As EPEC típicas apresentam padrão de adesão localizada (LA) em células epiteliais, formando de microcolônias compactas. As EPEC atípicas aderem no padrão de adesão localizada-like (LAL), no qual não se observa microcolônias e que ocorre tardiamente em relação à LA. O objetivo deste estudo foi caracterizar a interação de EPEC atípica que apresenta o padrão LAL com a célula epitelial. A cinética da formação da lesão A/E, característica da patogênese de EPEC, demonstrou um atraso na adesão e na formação da lesão em EPEC atípica, que correspondeu à expressão tardia de Intimina, Tir e EspA. A complementação de EPEC atípica com o regulador perABC antecipou a expressão destes fatores e a formação da lesão A/E. Não foi observada relação entre outras adesinas descritas em DEC com o padrão LAL, bem como a mobilização dos receptores eucarióticos nucleolina e <font face=\"symbol\">b1-Integrina para o foco de adesão. Observou-se a possível interação da Intimina com um peptídeo da membrana da célula epitelial de 300 kDa, podendo tratar-se de um provável receptor para essa adesina. / Typical EPEC exhibit a localized adherence (LA) pattern in epithelial cells, where tight bacterial clusters are produced. Atypical EPEC produce a localized-like (LAL) adhesion pattern, in which the compact clusters are not formed and that occurs in a later stage of the infection. The aim of this study was to characterize the interaction of LAL-adherent atypical EPEC with the epithelial cell. The kinetics of the A/E lesion, the main feature of EPEC pathology, showed a clear delay in its formation by the atypical strains, probably a consequence of the delay observed in the expression of Intimin, Tir and EspA. The complementation of atypical EPEC with the perABC regulator revealed to be effective in not only advancing the expression of these factors, as well the formation of A/E lesion. No correlation was found between the presence of different adhesins already described in DEC and the LAL pattern. The analysis of the possible interaction of Intimin with epithelial cell receptors showed the presence of a 300 kDa peptide that it seems to interact with this adhesin.

As EPEC típicas apresentam padrão de adesão localizada (LA) em células epiteliais, formando de microcolônias compactas. As EPEC atípicas aderem no padrão de adesão localizada-like (LAL), no qual não se observa microcolônias e que ocorre tardiamente em relação à LA. O objetivo deste estudo foi caracterizar a interação de EPEC atípica que apresenta o padrão LAL com a célula epitelial. A cinética da formação da lesão A/E, característica da patogênese de EPEC, demonstrou um atraso na adesão e na formação da lesão em EPEC atípica, que correspondeu à expressão tardia de Intimina, Tir e EspA. A complementação de EPEC atípica com o regulador perABC antecipou a expressão destes fatores e a formação da lesão A/E. Não foi observada relação entre outras adesinas descritas em DEC com o padrão LAL, bem como a mobilização dos receptores eucarióticos nucleolina e <font face=\"symbol\">b1-Integrina para o foco de adesão. Observou-se a possível interação da Intimina com um peptídeo da membrana da célula epitelial de 300 kDa, podendo tratar-se de um provável receptor para essa adesina. / Typical EPEC exhibit a localized adherence (LA) pattern in epithelial cells, where tight bacterial clusters are produced. Atypical EPEC produce a localized-like (LAL) adhesion pattern, in which the compact clusters are not formed and that occurs in a later stage of the infection. The aim of this study was to characterize the interaction of LAL-adherent atypical EPEC with the epithelial cell. The kinetics of the A/E lesion, the main feature of EPEC pathology, showed a clear delay in its formation by the atypical strains, probably a consequence of the delay observed in the expression of Intimin, Tir and EspA. The complementation of atypical EPEC with the perABC regulator revealed to be effective in not only advancing the expression of these factors, as well the formation of A/E lesion. No correlation was found between the presence of different adhesins already described in DEC and the LAL pattern. The analysis of the possible interaction of Intimin with epithelial cell receptors showed the presence of a 300 kDa peptide that it seems to interact with this adhesin.

