108 OB/mL and 182.9 OB/cell for volumetric and specific OB production,
respectively. This result confirms that the addition of the hormone 20-hydroxyecdysone
enhances the SfMNPV in vitro production process performance using Sf21 cells / Dentre as pragas que atacam a cultura do milho no Brasil, destaca-se a
Spodoptera frugiperda (J. E. Smith, 1797) (Lepidoptera: Noctuidae), conhecida no est?dio
larval como lagarta-do-cartucho, considerada a praga chave da cultura, alimentando-se da
planta em todas as suas fases de crescimento, principalmente dos cartuchos de plantas jovens.
Para seu controle, tem-se empregado inseticidas qu?micos de amplo espectro, o que tem
causado efeitos adversos ao homem e ao meio ambiente. Por essa raz?o, torna-se necess?ria a
busca de alternativas mais eficientes, de baixo custo e de f?cil utiliza??o, como o uso de
bioinseticidas, especialmente os baculov?rus. Devido ? instabilidade gen?tica durante a
passagem seriada de baculov?rus em cultivo de c?lulas de inseto, o desenvolvimento da
produ??o in vitro de bioinseticidas virais ? o maior desafio para a sua produ??o massal.
Passagens sucessivas de v?rus usando v?rus extracelulares (BVs), necess?rias para o aumento
de escala durante a produ??o de bioinseticida viral, leva ao aparecimento de formas
aberrantes de v?rus, processo conhecido como efeito de passagem . A principal consequ?ncia
do efeito passagem ? a diminui??o da produ??o de corpos de oclus?o (OB), inviabilizando
economicamente sua produ??o pelo processo in vitro. Neste trabalho, foi realizada a
passagem seriada do isolado 18 do baculov?rus Spodoptera frugiperda multiple
nucleopolyhedrovirus em c?lulas Sf21. Foi observada uma queda na produ??o de OB de 170
para 92 da terceira para quarta passagem. Um planejamento experimental fatorial (22) foi
empregado para verificar a influ?ncia de duas vari?veis de entrada, concentra??o de
horm?nio 20- Hidroxiecdisona (CH) e concentra??o de colesterol (CC), sobre os valores das
vari?veis de resposta do processo (produ??o volum?trica e produ??o espec?fica de OB),
procurando definir as faixas ?timas de opera??o para reverter ou minimizar o efeito
passagem. O resultado deste planejamento indicou influ?ncia negativa da adi??o do
colesterol e positiva na adi??o de horm?nio, onde as faixas ?timas encontradas para as
concentra??es estudadas foram: 8 a 10μg/mL e 5 a 6,5μg/mL, para as concentra??es de
colesterol e horm?nio, respectivamente. Novos experimentos foram realizados com a adi??o
individual de horm?nio e colesterol com a finalidade de verificar a influ?ncia destes
adjuvantes na produ??o de OB de forma independente. No planejamento experimental
obteve-se produ??o volum?trica de 9,4 x 107 OB/mL e espec?fica de 128,4 OB/c?lula.
Quando se adicionou 6 μg/mL de 20-Hidroxiecdisona, as concentra??es elevaram-se para 1,9
x 108 OB/mL e 182,9 OB/c?lula, indicando que a adi??o do horm?nio melhorou a efici?ncia
da produ??o in vitro de produ??o de SfMNPV em cultivos de c?lulas Sf21
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufrn.br:123456789/15796 |
| Date | 02 August 2010 |
| Creators | Dantas, Graciana Clecia |
| Contributors | CPF:85203513953, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4797345U9, Almeida, Andr?a Farias de, CPF:02443412490, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4762972A4, Murmann, Lisandra, CPF:75217163020, http://lattes.cnpq.br/8640756170189745, Mac?do, Luciano Pacelli Medeiros de, CPF:02977547428, http://lattes.cnpq.br/1760592154110947, Pedrini, M?rcia Regina da Silva |
| Publisher | Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Programa de P?s-Gradua??o em Engenharia Qu?mica, UFRN, BR, Pesquisa e Desenvolvimento de Tecnologias Regionais |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFRN, instname:Universidade Federal do Rio Grande do Norte, instacron:UFRN |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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