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Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz.Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O Toxoplasma gondiié um protozoário parasito intracelular, agente causador
da toxoplasmose que é uma das zoonoses mais endêmicas do mundo. O T. gondii
possui dois tipos de reprodução: assexuada, que origina dois estágios evolutivos
infectivos, os bradizoítos e taquizoítos e a sexuada que ocorre no tecido epitelial
intestinal, exclusivamente de felídeos, hospedeirosdefinitivos, resultando na
formação de oocistos imaturos que são eliminados nas suas fezes. A disseminação
de oocistos no ambiente é o principal fator que explica a distribuição mundial do
parasito, associada à formação de cistos teciduais que aumentam a capacidade de
transmissão do parasito, através do consumo de carne crua ou mal cozida. Dada a
especificidade de o ciclo sexuado ocorrer no tecidoepitelial, o principal objetivo do
presente trabalho foi investigar, in vitro,a interação do T. gondiicom células
epiteliais oriundas do intestino de ratos e de rim de felídeos, a fim de estabelecer
possíveis correlações entre a origem do tecido (epitelial) e a fonte (rato e felídeos)
que possam determinar o destino intracelular do parasito. Assim, culturas de
linhagens celulares CRFK e IEC-6 foram infectadas com bradizoítos e taquizoítos de
T. gondiicom diferentes cargas infectivas. Após os desenhosexperimentais as
culturas foram processadas como de rotina para microscopia óptica de luz e
fluorescência e para microscopia eletrônica de transmissão e varredura. As análises
quantitativas mostraram que a linhagem CRFK foi mais susceptível à infecção frente
aos dois estágios infectivos do que a linhagem IEC-6 e que essa diferença foi
independente da carga parasitária e do estágio infectivo utilizados. As análises
qualitativas mostraram que a linhagem CRFK foi maissusceptível à infecção do que
a linhagem IEC-6 e esse evento foi independente da carga infectiva utilizada. As
análises qualitativas mostraram que a cistogênese se estabeleceu de forma
espontânea na CRFK quando infectada com bradizoítosda cepa ME49 ao se utilizar
a carga infectiva de 1:10 (parasito-célula hospedeira). Além disso, esta linhagem
celular apontou estágios infectivos morfologicamente distintos de taquizoítos e
bradizoítos, similares aos estágios esquizontes de T. gondii. O presente estudo
mostrou que existem diferenças no destino intracelular do parasito de acordo com o
tipo celular utilizado. O emprego de células epiteliais de felinos como modelo celular
da toxoplasmose experimental mostrou que pode contribuir com novos subsídios
para o estudo da biologia celular do parasito, assim como contribuir como
metodologia alternativa para o melhor entendimento do ciclo enteroepitelial doT.
gondii. Este modelo celular abre um novo campo de investigação para aspectos
moleculares desta interação que possam contribuir, por exemplo, para introdução de
estratégias que venham a interferir em umas das principais vias de disseminação da
toxoplasmose. Além disso, a CRFK se mostrou um modelo celular em potencial para
a produção de cistos de T. gondii in vitroem larga escala abrindo perspectivas na
redução do uso de animais experimentais para isolamento de cistos e inserção na
área de inovação e desenvolvimento tecnológico. / Toxoplasma gondiiis an intracellular protozoan parasite, the causative agent of
toxoplasmosis which is one of the most endemic zoonoses in the world. T. gondiihas
two types of reproduction: the asexual, which leadstwo evolutive infective stages,
the bradyzoites and tachyzoites and the sexual thatoccurs in the intestinal epithelial
tissue, exclusively in cats, the definitive hosts, resulting in the formation of immature
oocysts that are shed in their feces. The spread ofoocysts in the environment is the
main factor that explains the global distribution and dissemination of toxoplasmosis,
leading to the formation of tissue cysts increasingthe parasite capacity of
transmission, through ingestion of raw or undercooked meat. Once the specificity of
the sexual cycle occurs in epithelial tissue, the main objective of this study was to
investigate the in vitrointeraction of T. gondii epithelial cells derived from the
intestine of rats and kidney of cats, in order to establish possible correlations
between the origin of tissue (epithelial) and the source (rats and cats) that may
determine the intracellular fate of the parasite. Thus CRFK and IEC-6 cell lines were
infected with T. gondiibradyzoites and tachyzoites with different infective loads. The
kinetic study of the infective capacity of both stages of the parasites was performed
by fixing cell cultures at different times of interaction, aiming the quantitative analysis
of infection of both cell types fronts of two strains and two infective stages of the
parasite. After the experimental designs cultures were processed as routine for light
microscopy and fluorescence and transmission and scanning electron microscopy.
Quantitative analysis showed that CRFK line was more susceptible to infection than
the IEC-6 line, and that this event was independentof the infective stage or the
infective load used. The qualitative analysis showed that cystogenesis occurred
spontaneously in the CRFK line when infected with the ME49 strain bradyzoites, by
using the load of 1:10. In addition, this cell linepointed to morphologically distinct
stages of tachyzoites and bradyzoites, similar to schizonts stages of T. gondii. The
present study showed that there are differences in the intracellular fate of the
parasite according to the cell type used. The use of feline epithelial cells as cellular
model of experimental toxoplasmosis showed that it can contribute with new insights
for studying the cell biology of the parasite as well as contribute as an alternative
methodology for better understanding T. gondiienteroepithelial cycle. This cellular
model opens a new field of investigation for molecular aspects of this interaction that
can contribute, for example, to introduce strategies that will interfere in one of the
main routes of toxoplasmosis spread. In addition, the CRFK line presented itself as a
potential cellular model for cysts production in vitro in large scale opening
perspectives on reduction in the use of animals forcysts isolation and insertion in
inovation an technological development area.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/6307 |
| Date | January 2011 |
| Creators | Muno, Renata Morley de |
| Contributors | Soeiro, Maria de Nazaré C, Carvalho, Lais de, Seabra, Sergio Henrique, Guimarães, Erick Vaz, DaMatta, Renato Augusto, Barbosa, Helene Santos |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | Renata Morley de Muno, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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