Submitted by Tatiana Silva (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2013-02-08T13:30:15Z No. of bitstreams: 1 renata_m_muno_ioc_bcm_0063_2011.pdf: 80505015 bytes, checksum: 41503f5b6c3aed2807dcf9752212e9f1 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-02-08T13:30:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 renata_m_muno_ioc_bcm_0063_2011.pdf: 80505015 bytes, checksum: 41503f5b6c3aed2807dcf9752212e9f1 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz.Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O Toxoplasma gondiié um protozoário parasito intracelular, agente causador da toxoplasmose que é uma das zoonoses mais endêmicas do mundo. O T. gondii possui dois tipos de reprodução: assexuada, que origina dois estágios evolutivos infectivos, os bradizoítos e taquizoítos e a sexuada que ocorre no tecido epitelial intestinal, exclusivamente de felídeos, hospedeirosdefinitivos, resultando na formação de oocistos imaturos que são eliminados nas suas fezes. A disseminação de oocistos no ambiente é o principal fator que explica a distribuição mundial do parasito, associada à formação de cistos teciduais que aumentam a capacidade de transmissão do parasito, através do consumo de carne crua ou mal cozida. Dada a especificidade de o ciclo sexuado ocorrer no tecidoepitelial, o principal objetivo do presente trabalho foi investigar, in vitro,a interação do T. gondiicom células epiteliais oriundas do intestino de ratos e de rim de felídeos, a fim de estabelecer possíveis correlações entre a origem do tecido (epitelial) e a fonte (rato e felídeos) que possam determinar o destino intracelular do parasito. Assim, culturas de linhagens celulares CRFK e IEC-6 foram infectadas com bradizoítos e taquizoítos de T. gondiicom diferentes cargas infectivas. Após os desenhosexperimentais as culturas foram processadas como de rotina para microscopia óptica de luz e fluorescência e para microscopia eletrônica de transmissão e varredura. As análises quantitativas mostraram que a linhagem CRFK foi mais susceptível à infecção frente aos dois estágios infectivos do que a linhagem IEC-6 e que essa diferença foi independente da carga parasitária e do estágio infectivo utilizados. As análises qualitativas mostraram que a linhagem CRFK foi maissusceptível à infecção do que a linhagem IEC-6 e esse evento foi independente da carga infectiva utilizada. As análises qualitativas mostraram que a cistogênese se estabeleceu de forma espontânea na CRFK quando infectada com bradizoítosda cepa ME49 ao se utilizar a carga infectiva de 1:10 (parasito-célula hospedeira). Além disso, esta linhagem celular apontou estágios infectivos morfologicamente distintos de taquizoítos e bradizoítos, similares aos estágios esquizontes de T. gondii. O presente estudo mostrou que existem diferenças no destino intracelular do parasito de acordo com o tipo celular utilizado. O emprego de células epiteliais de felinos como modelo celular da toxoplasmose experimental mostrou que pode contribuir com novos subsídios para o estudo da biologia celular do parasito, assim como contribuir como metodologia alternativa para o melhor entendimento do ciclo enteroepitelial doT. gondii. Este modelo celular abre um novo campo de investigação para aspectos moleculares desta interação que possam contribuir, por exemplo, para introdução de estratégias que venham a interferir em umas das principais vias de disseminação da toxoplasmose. Além disso, a CRFK se mostrou um modelo celular em potencial para a produção de cistos de T. gondii in vitroem larga escala abrindo perspectivas na redução do uso de animais experimentais para isolamento de cistos e inserção na área de inovação e desenvolvimento tecnológico. / Toxoplasma gondiiis an intracellular protozoan parasite, the causative agent of toxoplasmosis which is one of the most endemic zoonoses in the world. T. gondiihas two types of reproduction: the asexual, which leadstwo evolutive infective stages, the bradyzoites and tachyzoites and the sexual thatoccurs in the intestinal epithelial tissue, exclusively in cats, the definitive hosts, resulting in the formation of immature oocysts that are shed in their feces. The spread ofoocysts in the environment is the main factor that explains the global distribution and dissemination of toxoplasmosis, leading to the formation of tissue cysts increasingthe parasite capacity of transmission, through ingestion of raw or undercooked meat. Once the specificity of the sexual cycle occurs in epithelial tissue, the main objective of this study was to investigate the in vitrointeraction of T. gondii epithelial cells derived from the intestine of rats and kidney of cats, in order to establish possible correlations between the origin of tissue (epithelial) and the source (rats and cats) that may determine the intracellular fate of the parasite. Thus CRFK and IEC-6 cell lines were infected with T. gondiibradyzoites and tachyzoites with different infective loads. The kinetic study of the infective capacity of both stages of the parasites was performed by fixing cell cultures at different times of interaction, aiming the quantitative analysis of infection of both cell types fronts of two strains and two infective stages of the parasite. After the experimental designs cultures were processed as routine for light microscopy and fluorescence and transmission and scanning electron microscopy. Quantitative analysis showed that CRFK line was more susceptible to infection than the IEC-6 line, and that this event was independentof the infective stage or the infective load used. The qualitative analysis showed that cystogenesis occurred spontaneously in the CRFK line when infected with the ME49 strain bradyzoites, by using the load of 1:10. In addition, this cell linepointed to morphologically distinct stages of tachyzoites and bradyzoites, similar to schizonts stages of T. gondii. The present study showed that there are differences in the intracellular fate of the parasite according to the cell type used. The use of feline epithelial cells as cellular model of experimental toxoplasmosis showed that it can contribute with new insights for studying the cell biology of the parasite as well as contribute as an alternative methodology for better understanding T. gondiienteroepithelial cycle. This cellular model opens a new field of investigation for molecular aspects of this interaction that can contribute, for example, to introduce strategies that will interfere in one of the main routes of toxoplasmosis spread. In addition, the CRFK line presented itself as a potential cellular model for cysts production in vitro in large scale opening perspectives on reduction in the use of animals forcysts isolation and insertion in inovation an technological development area.

The Polycomb group (PcG) family of proteins form chromatin-modifying complexes essential for embryonic development, and stem cell renewal and are commonly deregulated in cancer. There are several reports that address the possible implication of PcG proteins in tumor progression and metastasis, but very little is known about the specific role of these proteins in tumor progression and invasion. On the other hand, the molecular processes of the worst cancer prognosis, metastasis, which leads to an incurable disease, are yet incompletely elucidated. Here we show a role for Ring1B, a PcG protein, in three processes related to metastasis: in the Epithelial-mesenchymal transition (EMT), a critical morphogenic event that occurs during embryonic development and during the progression of various epithelial tumors, an in the migration and the invasion of mammary epithelial cells. / Las proteínas del grupo Polycomb (PcG) forman complejos modificadores de la cromatina esenciales en el desarrollo embrionario y en la renovación de las células madre, y su desregulación ha sido asociada al cáncer. Varios estudios muestran la posible implicación de las proteínas de PcG en la progresión tumoral y en la metástasis, pero a pesar de ello se sabe muy poco de los procesos moleculares en los que estas proteínas están participando. Por otro lado, los procesos moleculares responsables del peor pronóstico en cáncer, la metástasis, que continua siendo una enfermedad incurable, siguen sin estar completamente elucidados. En esta disertación mostramos el papel de Ring1B, una proteína del PcG, en tres procesos implicados en la metástasis: en la transición epitelio-mesénquima (EMT), un proceso morfogénico crítico en el desarrollo embrionario y durante la progresión de varios cánceres epiteliales, y en la migración y la invasión de las células epiteliales mamarias.